本文關(guān)鍵詞：miR-21-5p靶向作用喉癌候選抑瘤基因LCRG1對(duì)Hep2細(xì)胞生物學(xué)性狀影響的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]確定mi R-21-5p與LCRG1的作用位點(diǎn),研究mi R-21-5p通過靶向調(diào)控喉癌候選抑瘤基因LCRG1參與喉癌發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制。[方法]前期實(shí)驗(yàn)預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)mi R-21-5p與LCRG1有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn),根據(jù)mi R-21-5p與LCRG1 3’UTR的結(jié)合位點(diǎn)來構(gòu)建其野生型和突變體載體,使相應(yīng)的mi RNA種子區(qū)與LCRG1 3’UTR不能夠互補(bǔ)結(jié)合,測(cè)定LCRG13’UTR熒光素酶的活性,運(yùn)用突變體實(shí)驗(yàn)確定其結(jié)合位點(diǎn);將mi R-21-5p mimic和mi R-21-5p inhibitor瞬轉(zhuǎn)入Hep2細(xì)胞,RT-PCR驗(yàn)證mi R-21-5p的表達(dá)情況后,利用Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)LCRG1蛋白在瞬轉(zhuǎn)后喉癌細(xì)胞系Hep2中的表達(dá)情況。采用MTT實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、遷移侵襲實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn),觀察mi R-21-5p靶向調(diào)控LCRG1的表達(dá)對(duì)Hep2細(xì)胞生物學(xué)性狀的變化。[結(jié)果]1.mi R-21-5p與LCRG1 3’UTR的第一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的野生型能使熒光素酶的活性顯著性降低(P0.05),突變體無顯著性降低,而第二個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的野生型和突變體均使熒光素酶的活性顯著性降低(P0.05),表明第一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)為其結(jié)合位點(diǎn)。2.瞬轉(zhuǎn)mi R-21-5p mimic后,RT-PCR檢測(cè)顯示mi R-21-5p的表達(dá)明顯上調(diào)(P0.05),而瞬轉(zhuǎn)mi R-21-5p inhibitor后,mi R-21-5p的表達(dá)明顯下調(diào)(P0.05),說明瞬轉(zhuǎn)成功。3.上調(diào)mi R-21-5p可抑制LCRG1蛋白水平的表達(dá),而下調(diào)mi R-21-5p可促進(jìn)LCRG1蛋白水平的表達(dá)。Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示:瞬轉(zhuǎn)mi R-21-5p mimic后,mi R-21-5p mimic實(shí)驗(yàn)組較mimic NC對(duì)照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,LCRG1的蛋白水平明顯降低(P0.05);而瞬轉(zhuǎn)mi R-21-5p inhibitor后,mi R-21-5p inhibitor實(shí)驗(yàn)組較inhibitor NC對(duì)照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,LCRG1的蛋白水平明顯升高(P0.05)。4.上調(diào)mi R-21-5p抑制LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力增強(qiáng),而下調(diào)mi R-21-5p促進(jìn)LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力減弱。MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:瞬轉(zhuǎn)mi R-21-5p mimic后,mi R-21-5p mimic實(shí)驗(yàn)組較mimic NC對(duì)照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,生長(zhǎng)速度均明顯升高(P0.05),表明上調(diào)mi R-21-5p抑制LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的增殖能力增強(qiáng);而瞬轉(zhuǎn)mi R-21-5p inhibitor后,mi R-21-5p inhibitor實(shí)驗(yàn)組較inhibitor NC對(duì)照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,生長(zhǎng)速度均明顯降低(P0.05),表明下調(diào)mi R-21-5p促進(jìn)LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的增殖能力減弱。劃痕實(shí)驗(yàn)、遷移實(shí)驗(yàn)及侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:瞬轉(zhuǎn)mi R-21-5p mimic后,mi R-21-5p mimic實(shí)驗(yàn)組較mimic NC對(duì)照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,遷移及侵襲能力均明顯升高(P0.05),表明上調(diào)mi R-21-5p抑制LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的遷移及侵襲能力增強(qiáng);而瞬轉(zhuǎn)mi R-21-5p inhibitor后,mi R-21-5p inhibitor實(shí)驗(yàn)組較inhibitor NC對(duì)照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,遷移及侵襲能力均明顯降低(P0.05),表明下調(diào)mi R-21-5p促進(jìn)LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的遷移及侵襲能力減弱。另流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示:瞬轉(zhuǎn)mi R-21-5p inhibitor后,mi R-21-5p inhibitor實(shí)驗(yàn)組較inhibitor NC對(duì)照組和Hep2細(xì)胞未轉(zhuǎn)染組相比,G1期細(xì)胞百分比明顯升高,且細(xì)胞凋亡率明顯增高,表明下調(diào)mi R-21-5p促進(jìn)LCRG1的表達(dá)使Hep2細(xì)胞的凋亡能力增強(qiáng),細(xì)胞周期主要阻滯于G1期。[結(jié)論]在Hep2細(xì)胞中mi R-21-5p能抑制喉癌候選抑瘤基因LCRG1的表達(dá),并使Hep2細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力均增強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：mi R-21-5p LCRG1 Hep2細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R739.65
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 主要中英文縮略詞表11-12
• 第1章 緒論12-16
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法16-32
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料16-18
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法18-32
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果32-44
• 3.1 Luciferase實(shí)驗(yàn)32-34
• 3.2 RT-PCR驗(yàn)證miR215p的表達(dá)34-35
• 3.3 Western blot檢測(cè)35-36
• 3.4 MTT實(shí)驗(yàn)36-37
• 3.5 劃痕實(shí)驗(yàn)37-39
• 3.6 遷移實(shí)驗(yàn)39-41
• 3.7 侵襲實(shí)驗(yàn)41-42
• 3.8 流式實(shí)驗(yàn)42-44
• 第4章 討論44-48
• 第5章 結(jié)論48-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 文獻(xiàn)綜述54-64
• 參考文獻(xiàn)60-64
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文64-66
• 本研究課題資助項(xiàng)目66-68
• 致謝68

