目的:瞬時(shí)受體電位黏蛋白-1（TRPML1）在視網(wǎng)膜組織含量較高,其中在外核層表達(dá)量最高。它不僅介導(dǎo)自噬激活和活性氧清除,其缺失還會(huì)導(dǎo)致光感受器細(xì)胞損傷以及視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良。本實(shí)驗(yàn)通過大鼠視網(wǎng)膜脫離模型的建立以及TRPML1激動(dòng)劑ML-SA1的干預(yù),研究瞬時(shí)受體電位黏蛋白-1對實(shí)驗(yàn)性視網(wǎng)膜脫離后光感受器細(xì)胞的作用及其機(jī)制。方法:首先將健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組（Normal）、單純視網(wǎng)膜脫離對照組（RD）、激動(dòng)劑溶劑對照組（DMSO）、激動(dòng)劑組（ML-SA1）。除Normal組外,其余三組均通過視網(wǎng)膜下注射透明質(zhì)酸鈉建立視網(wǎng)膜脫離模型;在模型建立的同時(shí),使用微量進(jìn)樣器將DMSO和ML-SA1分別注入到DMSO組和ML-SA1組大鼠的視網(wǎng)膜下方;通過蘇木精—伊紅染色（HE）觀察各組視網(wǎng)膜外核層（ONL）的厚度變化情況;通過透射電子顯微鏡（TEM）檢測各組光感受器細(xì)胞的形態(tài);通過熒光酶標(biāo)儀和熒光探針檢測各組活性氧（ROS）的表達(dá)情況;通過免疫蛋白印跡法（Western blot）檢測各組TRPML1、自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1、凋亡相關(guān)蛋白Cleaved casp... 

【文章來源】：皖南醫(yī)學(xué)院安徽省

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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摘要
ABSTRACT
前言
研究材料(資料、內(nèi)容)與方法
    1. 實(shí)驗(yàn)性大鼠RD模型構(gòu)建及視網(wǎng)膜下腔注藥
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)所需試劑和器材
        1.3 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜆?gòu)建及藥物注射操作步驟
    2. 蘇木精-伊紅染色(HE staining)
        2.1 實(shí)驗(yàn)所需試劑和器材
        2.2 HE染色操作步驟
    3. 透射電子顯微鏡(Transmission electron microscope)
        3.1 實(shí)驗(yàn)所需試劑和器材
        3.2 透射電子顯微鏡操作步驟
    4. 免疫蛋白印跡法(Western blot)
        4.1 實(shí)驗(yàn)所需試劑和器材
        4.2 電泳凝膠及部分試劑配方
        4.3 Western blot實(shí)驗(yàn)步驟
    5. 活性氧檢測(ROS assay)
        5.1 活性氧檢測所需試劑和器材
        5.2 活性氧檢測實(shí)驗(yàn)步驟
    6. 水迷宮實(shí)驗(yàn)(Morries water maze)
        6.1 水迷宮實(shí)驗(yàn)所需試劑和器材
        6.2 水迷宮實(shí)驗(yàn)步驟
    7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)分析
結(jié)果
    1.ML-SA1對實(shí)驗(yàn)性視網(wǎng)膜脫離后視網(wǎng)膜組織具有保護(hù)作用
    2.ML-SA1對實(shí)驗(yàn)性視網(wǎng)膜脫離后光感受器細(xì)胞具有保護(hù)作用
    3.ML-SA1通過增強(qiáng)TRPML1的功能促進(jìn)活性氧的清除
    4.TRPML1激活自噬并減少光感受器細(xì)胞Caspase依賴性凋亡
    5.ML-SA1可以改善大鼠視功能依賴性行為
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
作者簡介及讀研期間主要科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Activation of autophagy in photoreceptor necroptosis after experimental retinal detachment[J]. Kai Dong,Zi-Cheng Zhu,Feng-Hua Wang,Gen-Jie Ke,Zhang Yu,Xun Xu.  International Journal of Ophthalmology. 2014(05)



本文編號(hào)：3197315