目的探討脫細胞結膜的制備方法,并觀察其移植修復兔結膜缺損的可行性。方法1.脫細胞結膜基質的制備取新鮮豬球結膜（宰后3小時,其僅含少許結膜下組織）先用0.2%戊二醛處理5min,再用0.25%胰酶/0.02%EDTA、1%TritonX-100、或兩者聯(lián)合進行脫細胞處理,根據(jù)DAPI染色結果篩選出合適的結膜脫細胞方法,脫細胞處理后,將結膜置于超凈臺內通風干燥、紫外消毒8h備用。2.脫細胞結膜基質的相關檢測使用可見分光光度計檢測檢測脫細胞結膜基質的透光性,細菌、真菌培養(yǎng)行微生物檢測,免疫組織化學法檢測其抗原性,MTT法檢測細胞毒性。3.異種脫細胞結膜作為移植材料,修復兔結膜缺損的應用（1）兔結膜缺損動物模型的建立游離去除實驗兔鼻上方約20mm×8mm球結膜、筋膜,并剪除對應部分瞼結膜。（2）移植材料的動物模型隨機將20只新西蘭大白兔分成4組,每組5只。A組移植制備的脫細胞結膜基質;B組移植羊膜;C組移植未脫細胞異種結膜;D組不給予治療。術后3天,1周,2周,行結膜熒光素鈉染色大體觀察對照組及實驗組結膜愈合、結膜囊狹窄、結膜粘連和血管化情況;術后1周,2周,6周取材處死實驗組兔分別行HE染色... 

【文章來源】：濟南大學山東省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

脫細胞結膜基質的大體像

濟南大學碩士學位論文表 1 脫細胞結膜基質與去上皮羊膜的吸光度及透光度波長（nm）脫細胞結膜基質 去上皮羊膜吸光度 透光度 吸光度 透光度4005006007000.354 0.646 0.583 0.4170.346 0.654 0.532 0.4680.283 0.717 0.461 0.5390.178 0.822 0.357 0.643800 0.013 0.987 0.192 0.808

圖 4 脫細胞結膜基質脫細胞結膜基質的抗原性檢測結果（200 倍） A 未脫細胞的 PCK 抗原表達 B 未脫細胞結膜的陰性對照 C 脫細胞結膜基質無 PCK 抗原表達 D的陰性對照脫細胞豬結膜基質中無 PCK 抗原的表達（圖 4C），而未脫細胞的豬結顆粒的 PCK 抗原的表達（圖 4A）。2.4 脫細胞結膜基質的細胞毒性試驗（MTT 法）測量各組培養(yǎng) 1 天、3 天、5 天、7 天之后的吸光度（A）值，并根據(jù)結過統(tǒng)計分析，實驗組與陰性對照組 P 值為 0.729，結果無統(tǒng)計學意義，即組無差異。繪制細胞增殖曲線（圖 5）。以上結果顯示實驗組與對照組的細好，二者無明顯差異。證明脫細胞豬結膜基質無細胞毒性，具有良好的細根據(jù)實驗組、陰性對照組及空白對照組的 A 值計算出細胞 RGR，對照性分級標準表格，得出脫細胞豬結膜基質毒性為 1 級，合格，見表 2。

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3286482