DHA激活NADPH氧化酶/ROS/Nrf2通路誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞表達(dá)HO-1
發(fā)布時(shí)間：2020-12-09 22:29
目的:觀察二十二碳六烯酸（Docosahexaenoic acid,DHA）誘導(dǎo)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞表達(dá)血紅素氧合酶（Heme oxygenase,HO）-1的分子機(jī)制。方法:培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞系A(chǔ)RPE-19,加入30100μmol/L DHA作用424 h。Western blot檢測(cè)HO-1的表達(dá)及NADPH氧化酶p47phox亞基的磷酸化;熒光探針H2DCFDA檢測(cè)活性氧（Reactive oxygen species,ROS）的產(chǎn)生;免疫熒光分析Nrf2在細(xì)胞核及胞漿中的表達(dá);最后采用NADPH氧化酶抑制劑DPI,ROS抑制劑NAC或采用siRNA干擾Nrf2表達(dá),檢測(cè)其對(duì)HO-1表達(dá)的影響。結(jié)果:100μmol/L DHA作用ARPE-19細(xì)胞30 min即可誘導(dǎo)p47phox亞基的磷酸化,同時(shí)能增加細(xì)胞內(nèi)ROS的含量;采用NADPH氧化酶抑制劑DPI處理后,ROS水平顯著降低;免疫熒光實(shí)驗(yàn)顯示DHA作用細(xì)胞2 h后,可誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位,采用DPI或NAC處理后,Nrf2核轉(zhuǎn)位水...
【文章來(lái)源】：中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2016年05期 第644-647頁(yè) 北大核心
【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)
【部分圖文】：
DHA誘導(dǎo)AＲPE-19細(xì)胞p47phox亞基磷酸化
圖2DHA與DPI對(duì)AＲPE-19細(xì)胞產(chǎn)生ＲOS的影響Fig．2EffectofDHAandDPIonproductionofＲOSinAＲPE-19cellsNote:*.P＜0.05，ascomparedwithcontrol(0μmol/LDHA);#.P＜0.05，ascomparedwith0μmol/LDHA.圖3DPI、NAC對(duì)DHA誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位的影響Fig．3EffectofDPI，NACandDHAonnucleartransloca-tionofNrf22.2DHA經(jīng)NADPH氧化酶誘導(dǎo)ＲOS產(chǎn)生30～100μmol/LDHA處理AＲPE-19細(xì)胞4h后，可有效增加細(xì)胞內(nèi)ＲOS的含量。而細(xì)胞在DHA處理前給予10μmol/LDPI預(yù)處理1h，結(jié)果顯示ＲOS含量明顯降低(圖2)。2.3DHA經(jīng)ＲOS激活Nrf2AＲPE-19細(xì)胞在DHA處理前，Nrf2位于細(xì)胞漿中。經(jīng)100μmol/LDHA處理4h后，細(xì)胞核中Nrf2顯著增多。而AＲPE-19首先用10μmol/LDPI或10mmol/LNAC預(yù)處理1h后，可顯著抑制DHA誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位(圖3)。2.4DHA上調(diào)AＲPE-19細(xì)胞中HO-1蛋白表達(dá)未刺激時(shí)，AＲPE-19細(xì)胞內(nèi)HO-1蛋白表達(dá)水平很低。采用30、50和100μmol/LDHA刺激18h后，圖4DHA上調(diào)AＲPE-19細(xì)胞表達(dá)HO-1蛋白Fig．4DHAinducesHO-1expressioninAＲPE-19cells圖5DPI、NAC或Nrf2siＲNA對(duì)DHA誘導(dǎo)HO-1表達(dá)的影響Fig．5EffectofDPI，NACandNrf2siＲNAonDHA-in-ducedHO-1expressionNote:A.DPIandNAConDHAinducedHO-1expression;B.EffectofNrf2siＲNAonDHA-inducedHO-1expression.HO-1蛋白表達(dá)水平隨著DHA濃度的增高而遞增(圖4)。2.5DHA誘導(dǎo)HO-1產(chǎn)生與NADPH氧化酶/ＲOS/Nrf2有關(guān)AＲPE-19細(xì)胞在DHA處理前，HO-1表達(dá)量極低。經(jīng)100μmol/LDHA處理18h后，細(xì)胞中HO-1表達(dá)顯著增多。而AＲPE-19首先用10μmol/LDPI或10mmol/LNAC預(yù)處理1h后，可顯著抑制DHA誘導(dǎo)HO-1表達(dá)。此外，采用siＲNA干擾Nrf2表達(dá)后，HO-1表達(dá)水平也顯著減少(圖5)。3討論AMD是與衰老密切相關(guān)的一種疾病?
