本文關(guān)鍵詞：UBA52對(duì)HSF4轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控的分子機(jī)制，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景白內(nèi)障是世界范圍內(nèi)首要的致盲原因。成人白內(nèi)障的發(fā)病率隨年齡增加而升高,可高達(dá)60-80%。兒童白內(nèi)障的發(fā)病率為0.015-0.03%,多與遺傳因素有關(guān)。有報(bào)道HSF4突變與家族遺傳性白內(nèi)障的發(fā)生密切相關(guān)�；蚯贸鼿SF4可誘發(fā)小鼠白內(nèi)障,主要表現(xiàn)為晶狀體上皮細(xì)胞異常增生和纖維細(xì)胞分化障礙。這說明HSF4是晶狀體的主要調(diào)控因子之一。HSF4是熱休克轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員,與典型的熱休克轉(zhuǎn)錄因子HSF1相比,其缺少抑制三聚化的HR-C疏水結(jié)構(gòu)域,因此,細(xì)胞內(nèi)HSF4轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控機(jī)制不同于HSF1,仍待研究中。通過酵母雙雜交實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的與HSF4b相互作用的蛋白-UBA52。UBA52是由泛素和核糖體蛋白L40組成的融合蛋白,可成熟為泛素分子(ubiquitin)和核糖體蛋白(L40)。泛素是一個(gè)進(jìn)化十分保守的蛋白質(zhì),在細(xì)胞內(nèi)有許多重要的功能,其中最主要的是形成多聚泛素鏈修飾底物蛋白,使其通過泛素蛋白酶體途徑進(jìn)行降解。泛素化修飾對(duì)晶狀體發(fā)育起著重要作用,突變Ub/K6W可抑制纖維細(xì)胞分化,導(dǎo)致白內(nèi)障發(fā)生。因此,我們推測(cè),UBA52介導(dǎo)的蛋白質(zhì)質(zhì)量控制通過與HSF4b結(jié)合激活晶狀體細(xì)胞的熱休克反應(yīng),繼而維持分化細(xì)胞的內(nèi)穩(wěn)態(tài)。目的利用晶狀體上皮細(xì)胞和BL/C57小鼠晶狀體,探究UBA52對(duì)HSF4b轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控的分子機(jī)制。方法1.利用重疊延伸法構(gòu)建UBA52K48R/K63R/G75/76A突變質(zhì)粒。2.運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄病毒方法構(gòu)建UBA52過表達(dá)的穩(wěn)定株細(xì)胞系。3.免疫沉淀,GST-pull-down和ubiquitin-enrichment用于測(cè)定UBA52與HSF4b之間,HSF4b與Rpb1之間的相互作用。免疫熒光確定這些蛋白在細(xì)胞內(nèi)的共定位。4.免疫印跡和實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定小鼠晶狀體上皮細(xì)胞及晶狀體組織中蛋白的表達(dá)。5.染色質(zhì)免疫共沉淀和雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測(cè)UBA52對(duì)HSF4b的DNA結(jié)合能力的影響。結(jié)果1.UBA52在不同發(fā)育時(shí)期的晶狀體上皮和纖維中均表達(dá),并且可以在晶狀體上皮細(xì)胞中成熟為ubiquitin和L40,且其ubiquitin端與HSF4b相互作用,但不直接泛素化修飾HSF4b。2.UBA52通過增強(qiáng)HSF4b的DNA結(jié)合能力來促進(jìn)HSF4b的轉(zhuǎn)錄活性,進(jìn)而增加HSF4b下游基因hsp25,αB-crystallin的mRNA和蛋白的表達(dá);3.UBA52點(diǎn)突變(K48R,K63R,G75/76A)后,其成熟和定位發(fā)生改變,并進(jìn)一步影響其與HSF4b的相互作用進(jìn)而削弱其調(diào)控HSF4b轉(zhuǎn)錄活性的能力;4.HSF4b通過與Rpb1相互作用激活HSF4b的轉(zhuǎn)錄活性,UBA52可以與HSF4b和Rpb1形成復(fù)合物參與調(diào)控HSF4b的轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)論晶狀體上皮細(xì)胞中,UBA52可成熟為ubiquitin和L40,且UBA52在晶狀體發(fā)育的各個(gè)時(shí)期都有表達(dá)。UBA52的ubiquitin端通過與HSF4b相互作用增強(qiáng)HSF4b的DNA結(jié)合能力,進(jìn)而上調(diào)HSF4b的轉(zhuǎn)錄活性。Rpb1介導(dǎo)UBA52和HSF4b的相互作用和調(diào)控功能。以上研究結(jié)果表明,UBA52通過與HSF4b相互作用參與HSF4b介導(dǎo)的晶狀體發(fā)育過程。
【關(guān)鍵詞】：UBA52 HSF4 RNA聚合酶Ⅱ 晶狀體發(fā)育
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R776.1
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 縮略詞表10-11
• 引言11-13
• 1 材料、儀器13-19
• 1.1 材料和儀器13-19
• 1.1.1 抗體13
• 1.1.2 質(zhì)粒，細(xì)胞，菌株及小鼠13-14
• 1.1.3 試劑盒14
• 1.1.4 其他材料14
• 1.1.5 主要儀器14-15
• 1.1.6 主要試劑配制15-19
• 2 主要研究方法19-31
• 2.1 細(xì)胞培養(yǎng)方法19-20
• 2.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇19
• 2.1.2 細(xì)胞傳代19
• 2.1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染19
• 2.1.4 細(xì)胞凍存19-20
• 2.1.5 細(xì)胞爬片20
• 2.2 構(gòu)建穩(wěn)定株細(xì)胞系20
• 2.3 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)20-21
• 2.4 免疫印跡21-22
• 2.5 提取細(xì)胞RNA22-23
• 2.6 免疫熒光23-24
• 2.7 免疫共沉淀（IP）24
• 2.8 pull down實(shí)驗(yàn)24-25
• 2.9 GST-pull down實(shí)驗(yàn)25-26
• 2.10 染色質(zhì)免疫共沉淀26-27
• 2.11 重疊延伸法構(gòu)建點(diǎn)突變質(zhì)粒27-29
• 2.12 飼養(yǎng)小鼠29-30
• 2.13 晶狀體剝離30-31
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-47
• 3.1 UBA52在晶狀體上皮細(xì)胞中可以剪切為ubiquitin和L4031-32
• 3.2 HSF4b與UBA52的ubiquitin端相互作用32-34
• 3.3 UBA52不直接泛素化修飾HSF4b34-35
• 3.4 UBA52增加HSF4b下游基因hsp25，αB-crystallin的mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)35-36
• 3.5 UBA52通過增強(qiáng)HSF4b的DNA結(jié)合能力來促進(jìn)HSF4b的轉(zhuǎn)錄活性36-38
• 3.6 UBA52特定位點(diǎn)突變后會(huì)影響其成熟及定位改變38-39
• 3.7 UBA52點(diǎn)突變后影響其與HSF4b的相互作用進(jìn)而削弱其調(diào)控HSF4b的轉(zhuǎn)錄活性的能力39-41
• 3.8 UBA52和HSF4b通過與Rpb1結(jié)合來調(diào)控HSF4b的轉(zhuǎn)錄活性41-42
• 3.9 細(xì)胞水平上，在蛋白毒性壓力下，HSF4b與UBA52的結(jié)合增強(qiáng)42-43
• 3.10 UBA52在晶狀體中的時(shí)空表達(dá)43-44
• 3.11 HSF4b與UBA52在晶狀體組織中相互作用44-47
• 4 討論47-51
• 結(jié)論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 綜述57-66
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 致謝66-67
• 攻讀學(xué)位期間參加的學(xué)術(shù)會(huì)議及研究成果67-68

