本文關(guān)鍵詞：口服心肌細(xì)胞培養(yǎng)液凍干物對人鼻咽癌裸鼠移植瘤生長抑制的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:比較不同濃度的心肌細(xì)胞培養(yǎng)液(cardicac muscle cell culture medium,CMCM)對鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的增殖活性的影響,初步確定CMCM體外抑瘤效應(yīng)的有效濃度。通過初步研究CMCM對鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的體外遷移能力的影響,為其對腫瘤細(xì)胞體內(nèi)遷移能力影響的后期實(shí)驗(yàn)研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。初步觀察口服CMCM凍干物對人鼻咽癌裸鼠移植瘤的生長、凋亡以及對裸鼠體重的影響,分析口服給藥方式的可行性和有效性,以及可能的不良反應(yīng),為將來CMCM凍干物的口服給藥途徑在惡性腫瘤治療的臨床應(yīng)用中提供科學(xué)的理論依據(jù)。方法:1、采用雙酶消化法原代培養(yǎng)Wistar乳鼠的心肌細(xì)胞,并收集對數(shù)生長期的細(xì)胞上清液,即Wistar乳鼠的CMCM。用截留分子量為10KD的超濾離心管以4000轉(zhuǎn)/分超低溫離心10min,收集分子量小于10KD的濾液。用直徑為0.22μm的濾菌器過濾除菌后冷凍干燥成干粉,-20℃保存?zhèn)溆谩?、采用MTT法觀察不同濃度的CMCM對鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的增殖活性的影響,找出其有效的抑瘤濃度;然后利用MTT法確定的有效抑瘤濃度進(jìn)行劃痕實(shí)驗(yàn),24h后觀察CMCM對鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的體外遷移能力的影響。3、采用細(xì)胞懸液接種法建立人鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的BALB/C裸鼠移植瘤模型。當(dāng)瘤體積平均值達(dá)100mm3左右時(shí),將42只荷瘤裸鼠隨機(jī)分為7組:腹腔陰性對照組(25ml/kg生理鹽水;normal saline,NS)、腹腔CMCM組(15mg/kg的CMCM溶于25ml/kg的NS中)、腹腔陽性對照組(2mg/kg的順鉑溶于25ml/kg的NS中;cisplatin,DDP)、灌胃陰性對照組(25ml/kg的NS)、灌胃CMCM低劑量組(30mg/kg的CMCM凍干物溶于25ml/kg的NS中)、灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg的CMCM凍干物溶于25ml/kg的NS中)和灌胃CMCM高劑量組(120mg/kg的CMCM凍干物溶于25ml/kg的NS中),每組6只,同時(shí)根據(jù)分組要求開始給藥。各組裸鼠采用每天灌胃給藥的方式給予一次相應(yīng)濃度的CMCM或NS,共14天。給藥期間每3天測一次裸鼠體重和腫瘤體積。停藥24小時(shí)后處死裸鼠,迅速將鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的移植瘤分離并稱瘤重,計(jì)算抑瘤率。采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)檢測移植瘤組織中的細(xì)胞凋亡情況,Ki67免疫組化染色法檢測瘤組織中腫瘤細(xì)胞的增殖情況。結(jié)果:1、MTT結(jié)果顯示:作用鼻咽癌CNE-2細(xì)胞48h后,1:4稀釋的心肌細(xì)胞培養(yǎng)液(1/4CMCM)、1:8稀釋的心肌細(xì)胞培養(yǎng)液(1/8CMCM)和1:16稀釋的心肌細(xì)胞培養(yǎng)液(1/16CMCM)對鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的存活率與陰性對照組比較有增加的趨勢(P0.05),而1:2稀釋的心肌細(xì)胞培養(yǎng)液(1/2CMCM)組和心肌細(xì)胞培養(yǎng)液原液(1/1CMCM)組中鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的存活率與陰性對照組比較有降低的趨勢(P0.05),表明一定濃度的CMCM可以在體外抑制鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的增殖。2、劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:作用鼻咽癌CNE-2細(xì)胞24h后,1/1CMCM和1/2CMCM組與陰性組相比,細(xì)胞遷移距離更短,遷移速度更緩慢(P0.05)。但是,這兩組間的細(xì)胞遷移距離比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),表明一定濃度的CMCM可以體外抑制鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的遷移。3、雖然在給藥后的實(shí)驗(yàn)觀察期間,各組人鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的裸鼠移植瘤的腫瘤體積均出現(xiàn)逐漸增加的趨勢,但是在給藥后的第3天開始,腹腔CMCM組(15mg/kg)、腹腔陽性對照組(DDP 2mg/kg)、灌胃CMCM低劑量組(30mg/kg)、灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg和灌胃CMCM高劑量組(120mg/kg)中的瘤體積與腹腔陰性對照組或灌胃陰性對照組相比,腫瘤體積增長速度就已經(jīng)明顯減慢(P0.05),而對等同劑量下的腹腔CMCM組(15mg/kg)與灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)的瘤體積進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),在第3天、12天和15天存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4、停藥后,處死裸鼠,稱取各組移植瘤的瘤重,發(fā)現(xiàn)與腹腔陰性對照組或灌胃陰性對照組的瘤重相比,腹腔CMCM組(15mg/kg)、腹腔陽性對照組(DDP 2mg/kg)、灌胃CMCM低劑量組(30mg/kg)、灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)和灌胃CMCM高劑量組(120mg/kg)的瘤重較輕。