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 郝棟;胡世頡;董琛;;miRNA調(diào)控腦膠質(zhì)瘤癌基因表達(dá)研究進(jìn)展[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2013年05期

2 鄢夢(mèng)竹;李書國(guó);;miRNAs與細(xì)胞衰老相關(guān)信號(hào)路徑的研究進(jìn)展[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2014年20期

3 李群;陸達(dá)鍇;崔翔;夏天;沈志森;郭俊明;;非編碼RNA在喉癌發(fā)生中的作用及其臨床意義[J];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2013年12期

4 李海霞;豆穎;屈鳳勤;曹翠萍;;E-cadherin在喉鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)的初步研究[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科雜志;2015年01期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 朱勤;miR-21-PDCD4-AP-1反饋環(huán)路參與肝癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2012年

2 許丹;梔子苷的提取分離及藥物調(diào)控神經(jīng)病理性疼痛的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2014年

3 劉鳳霞;食管鱗狀細(xì)胞癌中microRNA-21與ERK1/2通路調(diào)控機(jī)制的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 趙娟霞;靶向作用喉癌候選抑瘤基因LCRG1的microRNAs的初步篩選研究[D];南華大學(xué);2013年

2 費(fèi)喜佳;β-谷甾醇對(duì)Hela和耐藥Hela/DDP細(xì)胞中miRNAs及靶基因的影響[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2012年

3 鄧軍;上調(diào)miR-21對(duì)HT-29細(xì)胞生物學(xué)行為及對(duì)5-FU和放療敏感性影響[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

4 任敬遠(yuǎn);MicroRNA-21在喉癌中的表達(dá)及其對(duì)喉癌侵襲與凋亡的調(diào)節(jié)[D];哈爾濱醫(yī)科大學(xué);2012年

5 王洋;MicroRNA-155對(duì)喉鱗癌細(xì)胞株Hep-2惡性行為的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

6 林丹;miR-146a基因多態(tài)性與喉癌易感性的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2014年

7 王媛媛;上調(diào)miR-429表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞凋亡和侵襲的作用[D];鄭州大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：miR-21-5p靶向作用喉癌候選抑瘤基因LCRG1對(duì)Hep2細(xì)胞生物學(xué)性狀影響的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：296182