本文關(guān)鍵詞：CD47在喉鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義和對(duì)喉癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:檢測(cè)CD47在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平,分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系,并探討在體外實(shí)驗(yàn)中以重組慢病毒為載體沉默CD47基因及抗CD47單克隆抗體(抗CD47單抗)對(duì)喉癌細(xì)胞Hep-2增殖、凋亡及侵襲等細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,為喉癌的分子靶向治療提供理論依據(jù)。方法:1、用蛋白印記Western blot檢測(cè)CD47在喉鱗狀細(xì)胞癌組織及癌旁正常喉上皮組織中的表達(dá)水平,并分析其與喉癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系,證明其在喉癌中的意義;2、構(gòu)建CD47干擾慢病毒載體,以構(gòu)建好的CD47-RNA干擾慢病毒載體(CD47-RNAi-LV)干擾喉癌細(xì)胞株Hep-2,設(shè)立正常對(duì)照組、陰性對(duì)照組、CD47-RNAi-LV 1、CD47-RNAi-LV2、CD47-RNAi-LV3、CD47-RNAi-LV 4轉(zhuǎn)染組,熒光顯微鏡下初步觀察轉(zhuǎn)染率,并運(yùn)用Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染前、后Hep-2細(xì)胞中CD47蛋白的表達(dá),篩選出干擾效率最高的RNAi片段;3、采用MTT比色法、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)RNA干擾及抗CD47單抗兩種方式對(duì)喉癌細(xì)胞Hep-2增殖、凋亡及侵襲能力的影響。結(jié)果:1、CD47蛋白在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平要明顯高于癌旁正常喉上皮組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),CD47在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)水平與腫瘤T分期、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而與患者的年齡和病理分化程度無(wú)顯著關(guān)系,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、CD47-RNAi-LV能高效地轉(zhuǎn)入喉癌Hep-2細(xì)胞中,熒光顯微鏡下觀察其轉(zhuǎn)染率達(dá)90%以上,Western blot顯示轉(zhuǎn)染后Hep-2細(xì)胞中CD47蛋白表達(dá)抑制率可高達(dá)87.03%。3、MTT比色法結(jié)果顯示:干擾后第1-3天干擾組與正常對(duì)照組及陰性對(duì)照組對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05),抗CD47單抗組與其他各組比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),第4-7天干擾組及抗CD47單抗組與對(duì)照組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組的凋亡率(%),分別為:正常對(duì)照組0.28±0.04,陰性對(duì)照組0.40±0.05,干擾組3.75±0.26,抗體組4.08±0.27,干擾組、抗體組分別與正常對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比均具有顯著差異(p0.01),干擾組與抗體組比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示24h各組間細(xì)胞穿膜數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),48h、72h干擾組及抗體組細(xì)胞穿膜數(shù)量較正常對(duì)照組及陰性對(duì)照組均明顯下降(p0.05),干擾組及抗體組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:CD47在喉鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)增高,干擾CD47基因和抗CD47單抗能抑制喉癌細(xì)胞的增殖、侵襲能力,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,且兩者作用效果一致。
【關(guān)鍵詞】：喉腫瘤 癌 鱗狀細(xì)胞 CD47 生物學(xué)行為
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R739.65
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料12-16
• 2.1 標(biāo)本及細(xì)胞系12
• 2.1.1 標(biāo)本12
• 2.1.2 細(xì)胞系12
• 2.2 主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備12-13
• 2.3 主要試劑及耗材13-14
• 2.4 自配試劑14-16
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法16-23
• 3.1 蛋白印跡Western blot檢測(cè)喉癌組織中CD47蛋白的表達(dá)16-18
• 3.1.1 總蛋白提取16
• 3.1.2 蛋白濃度測(cè)定(BCA法)16
• 3.1.3 SDS-PAGE電泳16-17
• 3.1.4 轉(zhuǎn)膜17
• 3.1.5 封閉17
• 3.1.6 化學(xué)發(fā)光、顯影、定影17-18
• 3.1.7 凝膠圖像分析18
• 3.2 人喉癌細(xì)胞Hep-2 的培養(yǎng)18-19
• 3.2.1 細(xì)胞的復(fù)蘇18
• 3.2.2 細(xì)胞傳代18-19
• 3.3 Hep-2 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染19-20
• 3.3.1 Hep-2 細(xì)胞感染預(yù)實(shí)驗(yàn)19
• 3.3.2 重組慢病毒轉(zhuǎn)染喉鱗癌細(xì)胞Hep-219-20
• 3.3.3 Western blot檢測(cè)慢病毒轉(zhuǎn)染NC-LV及CD47-RNAi-LV后Hep-2細(xì)胞中CD47的表達(dá)量20
• 3.4 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性變化20
• 3.5 Annexin V PE/7-AAD雙染法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率20-21
• 3.6 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞體外侵襲能力的變化21-22
• 3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22-23
• 第4章 結(jié)果23-29
• 4.1 Western blot結(jié)果顯示CD47在喉癌組織中呈高表達(dá)，，與腫瘤的T分期、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)23-24
• 4.2 CD47-RNAi-LV對(duì)Hep-2 細(xì)胞CD47蛋白表達(dá)的影響24-26
• 4.3 MTT法檢測(cè)CD47對(duì)Hep-2 細(xì)胞增殖的影響26-27
• 4.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD47對(duì)Hep-2 細(xì)胞凋亡的影響27
• 4.5 Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CD47對(duì)Hep-2 細(xì)胞侵襲能力的影響27-29
• 第5章 討論29-32
• 第6章 結(jié)論和展望32-33
• 6.1 結(jié)論32
• 6.2 展望32-33
• 致謝33-34
• 參考文獻(xiàn)34-37
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果37-38
• 綜述38-44
• 參考文獻(xiàn)42-44

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本文編號(hào)：292658