背景及目的:變應(yīng)性鼻炎（Allergic Rhinitis,AR）是一種常見(jiàn)的,由過(guò)敏原暴露引發(fā)的鼻粘膜變態(tài)反應(yīng)性疾病,其主要特點(diǎn)為血清特異性IgE上升及鼻粘膜中增加的Ⅱ型細(xì)胞因子。近來(lái)研究表明,二型固有淋巴細(xì)胞（Group 2 Innate Lymphoid cells,ILC2）在AR發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮了作用。ILC2是一種新發(fā)現(xiàn)的固有免疫細(xì)胞,其具有與TH2細(xì)胞相似的效應(yīng)功能。ILC2本身不表達(dá)任何抗原特異性受體。當(dāng)過(guò)敏原暴露后,ILC2響應(yīng)上皮細(xì)胞來(lái)源的IL-33、IL-25激活并釋放IL-4、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子是其調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的主要途徑。然而,目前ILC2在AR中的研究仍處于起步階段。ILC2響應(yīng)何種機(jī)制調(diào)節(jié)其細(xì)胞因子分泌參與AR的發(fā)生和發(fā)展,對(duì)此仍然沒(méi)有被很好的理解。MiR-155是一種與免疫功能關(guān)系密切的功能性非編碼RNA。MiR-155被證實(shí)通過(guò)調(diào)節(jié)多種免疫細(xì)胞功能參與AR等過(guò)敏性疾病的發(fā)生發(fā)展。在我們課題組及其它研究團(tuán)對(duì)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中,miR-155參與調(diào)節(jié)AR等過(guò)敏性氣道炎癥模型中ILC2數(shù)量和功能。然而,miR-155在體外是否參與調(diào)節(jié)ILC2功能以及通過(guò)何... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)免疫磁珠分選后ILC2純度

第4章結(jié)果22圖2：MiR-155調(diào)節(jié)AR患者外周血ILC2功能。RT-qPCR檢測(cè)miR-155mimics（A）和miR-155inhibitor轉(zhuǎn)染后，ILC2內(nèi)miR-155表達(dá)，以u(píng)6為內(nèi)參。RT-qPCR檢測(cè)IL-33、IL-25刺激72h后，ILC2中IL-4（C）、IL-5（D）、IL-13（E）mRNA表達(dá)水平，以β-Actin基因?yàn)閮?nèi)參。ELISA檢測(cè)ILC2培養(yǎng)上清中IL-4（F）、IL-5（G）、IL-13（H）蛋白分泌量（pg/ml）。*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。4.2生物信息學(xué)分析MiR-155可能的靶基因通過(guò)miR-155靶基因預(yù)測(cè)，我們從miRDB，miRTarBase，和TargetScan三個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)分別獲得297個(gè)，888個(gè)，7145個(gè)靶基因，三者交集包含110個(gè)較為可信的靶基因（圖3A）。通過(guò)對(duì)GEO數(shù)據(jù)庫(kù)中的芯片數(shù)據(jù)（GEOaccession：GSE124926）進(jìn)行差異分析，我們發(fā)現(xiàn)，與未激活的ILC2相比，活化的ILC2中有933個(gè)差

第4章結(jié)果24個(gè)（69.7%），下調(diào)的基因283個(gè)（30.3%）（圖3B）。熱圖顯示差異最為明顯的前30個(gè)（Top30）基因（圖3C）。如圖3D所示，通過(guò)結(jié)合miR-155的預(yù)測(cè)靶基因與ILC2差異表達(dá)基因，我們得到10個(gè)可能參與ILC2功能的靶基因，其中9個(gè)基因（FOS、CREBRF、HBP1、IRF2BP2、DHX40、KBTBD2、TP53INP1、TLE4、GABARAPL1）在活化的ILC2中顯著下調(diào)（圖3E），提示這些基因可能參與miR-155對(duì)ILC2的調(diào)節(jié)功能。為了進(jìn)一步驗(yàn)證上述結(jié)果，我們將miR-155mimics轉(zhuǎn)入ILC2，在IL-33、IL-25、IL-2、PMA/I刺激48h后，通過(guò)RT-qPCR檢測(cè)候選靶基因的表達(dá)。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，過(guò)表達(dá)miR-155可以抑制ILC2中HBP1（P=0.058）、CREBRF、TLE4、TP53INP1、KBTDB2基因表達(dá)，其中miR-155對(duì)TP53INP1的抑制作用最為明顯。這些結(jié)果表明，上述基因很可能作為miR-155下游靶點(diǎn)參與miR-155對(duì)ILC2功能的調(diào)節(jié)過(guò)程。圖4：RT-qPCR檢測(cè)miR-155過(guò)表達(dá)后，候選靶基因mRNA表達(dá)水平的改變。以β-Actin基因?yàn)閮?nèi)參，將對(duì)照組均化為1。*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。


本文編號(hào)：2980546