本文關(guān)鍵詞：急性缺氧對SD乳鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元鉀電流的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究急性缺氧(acute hypoxia)對短期分離培養(yǎng)的SD乳鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元(spiral ganglion neurons,SGNs)鉀通道電流的影響。從聽覺神經(jīng)元信息傳遞功能變化的角度,為缺氧性內(nèi)耳損害導致聽覺障礙提供進一步的理論依據(jù)。方法:(1)短期分離培養(yǎng)SD乳鼠SGNs并鑒定。(2)應用全細胞膜片鉗技術(shù)觀察急性缺氧對SGNs外向電流的作用。(3)分別應用不同的通道阻斷劑TEA和4-AP觀察急性缺氧對SGNs外向電流的影響。(4)應用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測急性缺氧時與鉀通道相關(guān)的胞內(nèi)第二信使c AMP和c GMP水平的變化。結(jié)果:(1)酶解分離可獲得生存狀態(tài)良好的神經(jīng)元,經(jīng)免疫熒光鑒定為SGNs。(2)SGNs外向電流為電壓門控外向整流電流,主要包括對TEA敏感的大電導鈣激活鉀通道(Large conductance Ca2+-activated K+channe,BKCa)電流和對4-AP敏感的電壓依賴性鉀離子通道(Voltage-gated K+channels,KV)電流。(3)當鉗制電壓在-60m V時,急性缺氧電壓依賴性地增強SGNs外向電流,主要增強0~+60 m V電壓區(qū)間的激活電流幅度。缺氧致5min時,外向電流幅度增強最大,+60m V電流幅度與對照組基礎(chǔ)電流相比由(971.23±50.25)p A增加到(2361±207.4)p A(n=6,P0.01)。缺氧5-10min時,增強幅度呈下降趨勢。缺氧11-15min對外向電流的增強作用基本消失,與正常對照組相比無統(tǒng)計學差異(n=6,P0.05)。(4)背景灌流TEA(1 mmol/L),缺氧引起的SGNs外向電流增強作用明顯降低,灌流4-AP(1 mmol/L)后,對缺氧引起的SGNs外向電流的增強無明顯作用。(5)分別檢測缺氧5 min,15 min,20 min后SGNs中c AMP和c GMP的含量變化。缺氧5 min組與正常對照組相比,c AMP濃度明顯升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。缺氧15 min組與正常對照組相比,c AMP濃度變化無統(tǒng)計學差異(P0.05);缺氧20 min組與正常組相比,c AMP水平下降(P0.01)。c GMP濃度隨著缺氧時間的延長,總體呈下降趨勢(P0.01),但在20 min后有部分回升(P0.01,缺氧15 min vs缺氧20 min)。結(jié)論:SD乳鼠SGNs急性缺氧可能通過激活大電導鈣激活鉀通道(BKCa),增強K+外向電流,使神經(jīng)元膜電位超極化,細胞興奮性降低,從而影響SGNs傳導功能。該變化可能與細胞內(nèi)第二信使c AMP和c GMP相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：急性缺氧 SGN 大電導鈣激活鉀通道 cAMP cGMP
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R764.4
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-11
• 材料和方法11-18
• 1 材料11-13
• 1.1 實驗動物11
• 1.2 主要實驗試劑、耗材11-12
• 1.3 主要實驗儀器12-13
• 2 方法13-18
• 2.1 SGNs 的分離與原代培養(yǎng)13
• 2.2 SGNs免疫熒光鑒定13-14
• 2.3 溶液及主要實驗藥品的配置14-15
• 2.4 玻璃微電極制備15
• 2.5 細胞急性缺氧模型的制備15
• 2.6 全細胞膜片鉗記錄技術(shù)15-16
• 2.7 酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測16-17
• 2.8 統(tǒng)計學方法17-18
• 結(jié)果18-28
• 1 SGNs培養(yǎng)與免疫熒光鑒定結(jié)果18-20
• 1.1 SGNs 的培養(yǎng)18
• 1.2 SGNs 的免疫熒光鑒定18-20
• 2 全細胞膜片鉗實驗結(jié)果20-26
• 2.1 SGNs外向電流的主要成分20-22
• 2.2 缺氧時程對SGNs外向電流的影響22-23
• 2.3 四乙胺（TEA）阻斷缺氧增強的外向電流23-25
• 2.4 氨基吡啶（4-AP）對缺氧增強的外向電流無明顯作用25-26
• 3 ELISA檢測缺氧不同時間胞內(nèi)cAMP和cGMP的含量變化實驗結(jié)果26-28
• 3.1 胞內(nèi)第二信使cAMP濃度隨缺氧時間的變化26
• 3.2 胞內(nèi)第二信使cGMP濃度隨缺氧時間的變化26-28
• 討論28-32
• 結(jié)論和展望32-33
• 參考文獻33-37
• 文獻綜述37-45
• 參考文獻42-45
• 致謝45-46
• 作者簡介46-47
• 導師評閱表47

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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  本文關(guān)鍵詞：急性缺氧對SD乳鼠耳蝸螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元鉀電流的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：326055