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2 王俊杰,賈廷珍,楊建良,孫凌飛,申文江;肺癌患者T淋巴細(xì)胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性分析(附112例報(bào)道)[J];中國腫瘤臨床與康復(fù);2000年02期

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5 張維珍,路海燕;T淋巴細(xì)胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性檢測(cè)及標(biāo)本采集的護(hù)理配合[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2000年06期

6 郭風(fēng)勁;宋方洲;張靜;李婧;唐勇;;人類不同類型細(xì)胞中X-盒結(jié)合蛋白1轉(zhuǎn)錄活性研究(英文)[J];遺傳學(xué)報(bào);2007年09期

7 樊艾，張宗玉;衰老過程中鼠肝細(xì)胞核體外重組的轉(zhuǎn)錄活性[J];生物化學(xué)雜志;1994年01期

8 朱九成,馬興剛,王昌成;消化系惡性腫瘤術(shù)后外周血T淋巴細(xì)胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性的變化[J];江蘇醫(yī)藥;2004年07期

9 艾建平,王躍群,李永青,朱傳炳,袁婺洲,吳秀山;hLBH的轉(zhuǎn)錄活性及其在MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的作用[J];生命科學(xué)研究;2005年03期

10 李其云,牛鳳霞,翟金平,趙煥芬;腫瘤患者外周血淋巴細(xì)胞rDNA轉(zhuǎn)錄活性檢測(cè)的意義[J];中國免疫學(xué)雜志;2000年10期

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1 胡麗麗;李鵬;韓璐;吳惠子;劉潔;;HT2AR A-783G基因多態(tài)性對(duì)轉(zhuǎn)錄活性的影響[A];湖南省首屆生理—藥理科學(xué)青年論壇論文摘要匯編[C];2009年

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4 吳潔;PML4通過增強(qiáng)GATA-1轉(zhuǎn)錄活性參與紅系分化成熟[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

5 林舒勇;Axin復(fù)合體調(diào)控p53活性的分子機(jī)制及其生物學(xué)功能[D];廈門大學(xué);2009年

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1 謝盼盼;299位點(diǎn)絲氨酸磷酸化對(duì)Hsf4b轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控[D];河南大學(xué);2015年

2 左晨;PIASy抑制ISGs轉(zhuǎn)錄活性的分子機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

3 郭康文;UBA52對(duì)HSF4轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控的分子機(jī)制[D];河南大學(xué);2016年

4 胡麗麗;5-HT2AR-783A/G遺傳多態(tài)性對(duì)5-HT2A受體基因轉(zhuǎn)錄活性的影響[D];中南大學(xué);2010年

5 吳麗;一磷酸腺苷激活蛋白激酶調(diào)節(jié)孕激素受體轉(zhuǎn)錄活性的研究[D];華東師范大學(xué);2011年

6 張園園;GPS2對(duì)AIB1轉(zhuǎn)錄活性的影響[D];大連理工大學(xué);2013年

7 馬小偉;核孤兒受體NR4A1抑制STAT3的轉(zhuǎn)錄活性[D];蘭州大學(xué);2009年

8 高曉靜;組蛋白去乙酰化酶HDAC11對(duì)轉(zhuǎn)錄因子E2F1的蛋白穩(wěn)定性及轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控研究[D];華東師范大學(xué);2011年

9 陳潔;PIk1通過與p53的相互作用參與G_2/M期的轉(zhuǎn)換調(diào)控[D];南京師范大學(xué);2005年

10 方建飛;轉(zhuǎn)錄共激活因子p100蛋白對(duì)轉(zhuǎn)錄因子STAT1和STAT6基因轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控作用[D];天津醫(yī)科大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：UBA52對(duì)HSF4轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控的分子機(jī)制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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