背景及目的:變應(yīng)性鼻炎（Allergic Rhinitis,AR）是一種常見的,由過敏原暴露引發(fā)的鼻粘膜變態(tài)反應(yīng)性疾病,其主要特點為血清特異性IgE上升及鼻粘膜中增加的Ⅱ型細胞因子。近來研究表明,二型固有淋巴細胞（Group 2 Innate Lymphoid cells,ILC2）在AR發(fā)病機制中發(fā)揮了作用。ILC2是一種新發(fā)現(xiàn)的固有免疫細胞,其具有與TH2細胞相似的效應(yīng)功能。ILC2本身不表達任何抗原特異性受體。當過敏原暴露后,ILC2響應(yīng)上皮細胞來源的IL-33、IL-25激活并釋放IL-4、IL-5、IL-13等細胞因子是其調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的主要途徑。然而,目前ILC2在AR中的研究仍處于起步階段。ILC2響應(yīng)何種機制調(diào)節(jié)其細胞因子分泌參與AR的發(fā)生和發(fā)展,對此仍然沒有被很好的理解。MiR-155是一種與免疫功能關(guān)系密切的功能性非編碼RNA。MiR-155被證實通過調(diào)節(jié)多種免疫細胞功能參與AR等過敏性疾病的發(fā)生發(fā)展。在我們課題組及其它研究團對的體內(nèi)實驗中,miR-155參與調(diào)節(jié)AR等過敏性氣道炎癥模型中ILC2數(shù)量和功能。然而,miR-155在體外是否參與調(diào)節(jié)ILC2功能以及通過何... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

免疫熒光和流式細胞術(shù)檢測免疫磁珠分選后ILC2純度

第4章結(jié)果22圖2：MiR-155調(diào)節(jié)AR患者外周血ILC2功能。RT-qPCR檢測miR-155mimics（A）和miR-155inhibitor轉(zhuǎn)染后，ILC2內(nèi)miR-155表達，以u6為內(nèi)參。RT-qPCR檢測IL-33、IL-25刺激72h后，ILC2中IL-4（C）、IL-5（D）、IL-13（E）mRNA表達水平，以β-Actin基因為內(nèi)參。ELISA檢測ILC2培養(yǎng)上清中IL-4（F）、IL-5（G）、IL-13（H）蛋白分泌量（pg/ml）。*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。4.2生物信息學(xué)分析MiR-155可能的靶基因通過miR-155靶基因預(yù)測，我們從miRDB，miRTarBase，和TargetScan三個數(shù)據(jù)庫分別獲得297個，888個，7145個靶基因，三者交集包含110個較為可信的靶基因（圖3A）。通過對GEO數(shù)據(jù)庫中的芯片數(shù)據(jù)（GEOaccession：GSE124926）進行差異分析，我們發(fā)現(xiàn)，與未激活的ILC2相比，活化的ILC2中有933個差

第4章結(jié)果24個（69.7%），下調(diào)的基因283個（30.3%）（圖3B）。熱圖顯示差異最為明顯的前30個（Top30）基因（圖3C）。如圖3D所示，通過結(jié)合miR-155的預(yù)測靶基因與ILC2差異表達基因，我們得到10個可能參與ILC2功能的靶基因，其中9個基因（FOS、CREBRF、HBP1、IRF2BP2、DHX40、KBTBD2、TP53INP1、TLE4、GABARAPL1）在活化的ILC2中顯著下調(diào)（圖3E），提示這些基因可能參與miR-155對ILC2的調(diào)節(jié)功能。為了進一步驗證上述結(jié)果，我們將miR-155mimics轉(zhuǎn)入ILC2，在IL-33、IL-25、IL-2、PMA/I刺激48h后，通過RT-qPCR檢測候選靶基因的表達。結(jié)果顯示，與對照組相比，過表達miR-155可以抑制ILC2中HBP1（P=0.058）、CREBRF、TLE4、TP53INP1、KBTDB2基因表達，其中miR-155對TP53INP1的抑制作用最為明顯。這些結(jié)果表明，上述基因很可能作為miR-155下游靶點參與miR-155對ILC2功能的調(diào)節(jié)過程。圖4：RT-qPCR檢測miR-155過表達后，候選靶基因mRNA表達水平的改變。以β-Actin基因為內(nèi)參，將對照組均化為1。*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。


本文編號：2980546