發(fā)布時間：2021-05-25 20:18

　　目的旨在探索microRNA-200c（miR-200c）對鼻咽癌細胞增殖和遷移的影響,探索miR-200c下游靶基因以及二者之間的靶向調(diào)控關系,從而闡明miR-200c對鼻咽癌生物學功能影響的具體分子調(diào)控機制。方法1.RT-qPCR方法檢測miR-200c在鼻咽癌組織及細胞系中的表達。2.構建并驗證miR-200c抑制性載體miR-200c-inhibitor（miR-200c-in）轉染效率。3.MTT和平板克隆形成實驗檢測miR-200c對腫瘤細胞增殖能力的影響。4.Transwell和劃痕實驗檢測miR-200c對腫瘤細胞遷移能力的影響。5.靶基因預測及篩選,熒光素酶報告實驗驗證miR-200c的下游靶基因。6.RT-qPCR和Western blotting檢測miR-200c靶基因DACH1的mRNA和蛋白表達。7.Western blotting檢測Wnt/β-catenin信號通路相關蛋白的表達。結果1.miR-200c在鼻咽癌組織及細胞系中的表達情況:我們檢測了36對鼻咽癌組織和鄰近的正常組織,結果表明:miR-200c在癌組織中的表達明顯高于正常組織。同時,與正常鼻... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中英文縮略詞對照表
中文摘要
英文摘要
前言
    1.鼻咽癌
        1.1 鼻咽癌的病因和臨床表現(xiàn)
        1.2 鼻咽癌的病理變化
        1.3 鼻咽癌相關腫瘤標志物
        1.4 鼻咽癌的治療
    2.微小RNA（micro-RNA，miRNA）
        2.1 微小RNA（miRNA）的概述
        2.2 miRNA的基因組定位及作用
        2.3 miRNA與惡性腫瘤
    3.micro-RNA與鼻咽癌
        3.1 鼻咽癌中的miRNA的研究進展
        3.2 miRNA-200 家族
    4.本研究需要解決的問題
第一部分 miR-200c在鼻咽癌中的表達及其對腫瘤細胞增殖和遷移的影響
    1 實驗材料
        1.1 組織標本
        1.2 細胞株
        1.3 主要儀器設備
        1.4 主要試劑材料
    2 實驗方法
        2.1 0.25%胰酶消化液-EDTA的配制
        2.2 鼻咽癌細胞的復蘇、換液、傳代、凍存
        2.3 細胞轉染
        2.4 實時定量PCR
        2.5 MTT實驗
        2.6 平板克隆形成實驗
        2.7 Transwell實驗
        2.8 劃痕實驗
        2.9 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結果
        3.1 總RNA提取及質(zhì)量鑒定
        3.2 miRNA表達結果分析
        3.3 在鼻咽癌組織和細胞系中檢測miR-200c
        3.4 miR-200c inhibitor的轉染效率驗證
        3.5 miR-200c對腫瘤細胞增殖能力的影響
        3.6 miR-200c對腫瘤細胞增殖能力的影響
        3.7 miR-200c對腫瘤細胞遷移能力的影響
    4.討論
第二部分 miR-200c靶基因的預測與驗證
    1 實驗材料
        1.1 細胞株
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑的配制
    2 實驗方法
        2.1 生物信息學預測分析
        2.2 pMIR-Report-DACH1/mut-3’UTR重組質(zhì)粒的構建
        2.3 RT-qPCR檢測DACH1轉染miR-200c-in后mRNA表達
        2.4 W-B實驗驗證DACH1轉染miR-200c-in后蛋白表達
    3.實驗結果
        3.1 雙熒光素酶實驗結果分析
        3.2 DACH1 mRNA的表達情況
        3.3 DACH1蛋白的表達情況
    4.討論
第三部分 miR-200c靶向調(diào)控DACH1經(jīng)由Wnt/β-catenin信號通路促進鼻咽癌細胞增殖和遷移的機制研究
    1 實驗材料
        1.1 細胞株
        1.2 主要儀器
        1.3 主要試劑
        1.4 主要試劑的制備
    2 實驗方法
        2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2 W-B實驗檢測Wnt/β-catenin信號通路蛋白表達
    3.實驗結果
        3.1 miR-200c低表達對c-Myc蛋白的影響
        3.2 miR-200c低表達Wnt/β-catenin信號通路的影響
    4.討論
結論
參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]應用微陣列芯片分析結腸癌組織中miRNA差異性表達[J]. 馬欽,楊烈,王存,于永揚,周斌,周總光.  四川大學學報(醫(yī)學版). 2011(03)
[2]The prevalence and prevention of nasopharyngeal carcinoma in China[J]. Malcolm J. Simons.  癌癥. 2011(02)

碩士論文
[1]Wnt/β-catenin信號轉導通路在人參多糖誘導人鼻咽癌細胞凋亡中所起作用的實驗研究[D]. 范家銘.重慶醫(yī)科大學 2014



本文編號：3205946