鼻咽癌（Nasopharyngeal Carcinoma,NPC）是發(fā)生于鼻咽部黏膜的惡性腫瘤。普遍認(rèn)為,鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展是基因-環(huán)境-EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）感染交互作用的多病因、多步驟過程。在鼻咽癌高發(fā)區(qū)幾乎100%的鼻咽癌患者腫瘤組織為EBV陽性。EBV編碼基因在患者所有NPC細胞中持續(xù)表達,主要為II型潛伏狀態(tài),表達三種潛伏膜蛋白（LMP1、LMP2A、LMP2B）、EBV核抗原1（EBNA1）和EBV編碼的小RNAs（EBERs）。這些病毒產(chǎn)物使腫瘤具有更惡性的生物學(xué)行為。在轉(zhuǎn)錄水平,鼻咽癌中LMP2A的檢出率高達90%。我們前期研究發(fā)現(xiàn),表達LMP2A的鼻咽癌細胞遷移和侵襲的能力增強,并與細胞整合素ITGβ4的定位聚集化改變相關(guān)。而ITGβ4定位的改變可能導(dǎo)致其參與形成的半橋粒結(jié)構(gòu)瓦解,從而有利于細胞的遷移。本研究探索并證實LMP2A表達誘導(dǎo)的ITGβ4定位改變的分子機制,以期從新的角度闡明LMP2A促進鼻咽癌細胞轉(zhuǎn)移的分子機理。首先,我們成功構(gòu)建了穩(wěn)定表達LMP2A的鼻咽癌細胞系CNE1和TW03。將熒光標(biāo)記的鈣離子指示劑用于檢測細胞內(nèi)鈣離... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

LMP2A的結(jié)構(gòu)與功能

RT-PCR 檢測各穩(wěn)轉(zhuǎn)鼻咽癌細胞系 LMP2A 的轉(zhuǎn)錄水平（管家基因 GAPDH 作為內(nèi)對照）ure1-1 Transcriptional level of LMP2A after transfection.he GAPDH expression was used as an internal control.)鈣離子含量增加 表達與鈣離子的關(guān)系，我們利用鈣離子子，使用熒光顯微鏡觀察鈣離子在 LE1、TW03 內(nèi)的分布，發(fā)現(xiàn) LMP2A-CNE1（圖 1-2 A）。此外，我們通過熒光酶標(biāo)儀B），并進行統(tǒng)計學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)鈣離子在 L度更高。結(jié)果提示，LMP2A 表達增加鈣

圖 1-2 鈣離子熒光指示劑標(biāo)記細胞內(nèi)鈣離子并檢測其含量熒光顯微圖像顯示鈣離子探針標(biāo)記鈣離子的亞細胞分布（×40 倍）。B.熒光酶標(biāo)儀檢測鈣離，條形圖統(tǒng)計分析。（均值±標(biāo)準(zhǔn)差，重復(fù)三次）Figure1-2 Fluorescence labeled calciumshowing the subcellular distribution of calciumFluorescence microscopic images showing the subcellular distribution of Fluo-3 labeled calciuP2A negative and positive NPC cell lines Magnification×40. B. The bar graph shows statistical anFluo-3 intensities recorded by fluorescence microplate reader (mean±s.d,n = 3).3 鈣離子螯合劑（BAPTA-AM）可減少胞內(nèi)游離鈣離子含量。已知 EGF 刺激可促進鈣離子內(nèi)流，而 BAPTA-AM 抑制鈣離子內(nèi)流后期進一步探討鈣離子在細胞遷移過程中的作用，我們首先分析 EGF BAPTA-AM 與細胞內(nèi)游離鈣離子含量的關(guān)系。分別利用 BAPTA-AM（分別為 1μm/L、10μm/L），EGF（濃度分別為 100ng/ml、200ng/ml）處MP2A-CNE1 和 LMP2A-TW03 24 小時后，通過熒光酶標(biāo)儀讀取細胞內(nèi)


本文編號：3072123