發(fā)布時間：2021-04-16 23:33

　　目的:年齡相關(guān)性白內(nèi)障是一種主要的致盲眼病而且其發(fā)生率呈逐年遞增趨勢。氧化應激在白內(nèi)障的致病機制中起到了重要的作用。在氧化應激的作用下,晶狀體上皮細胞的凋亡機制被激活,它可以導致晶狀體的渾濁并加速白內(nèi)障的發(fā)展。同時在氧化應激條件下細胞自噬機制也被激活。miRNA曾有文獻報道與白內(nèi)障的發(fā)生具有相關(guān)性,但其具體機制還不是很清楚。本文主要針對氧化應激條件下晶狀體上皮細胞中miRNA對于晶狀體上皮細胞凋亡及自噬機制的研究。研究方法:本研究選取了眼科就診并進行白內(nèi)障手術(shù)的患者32人,按年齡分為高低年齡兩組,qPCR測量目的miRNA的含量分析差異性;選取人晶狀體上皮細胞系,采用過氧化氫制造氧化應激模型,采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染等方式觀察在細胞氧化應激條件下待測miRNA的表達情況,同時采用流式細胞檢查分析凋亡及蛋白質(zhì)免疫印跡方法分析自噬相關(guān)蛋白情況,分析其對凋亡與自噬影響;軟件預測miRNA的靶基因,并采用熒光素酶實驗驗證結(jié)合位點,設計質(zhì)粒分組共轉(zhuǎn)染氧化應激細胞系模型觀察miRNA通過靶基因調(diào)控細胞凋亡與自噬。結(jié)果:本研究觀察到在過氧化氫處理的白內(nèi)障組織及晶狀體上皮細胞中有miR-23b-3p表達,這說明在... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

實時定量PCR檢測年齡≥65歲組（N=18）與年齡<65歲組（N=14）樣本中miR-23b-3pmiR‐23b‐3p

10中國醫(yī)科大學博士學位論文3結(jié)果表1臨床樣本采集患者的一般狀況2臨床標本不同分組中miR‐23b‐3p的差異見圖1圖1：實時定量PCR檢測年齡≥65歲組（N=18）與年齡<65歲組（N=14）樣本中miR-23b-3p的表達情況。3采用MTT比色法測量不同濃度過氧化氫(0-300μM)處理下細胞系SRA01/04的活性比較見圖2≥65歲組<65歲組平均年齡75.8354.29男108女86圖2：采用MTT比色法測量細胞系SRA01/04的活性比較（過氧化氫處理下）。miR‐23b‐3p

11中國醫(yī)科大學博士學位論文4人晶狀體上皮細胞氧化應激模型中miR-23b-3p的表達情況（正常細胞系為對照組）見圖34討論為了探究miR-23b-3p在白內(nèi)障致病機制上的作用，本實驗采用實時定量PCR分析miR-23b-3p在白內(nèi)障組織中的表達情況，對32例臨床標本按年齡分為兩組，分組標準為按照世界衛(wèi)生組織對于老年的定義為65歲為界，分為年齡≥65歲組與年齡＜65歲組；兩組年齡性別無差異，發(fā)現(xiàn)在本樣本中miR-23b-3p的表達在年齡≥65歲組要高于年齡＜65歲組（見圖1），這說明了在本樣本中miR-23b-3p與年齡的相關(guān)性，在本樣本中miR-23b-3p的表達與年齡成正相關(guān)；過氧化氫是一種氧化作用較強的活性氧，是機體自由基產(chǎn)生的重要環(huán)節(jié)，易于獲得，性質(zhì)相對穩(wěn)定，經(jīng)過處理的細胞能在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量的ＲOS，進而誘發(fā)細胞凋亡，有研究已經(jīng)利用過氧化氫建立了小鼠[52]、豬[53]卵巢顆粒細胞氧化應激模型，是一種合理的顆粒細胞氧化應激誘導劑，因此我們采用了在細胞系中添加過氧化氫的經(jīng)典方法制造人晶狀體上皮細胞氧化應激模型，并且采用MTT比色法測量了細胞系SRA01/04在不同過氧化氫濃度下的細胞活力，得到250μM為最佳刺激濃度（見圖2）。然后將細胞系SRA01/04中加入250μM過氧化氫培養(yǎng)24小時[54]，后可以發(fā)現(xiàn)miR-23b-3p的表達與正常未添加過氧化氫組比較明顯增加（見圖3）。說明在氧化應激條件下，人晶狀體上皮細胞內(nèi)miR-23b-3p的表達明顯增加，結(jié)合該結(jié)果與臨床標本中miR-23b-3p與年齡的正相關(guān)關(guān)系可以推斷出miR-23b-3p的表達與晶狀體渾濁程度即白內(nèi)障嚴重程度的一種相關(guān)性。但具體聯(lián)系還需要進一步的實驗驗證。圖3：正常細胞系SRA01/04與250μM過氧化氫處理24小時后的細胞系SRA01/04系中miR‐23b‐3p的表達情況比較。miR-23b-3p


本文編號：3142375