目的:本實驗研究Nerolidol對小鼠煙曲霉菌（Aspergillus fumigatus,AF）性角膜炎的保護(hù)性作用,探索其用于治療的可行性及分子機(jī)制。方法:1.通過MIC實驗及細(xì)胞毒性實驗測定Nerolidol對煙曲霉菌的抑菌濃度范圍及對細(xì)胞的毒性作用,從而選取最佳藥物濃度。2.C57BL/6小鼠隨機(jī)分為四組,分別為對照組、真菌性角膜炎組、藥物組以及藥物處理后真菌性角膜炎組。采用基質(zhì)內(nèi)注射煙曲霉菌孢子的方法建立小鼠真菌性角膜炎模型。藥物組以及藥物處理后真菌性角膜炎組在感染后2小時、1天、3天、5天球結(jié)膜下注射Nerolidol（200μM/5ul）。對照組以及真菌性角膜炎組球結(jié)膜下注射等體積PBS。每天使用裂隙燈顯微鏡對小鼠角膜的感染情況進(jìn)行觀察并拍照記錄。3.采用免疫熒光法對真菌感染的小鼠角膜基質(zhì)內(nèi)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的募集情況進(jìn)行特異性標(biāo)記。通過MPO法測定真菌感染的小鼠角膜基質(zhì)中髓過氧化物酶的活性。4.采用RT-PCR和Western Bolt法檢測各組小鼠角膜中模式識別受體LOX-1和促炎因子IL-1β的mRNA及蛋白表達(dá)。5.用煙曲霉菌分生孢子刺激HCECs建立真菌感染... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

（A-B）煙曲霉菌菌絲及分生孢子形態(tài)

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文12圖2.（A-C）Nerolidol具有抑制煙曲霉菌生長的作用，但是濃度達(dá)到一定高度時影響HCECs的細(xì)胞活力。（A）為不同濃度Nerolidol與煙曲霉菌孢子懸浮液共培養(yǎng)24小時后，在460nm處測量光密度值的結(jié)果。（B）為不同濃度Nerolidol與煙曲霉菌孢子懸浮液共培養(yǎng)24小時，對煙曲霉菌菌絲細(xì)胞壁行特異性染色的結(jié)果。（C）為不同濃度Nerolidol對HCECs的細(xì)胞毒性。2.3Nerolidol對小鼠煙曲霉菌性角膜炎炎癥反應(yīng)的影響煙曲霉菌感染小鼠角膜后，采用球結(jié)膜下注射Nerolidol或PBS的方式對小鼠角膜進(jìn)行局部干預(yù)。感染后第3天和第5天，使用裂隙燈顯微鏡對小鼠角膜進(jìn)行觀察拍照并由同一實驗者記錄臨床評分。照片顯示（圖3.AC），與PBS處理組相比，Nerolidol處理組小鼠角膜炎性浸潤范圍較小，水腫程度較輕，角膜透明度較高。兩組間的臨床評分有顯著的統(tǒng)計學(xué)差異（圖3.BD）。

結(jié)果13圖3.（A-D）Nerolidol對小鼠真菌性角膜炎時角膜的炎癥程度和臨床評分的影響。（AC）分別為煙曲霉菌感染小鼠角膜第3天和第5天，裂隙燈顯微鏡下觀察兩組小鼠角膜的炎癥情況。（BD）分別為煙曲霉菌感染小鼠角膜第3天和第5天，由同一觀察者記錄的兩組小鼠角膜炎癥臨床評分的結(jié)果。2.4Nerolidol抑制小鼠煙曲霉菌性角膜炎時角膜基質(zhì)內(nèi)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的募集煙曲霉菌感染小鼠角膜第3天，對小鼠角膜組織行免疫熒光及MPO測定，以檢測小鼠角膜基質(zhì)內(nèi)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的募集情況。免疫熒光結(jié)果如圖（圖4.AC），結(jié)果表明，與PBS處理組相比，Nerolidol處理組小鼠角膜基質(zhì)內(nèi)中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞浸潤減少，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。MPO是中性粒細(xì)胞所特有，其活性檢測是對小鼠角膜中中性粒細(xì)胞的定量分析。結(jié)果如圖所示（圖4.B），與PBS處理組相比，Nerolidol處理組小鼠角膜中MPO活性顯著降低。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Review of clinical and basic approaches of fungal keratitis[J]. Jie Wu,Wen-Song Zhang,Jing Zhao,Hong-Yan Zhou.  International Journal of Ophthalmology. 2016(11)
[2]大鼠煙曲霉菌性角膜炎角膜局部的免疫學(xué)研究[J]. 崔紅平,蘇晶,高新蕊.  眼外傷職業(yè)眼病雜志(附眼科手術(shù)). 2007(08)



本文編號：2990963