本文關(guān)鍵詞：MAPK信號(hào)通路介導(dǎo)的氧化損傷對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞水通道蛋白表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察水通道蛋白1(aquaprin 1,AQP1)和水通道蛋白5(aquaprin 5,AQP5)在晶狀體囊膜及培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞(human lens epithelial cells,HLECs)的表達(dá),研究H2O2引起的氧化損傷對(duì)體外培養(yǎng)HLECs中AQP1和AQP5的表達(dá)變化,并探討絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路在其中的作用。方法:(1)收集患有年齡相關(guān)性白內(nèi)障并于我院眼科行白內(nèi)障手術(shù)患者晶體前囊膜,及我院低溫冷凍科保存的角膜移植術(shù)后供眼剩余晶狀體前囊膜。應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)(RT-PCR)檢測(cè)兩種組織晶狀體上皮細(xì)胞中AQP1和AQP5m RNA的表達(dá),免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)AQP1和AQP5蛋白水平的表達(dá)(2)用H2O2刺激體外培養(yǎng)的HLECs實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組,H2O2刺激組,MAPK通路抑制劑預(yù)處理并行H2O2刺激組。免疫印跡法(Western Blot,WB)檢測(cè)各組總的ERK、p38、JNK和p-ERK、p-p38、p-JNK的表達(dá)情況,及AQP1和AQP5的表達(dá)情況,RT-PCR)方法檢測(cè)AQP1和AQP5m RNA的表達(dá)。結(jié)果:(1)AQP5和AQP1在人囊膜及體外培養(yǎng)的HLECs表達(dá),白內(nèi)障患者晶狀體上皮細(xì)胞AQP1和AQP5表達(dá)明顯低于透明晶體。(2)H2O2刺激可使培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞AQP1和AQP5m RNA和蛋白表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)H2O2刺激可使p-ERK、p-p38表達(dá)升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),p-JNK未見(jiàn)明顯升高,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(4)ERK及p38抑制劑預(yù)處理組AQP1m RNA及蛋白表達(dá)高于單純H2O2刺激組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),AQP5m RNA及蛋白表達(dá)同單純H2O2刺激組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:(1)人晶狀體上皮細(xì)胞表達(dá)AQP1和AQP5,其表達(dá)降低可能導(dǎo)致年齡相關(guān)性白內(nèi)障的發(fā)生。(2)ERK和p38通路介導(dǎo)H2O2刺激引起的晶狀體上皮細(xì)胞AQP1的表達(dá)降低。(3)MAPK通路可能不介導(dǎo)H2O2刺激引起的晶狀體上皮細(xì)胞AQP5的表達(dá)降低。
【關(guān)鍵詞】：MAPK信號(hào)通路 氧化損傷 晶狀體上皮細(xì)胞 水通道蛋白
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R776.1
【目錄】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-7
• 第一章 材料和方法7-17
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料7-10
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象7
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)主要儀器與設(shè)備7-8
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)主要耗材和試劑8-10
• 1.1.4 主要溶液配制10
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法10-16
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)10-11
• 1.2.2 Real-time RT-PCR實(shí)驗(yàn)方法11-14
• 1.2.3 Western blot試驗(yàn)方法14-15
• 1.2.4 免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)方法15-16
• 1.3. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法16-17
• 第二章 結(jié)果17-21
• 2.1 體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察17
• 2.2 人晶狀體囊膜AQP1和AQP5的表達(dá)17
• 2.3 H_2O_2介導(dǎo)的體外培養(yǎng)HLECs細(xì)胞AQP1和AQP5的表達(dá)17-18
• 2.4 H_2O_2刺激晶狀體上皮細(xì)胞后JNK通路的改變18
• 2.5 H_2O_2刺激晶狀體上皮細(xì)胞后ERK通路的改變18-19
• 2.6 H_2O_2刺激晶狀體上皮細(xì)胞后p38通路的改變19
• 2.7 抑制劑預(yù)處理后晶狀體上皮AQP1的表達(dá)變化19-20
• 2.8 抑制劑預(yù)處理后晶狀體上皮AQP5的表達(dá)變化20-21
• 第三章 討論21-24
• 結(jié)論24-25
• 參考文獻(xiàn)25-28
• 綜述28-37
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果37-38
• 附錄38-41
• 致謝41-42

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 魏遠(yuǎn)建;晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)Ca~(2+)濃度變化對(duì)AQP1表達(dá)及細(xì)胞活性的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

  本文關(guān)鍵詞：MAPK信號(hào)通路介導(dǎo)的氧化損傷對(duì)晶狀體上皮細(xì)胞水通道蛋白表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：309822