且對等同劑量下的腹腔CMCM組(15mg/kg)與灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)的瘤重進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)的腫瘤組織重量明顯減輕(P0.05),但抑瘤率無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。這些結(jié)果表明,口服CMCM凍干物可以抑制人鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤的生長。5、在實(shí)驗(yàn)觀察期間,各組裸鼠的體重均有所增加,只有腹腔陽性對照組(DDP2mg/kg)的體重增加不明顯,與腹腔陰性對照組相比,存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),其余各小組之間的裸鼠體重之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),表明口服CMCM各劑量組的凍干物對移植了人鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的裸鼠體重增長無影響,其可能是一種具有生物安全性的抗腫瘤物質(zhì)。6、Ki67免疫組化的結(jié)果顯示:腹腔陰性對照組的Ki67陽性細(xì)胞百分率為71.38±1.21%,腹腔CMCM組(15mg/kg)和腹腔陽性對照組(DDP 2mg/kg)的Ki67陽性細(xì)胞百分率分別為48.86±2.13%、25.55±3.2%。與腹腔陰性對照組相比,其余腹腔各組的Ki67表達(dá)率均降低(P0.05)。而灌胃陰性對照組的Ki67陽性細(xì)胞百分率為75.70±7.17%,灌胃CMCM低劑量組(30mg/kg)、灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)和灌胃CMCM高劑量組(120mg/kg)的Ki67陽性細(xì)胞百分率分別為60.65±4.23%、51.04±4.58%、41.42±8.24%。與灌胃陰性對照組相比,灌胃CMCM各劑量組的Ki67表達(dá)率均降低(P0.05),且將CMCM各劑量組之間進(jìn)行差異比較,發(fā)現(xiàn)Ki67陽性細(xì)胞百分率有隨劑量的增加而降低的趨勢(P0.05)。表明口服心肌細(xì)胞培養(yǎng)液凍干物可以在體內(nèi)抑制人鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的增殖作用。但是,對等同劑量下的腹腔CMCM組(15mg/kg)與灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)的Ki67陽性細(xì)胞百分率進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),兩者之間沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。7、TUNEL結(jié)果顯示:腹腔陰性對照組的細(xì)胞凋亡百分率為17.67±6.22%,腹腔CMCM組(15mg/kg)和腹腔陽性對照組(DDP 2mg/kg)的細(xì)胞凋亡百分率分別為42.01±6.74%、70.7±6.32%,與腹腔陰性對照組相比,其余各組的凋亡細(xì)胞數(shù)均增加(P0.05)。而灌胃陰性對照組的細(xì)胞凋亡百分率為18.63±3.59%,灌胃CMCM低劑量組(30mg/kg)、灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)和灌胃CMCM高劑量組(120mg/kg)的細(xì)胞凋亡百分率分別為30.23±6.02%、51.63±11.09%、60.61±8.71%,與灌胃陰性對照組相比,灌胃CMCM各劑量組的凋亡細(xì)胞數(shù)均增加(P0.05)。表明口服CMCM凍干物可以促進(jìn)人鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤的細(xì)胞凋亡作用。但是,對等同劑量下的腹腔CMCM組(15mg/kg)與灌胃CMCM中劑量組(60mg/kg)的細(xì)胞凋亡百分率進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),兩者之間沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:1、心肌細(xì)胞培養(yǎng)液可以體外抑制鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的增殖和遷移。2、心肌細(xì)胞培養(yǎng)液可能是一種安全有效的天然抑瘤物,通過口服其凍干物可表現(xiàn)出良好的抗腫瘤作用。3、口服心肌細(xì)胞培養(yǎng)液凍干物可以抑制人鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的裸鼠移植瘤的生長,其抗腫瘤機(jī)制可能與抑制腫瘤細(xì)胞增殖和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：心肌細(xì)胞培養(yǎng)液 鼻咽癌細(xì)胞 裸鼠 細(xì)胞遷移 細(xì)胞增殖 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 中文摘要4-9
• 英文摘要9-15
• 前言15-18
• 材料與方法18-31
• 結(jié)果31-48
• 討論48-55
• 結(jié)論55-56
• 參考文獻(xiàn)56-67
• 英漢縮略詞對照表67-68
• 致謝68-69
• 心房利鈉肽原的不同肽段的抗腫瘤機(jī)制（綜述）69-81
• 參考文獻(xiàn)77-81

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 姜?jiǎng)P,黃志強(qiáng);細(xì)胞間的相互作用與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移研究進(jìn)展[J];腫瘤防治雜志;2003年05期

2 ;Suppression of matrix metalloproteinase-2 via RNA interference inhibits pancreatic carcinoma cell invasiveness and adhesion[J];World Journal of Gastroenterology;2009年09期

  本文關(guān)鍵詞：口服心肌細(xì)胞培養(yǎng)液凍干物對人鼻咽癌裸鼠移植瘤生長抑制的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：326386