圖2DHA與DPI對(duì)AＲPE-19細(xì)胞產(chǎn)生ＲOS的影響Fig．2EffectofDHAandDPIonproductionofＲOSinAＲPE-19cellsNote:*.P＜0.05，ascomparedwithcontrol(0μmol/LDHA);#.P＜0.05，ascomparedwith0μmol/LDHA.圖3DPI、NAC對(duì)DHA誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位的影響Fig．3EffectofDPI，NACandDHAonnucleartransloca-tionofNrf22.2DHA經(jīng)NADPH氧化酶誘導(dǎo)ＲOS產(chǎn)生30～100μmol/LDHA處理AＲPE-19細(xì)胞4h后，可有效增加細(xì)胞內(nèi)ＲOS的含量。而細(xì)胞在DHA處理前給予10μmol/LDPI預(yù)處理1h，結(jié)果顯示ＲOS含量明顯降低(圖2)。2.3DHA經(jīng)ＲOS激活Nrf2AＲPE-19細(xì)胞在DHA處理前，Nrf2位于細(xì)胞漿中。經(jīng)100μmol/LDHA處理4h后，細(xì)胞核中Nrf2顯著增多。而AＲPE-19首先用10μmol/LDPI或10mmol/LNAC預(yù)處理1h后，可顯著抑制DHA誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位(圖3)。2.4DHA上調(diào)AＲPE-19細(xì)胞中HO-1蛋白表達(dá)未刺激時(shí)，AＲPE-19細(xì)胞內(nèi)HO-1蛋白表達(dá)水平很低。采用30、50和100μmol/LDHA刺激18h后，圖4DHA上調(diào)AＲPE-19細(xì)胞表達(dá)HO-1蛋白Fig．4DHAinducesHO-1expressioninAＲPE-19cells圖5DPI、NAC或Nrf2siＲNA對(duì)DHA誘導(dǎo)HO-1表達(dá)的影響Fig．5EffectofDPI，NACandNrf2siＲNAonDHA-in-ducedHO-1expressionNote:A.DPIandNAConDHAinducedHO-1expression;B.EffectofNrf2siＲNAonDHA-inducedHO-1expression.HO-1蛋白表達(dá)水平隨著DHA濃度的增高而遞增(圖4)。2.5DHA誘導(dǎo)HO-1產(chǎn)生與NADPH氧化酶/ＲOS/Nrf2有關(guān)AＲPE-19細(xì)胞在DHA處理前，HO-1表達(dá)量極低。經(jīng)100μmol/LDHA處理18h后，細(xì)胞中HO-1表達(dá)顯著增多。而AＲPE-19首先用10μmol/LDPI或10mmol/LNAC預(yù)處理1h后，可顯著抑制DHA誘導(dǎo)HO-1表達(dá)。此外，采用siＲNA干擾Nrf2表達(dá)后，HO-1表達(dá)水平也顯著減少(圖5)。3討論AMD是與衰老密切相關(guān)的一種疾病?
本文編號(hào)：2907580
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【部分圖文】：
DHA誘導(dǎo)AＲPE-19細(xì)胞p47phox亞基磷酸化
圖2DHA與DPI對(duì)AＲPE-19細(xì)胞產(chǎn)生ＲOS的影響Fig．2EffectofDHAandDPIonproductionofＲOSinAＲPE-19cellsNote:*.P＜0.05，ascomparedwithcontrol(0μmol/LDHA);#.P＜0.05，ascomparedwith0μmol/LDHA.圖3DPI、NAC對(duì)DHA誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位的影響Fig．3EffectofDPI，NACandDHAonnucleartransloca-tionofNrf22.2DHA經(jīng)NADPH氧化酶誘導(dǎo)ＲOS產(chǎn)生30～100μmol/LDHA處理AＲPE-19細(xì)胞4h后，可有效增加細(xì)胞內(nèi)ＲOS的含量。而細(xì)胞在DHA處理前給予10μmol/LDPI預(yù)處理1h，結(jié)果顯示ＲOS含量明顯降低(圖2)。2.3DHA經(jīng)ＲOS激活Nrf2AＲPE-19細(xì)胞在DHA處理前，Nrf2位于細(xì)胞漿中。經(jīng)100μmol/LDHA處理4h后，細(xì)胞核中Nrf2顯著增多。而AＲPE-19首先用10μmol/LDPI或10mmol/LNAC預(yù)處理1h后，可顯著抑制DHA誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位(圖3)。