目的旨在探索microRNA-200c（miR-200c）對鼻咽癌細(xì)胞增殖和遷移的影響,探索miR-200c下游靶基因以及二者之間的靶向調(diào)控關(guān)系,從而闡明miR-200c對鼻咽癌生物學(xué)功能影響的具體分子調(diào)控機(jī)制。方法1.RT-qPCR方法檢測miR-200c在鼻咽癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)。2.構(gòu)建并驗(yàn)證miR-200c抑制性載體miR-200c-inhibitor（miR-200c-in）轉(zhuǎn)染效率。3.MTT和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測miR-200c對腫瘤細(xì)胞增殖能力的影響。4.Transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測miR-200c對腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響。5.靶基因預(yù)測及篩選,熒光素酶報告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證miR-200c的下游靶基因。6.RT-qPCR和Western blotting檢測miR-200c靶基因DACH1的mRNA和蛋白表達(dá)。7.Western blotting檢測Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果1.miR-200c在鼻咽癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)情況:我們檢測了36對鼻咽癌組織和鄰近的正常組織,結(jié)果表明:miR-200c在癌組織中的表達(dá)明顯高于正常組織。同時,與正常鼻... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中英文縮略詞對照表
中文摘要
英文摘要
前言
    1.鼻咽癌
        1.1 鼻咽癌的病因和臨床表現(xiàn)
        1.2 鼻咽癌的病理變化
        1.3 鼻咽癌相關(guān)腫瘤標(biāo)志物
        1.4 鼻咽癌的治療
    2.微小RNA（micro-RNA，miRNA）
        2.1 微小RNA（miRNA）的概述
        2.2 miRNA的基因組定位及作用
        2.3 miRNA與惡性腫瘤
    3.micro-RNA與鼻咽癌
        3.1 鼻咽癌中的miRNA的研究進(jìn)展
        3.2 miRNA-200 家族
    4.本研究需要解決的問題
第一部分 miR-200c在鼻咽癌中的表達(dá)及其對腫瘤細(xì)胞增殖和遷移的影響
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 組織標(biāo)本
        1.2 細(xì)胞株
        1.3 主要儀器設(shè)備
        1.4 主要試劑材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 0.25%胰酶消化液-EDTA的配制
        2.2 鼻咽癌細(xì)胞的復(fù)蘇、換液、傳代、凍存
        2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.4 實(shí)時定量PCR
        2.5 MTT實(shí)驗(yàn)
        2.6 平板克隆形成實(shí)驗(yàn)
        2.7 Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.8 劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.9 統(tǒng)計學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 總RNA提取及質(zhì)量鑒定
        3.2 miRNA表達(dá)結(jié)果分析
        3.3 在鼻咽癌組織和細(xì)胞系中檢測miR-200c
        3.4 miR-200c inhibitor的轉(zhuǎn)染效率驗(yàn)證
        3.5 miR-200c對腫瘤細(xì)胞增殖能力的影響
        3.6 miR-200c對腫瘤細(xì)胞增殖能力的影響
        3.7 miR-200c對腫瘤細(xì)胞遷移能力的影響
    4.討論
第二部分 miR-200c靶基因的預(yù)測與驗(yàn)證
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 生物信息學(xué)預(yù)測分析
        2.2 pMIR-Report-DACH1/mut-3’UTR重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.3 RT-qPCR檢測DACH1轉(zhuǎn)染miR-200c-in后mRNA表達(dá)
        2.4 W-B實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證DACH1轉(zhuǎn)染miR-200c-in后蛋白表達(dá)
    3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析
        3.2 DACH1 mRNA的表達(dá)情況
        3.3 DACH1蛋白的表達(dá)情況
    4.討論
第三部分 miR-200c靶向調(diào)控DACH1經(jīng)由Wnt/β-catenin信號通路促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞增殖和遷移的機(jī)制研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑的制備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 W-B實(shí)驗(yàn)檢測Wnt/β-catenin信號通路蛋白表達(dá)
    3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 miR-200c低表達(dá)對c-Myc蛋白的影響
        3.2 miR-200c低表達(dá)Wnt/β-catenin信號通路的影響
    4.討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]應(yīng)用微陣列芯片分析結(jié)腸癌組織中miRNA差異性表達(dá)[J]. 馬欽,楊烈,王存,于永揚(yáng),周斌,周總光.  四川大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2011(03)
[2]The prevalence and prevention of nasopharyngeal carcinoma in China[J]. Malcolm J. Simons.  癌癥. 2011(02)

碩士論文
[1]Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在人參多糖誘導(dǎo)人鼻咽癌細(xì)胞凋亡中所起作用的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 范家銘.重慶醫(yī)科大學(xué) 2014



本文編號：3205946