本文關(guān)鍵詞：Dishevelled2,3在鼻咽癌順鉑耐藥中的作用研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我國南方頭頸部常見的惡性腫瘤之一,多數(shù)鼻咽癌分化差,95%為低分化鱗癌,惡性程度高,嚴(yán)重影響人類的生命健康。目前,鼻咽癌的臨床治療主要以放療和化療為主。順鉑是鼻咽癌臨床化療的一線用藥,但在化療過程中常誘發(fā)鼻咽癌耐藥,嚴(yán)重影響鼻咽癌的治療效果及預(yù)后。因此,探明鼻咽癌順鉑耐藥的機(jī)制,提高鉑類藥物的療效,是鼻咽癌治療的研究熱點(diǎn)。Wnt/β-catenin信號通路的異常激活參與鼻咽癌的化療耐藥。細(xì)胞漿內(nèi)的β-catenin的穩(wěn)定性在Wnt/β-catenin信號通路異常激活中起主導(dǎo)作用,β-catenin在多種惡性腫瘤中存在異常過表達(dá),但是其發(fā)生突變的概率并不高,所以Wnt/β-catenin信號通路的異常激活可能是由于位于β-catenin上游的基因發(fā)生突變導(dǎo)致的。散亂蛋白(Dishevelled,DVL)是位于β-catenin上游的一個(gè)至關(guān)重要的正向調(diào)節(jié)因子。在Wnt/β-catenin信號通路中,活化后的DVL可促使β-catenin在胞質(zhì)內(nèi)積聚和核轉(zhuǎn)移,從而激活轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF誘導(dǎo)靶基因的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn),DVL蛋白在多種惡性腫瘤中高表達(dá)并參與其惡性行為。目前,國內(nèi)外鮮有報(bào)道關(guān)于DVL家族各成員的表達(dá)與鼻咽癌細(xì)胞對順鉑化療耐藥的研究。目的明確順鉑對鼻咽癌細(xì)胞DVL2、DVL3表達(dá)的影響;探明DVL2、DVL3對鼻咽癌細(xì)胞順鉑化療耐藥的影響,為進(jìn)一步研究DVL2、DVL3在腫瘤化療耐藥中的具體作用機(jī)制及有效逆轉(zhuǎn)鼻咽癌耐藥奠定前期基礎(chǔ)。方法1.不同濃度(0,4,8μmol/L)的順鉑作用鼻咽癌細(xì)胞48h后,Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測鼻咽癌細(xì)胞中DVL2、DVL3蛋白的表達(dá)變化。2.轉(zhuǎn)染pc DNA3.1-DVL2、pc DNA3.1-DVL3至鼻咽癌細(xì)胞,并用不同濃度(0,1,2,4,8,10,20μmol/L)的順鉑處理細(xì)胞,MTT檢測過表達(dá)DVL2、DVL3對鼻咽癌細(xì)胞順鉑抑制率及半數(shù)抑制濃度(IC50)的影響。3.轉(zhuǎn)染pc DNA3.1-DVL2、pc DNA3.1-DVL3至鼻咽癌細(xì)胞,并用10μmol/L的順鉑處理細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測過表達(dá)DVL2、DVL3對順鉑的鼻咽癌細(xì)胞凋亡的影響。4.轉(zhuǎn)染pc DNA3.1-DVL2、pc DNA3.1-DVL3與sh RNA-DVL2、sh RNA-DVL3至鼻咽癌細(xì)胞,Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測過表達(dá)與沉默DVL2、DVL3對鼻咽癌細(xì)胞中P-gp、Survivin以及β-catenin蛋白的影響。結(jié)果1.順鉑化療可以誘導(dǎo)鼻咽癌細(xì)胞中DVL2、DVL3的蛋白表達(dá),且有濃度依賴性。2.過表達(dá)DVL2、DVL3均降低了順鉑對鼻咽癌細(xì)胞的抑制率,提高了其IC50。3.過表達(dá)DVL2、DVL3均降低了順鉑誘導(dǎo)的鼻咽癌細(xì)胞的凋亡。4.在鼻咽癌細(xì)胞中過表達(dá)與沉默DVL2、DVL3均增加與降低了β-catenin及其靶基因P-gp、Survivin的蛋白表達(dá)。結(jié)論順鉑上調(diào)鼻咽癌細(xì)胞中DVL2、DVL3的蛋白表達(dá);過表達(dá)DVL2、DVL3均可增強(qiáng)鼻咽癌細(xì)胞對順鉑的耐受,抑制順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡;進(jìn)一步研究顯示DVL2、DVL3均可通過調(diào)控Wnt/β-catenin信號介導(dǎo)耐藥相關(guān)蛋白P-gp、Survivin的表達(dá),從而誘發(fā)鼻咽癌順鉑耐藥。
【關(guān)鍵詞】：散亂蛋白2 散亂蛋白3 順鉑 鼻咽癌 耐藥性
【學(xué)位授予單位】：成都醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-11
• 前言11-15
• 第一部分 Dishevelled2，3 在鼻咽癌順鉑耐藥中的作用15-38
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器15-20
• 2 實(shí)驗(yàn)方法20-31
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-36
• 3.1 順鉑處理鼻咽癌 5-8F細(xì)胞后DVL2、DVL3蛋白的表達(dá)變化31
• 3.2 pcDNA3.1-DVL2與pcDNA3.1-DVL3質(zhì)粒在 5-8F細(xì)胞中的表達(dá)鑒定31-32
• 3.3 DVL2、DVL3降低鼻咽癌細(xì)胞對順鉑的敏感性32-34
• 3.4 DVL2、DVL3降低順鉑誘導(dǎo)的 5-8F細(xì)胞凋亡34-36
• 4 討論36-37
• 5 結(jié)論37-38
• 第二部分 Dishevelled2，3 通過Wnt/β-catenin信號調(diào)控耐藥相關(guān)蛋白P-gp、Survivin介導(dǎo)鼻咽癌順鉑耐藥38-51
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器38-39
• 2 實(shí)驗(yàn)方法39-43
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-48
• 3.1 pcDNA3.1-DVL2與pcDNA3.1-DVL3質(zhì)粒在 5-8F細(xì)胞中的表達(dá)鑒定43-44
• 3.2 shRNA-DVL2、shRNA-DVL3質(zhì)粒在 5-8F細(xì)胞中沉默DVL2、DVL3的表達(dá)鑒定44-45
• 3.3 過表達(dá)DVL2、DVL3增強(qiáng)P-gp及Survivin的蛋白表達(dá)45
• 3.4 沉默DVL2、DVL3下調(diào)P-gp及Survivin的蛋白表達(dá)45-46
• 3.5 過表達(dá)DVL2、DVL3增強(qiáng) β-catenin的蛋白表達(dá)46-47
• 3.6 沉默DVL2、DVL3下調(diào) β-catenin的蛋白表達(dá)47-48
• 4 討論48-50
• 5 結(jié)論50-51
• 全文小結(jié)51-52
• 參考文獻(xiàn)52-56
• 文獻(xiàn)綜述56-65
• 參考文獻(xiàn)61-65
• 附錄65-66
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果66-67
• 致謝67

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：316666