2.4DHA上調(diào)AＲPE-19細(xì)胞中HO-1蛋白表達(dá)未刺激時(shí)，AＲPE-19細(xì)胞內(nèi)HO-1蛋白表達(dá)水平很低。采用30、50和100μmol/LDHA刺激18h后，圖4DHA上調(diào)AＲPE-19細(xì)胞表達(dá)HO-1蛋白Fig．4DHAinducesHO-1expressioninAＲPE-19cells圖5DPI、NAC或Nrf2siＲNA對(duì)DHA誘導(dǎo)HO-1表達(dá)的影響Fig．5EffectofDPI，NACandNrf2siＲNAonDHA-in-ducedHO-1expressionNote:A.DPIandNAConDHAinducedHO-1expression;B.EffectofNrf2siＲNAonDHA-inducedHO-1expression.HO-1蛋白表達(dá)水平隨著DHA濃度的增高而遞增(圖4)。2.5DHA誘導(dǎo)HO-1產(chǎn)生與NADPH氧化酶/ＲOS/Nrf2有關(guān)AＲPE-19細(xì)胞在DHA處理前，HO-1表達(dá)量極低。經(jīng)100μmol/LDHA處理18h后，細(xì)胞中HO-1表達(dá)顯著增多。而AＲPE-19首先用10μmol/LDPI或10mmol/LNAC預(yù)處理1h后，可顯著抑制DHA誘導(dǎo)HO-1表達(dá)。此外，采用siＲNA干擾Nrf2表達(dá)后，HO-1表達(dá)水平也顯著減少(圖5)。3討論AMD是與衰老密切相關(guān)的一種疾病?
圖2DHA與DPI對(duì)AＲPE-19細(xì)胞產(chǎn)生ＲOS的影響Fig．2EffectofDHAandDPIonproductionofＲOSinAＲPE-19cellsNote:*.P＜0.05，ascomparedwithcontrol(0μmol/LDHA);#.P＜0.05，ascomparedwith0μmol/LDHA.圖3DPI、NAC對(duì)DHA誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位的影響Fig．3EffectofDPI，NACandDHAonnucleartransloca-tionofNrf22.2DHA經(jīng)NADPH氧化酶誘導(dǎo)ＲOS產(chǎn)生30～100μmol/LDHA處理AＲPE-19細(xì)胞4h后，可有效增加細(xì)胞內(nèi)ＲOS的含量。而細(xì)胞在DHA處理前給予10μmol/LDPI預(yù)處理1h，結(jié)果顯示ＲOS含量明顯降低(圖2)。2.3DHA經(jīng)ＲOS激活Nrf2AＲPE-19細(xì)胞在DHA處理前，Nrf2位于細(xì)胞漿中。經(jīng)100μmol/LDHA處理4h后，細(xì)胞核中Nrf2顯著增多。而AＲPE-19首先用10μmol/LDPI或10mmol/LNAC預(yù)處理1h后，可顯著抑制DHA誘導(dǎo)Nrf2核轉(zhuǎn)位(圖3)。2.4DHA上調(diào)AＲPE-19細(xì)胞中HO-1蛋白表達(dá)未刺激時(shí)，AＲPE-19細(xì)胞內(nèi)HO-1蛋白表達(dá)水平很低。采用30、50和100μmol/LDHA刺激18h后，圖4DHA上調(diào)AＲPE-19細(xì)胞表達(dá)HO-1蛋白Fig．4DHAinducesHO-1expressioninAＲPE-19cells圖5DPI、NAC或Nrf2siＲNA對(duì)DHA誘導(dǎo)HO-1表達(dá)的影響Fig．5EffectofDPI，NACandNrf2siＲNAonDHA-in-ducedHO-1expressionNote:A.DPIandNAConDHAinducedHO-1expression;B.EffectofNrf2siＲNAonDHA-inducedHO-1expression.HO-1蛋白表達(dá)水平隨著DHA濃度的增高而遞增(圖4)。2.5DHA誘導(dǎo)HO-1產(chǎn)生與NADPH氧化酶/ＲOS/Nrf2有關(guān)AＲPE-19細(xì)胞在DHA處理前，HO-1表達(dá)量極低。經(jīng)100μmol/LDHA處理18h后，細(xì)胞中HO-1表達(dá)顯著增多。而AＲPE-19首先用10μmol/LDPI或10mmol/LNAC預(yù)處理1h后，可顯著抑制DHA誘導(dǎo)HO-1表達(dá)。此外，采用siＲNA干擾Nrf2表達(dá)后，HO-1表達(dá)水平也顯著減少(圖5)。3討論AMD是與衰老密切相關(guān)的一種疾病?
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