線粒體融合蛋白2在小鼠角膜形態(tài)發(fā)育中的作用
發(fā)布時間：2020-12-09 10:50
目的:線粒體融合蛋白2（mitofusin 2）定位于線粒體外膜和線粒體相關(guān)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜中,參與調(diào)節(jié)線粒體形態(tài)和功能。Mfn2也被稱為腫瘤抑制基因（HSG）,該基因無論在體內(nèi)還是體外在控制細胞增殖和細胞凋亡方面都具有主要作用。研究表明參與線粒體融合和分裂的蛋白也廣泛參與細胞過程,如線粒體代謝,氧化還原信號轉(zhuǎn)導(dǎo),維持mtDNA完整性和細胞死亡。眼科中的許多疾病,如白內(nèi)障、青光眼、視網(wǎng)膜病變、角膜病變等都與細胞的增殖凋亡、線粒體功能改變相關(guān)。本研究旨在探討在表面外胚層條件性敲除Mfn2基因引起小鼠角膜發(fā)育不良的形成原因。研究方法:1.使用Le-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建了基于loxp系統(tǒng)的Mfn2條件基因敲除小鼠（Mfn2 CKO）,在晶狀體、角膜和眼瞼等表皮外胚層選擇性地敲除Mfn2基因。PCR進行基因型分析及確定。對選擇攜帶Le-Cre+/-;Mfn2fl/fl基因的雄鼠與Mfn2fl/fl的雌鼠交配,將子代中Le-Cre+/-;Mfn2fl/fl（Mfn2 CKO）和Mfn2
【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省
【文章頁數(shù)】：41 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
實驗動物培育圖
圖 2 PCR 鑒定方案分析 Mfn2 基因敲除鼠的基因型。胚層 Mfn2 基因條件性敲除導(dǎo)致小眼球畸形出生 2 個月大實驗組與對照組小鼠進行眼部的大體照相，下圖 a 和 b 對fn2 基因敲除小鼠眼裂小。將眼球取出后放入 1*PBS 的緩沖液中解剖顯并拍照，下圖 c 和 d 對比顯示兩組完整眼球差異為實驗組小鼠的眼球虹膜與角膜相貼。2 組小鼠眼球的 HE 染色結(jié)果在下圖 e 和 f 對比顯小鼠的整個眼球體積相比對照組減小，正常房角結(jié)構(gòu)消失。圖 e 和 f為 20um。分別對 2 組小鼠眼球進行免疫熒光實驗驗證 Mfn2 在蛋白達，結(jié)果顯示實驗組 h 中的 Mfn2 基因被敲除。（圖 3）
圖 3 條件性敲除表面外胚層上的 Mfn2 基因引起鼠眼形態(tài)改變3.3 Mfn2 CKO 鼠與 Mfn2 WT 鼠角膜發(fā)育差異3.3.1 條件敲除表面外胚層上 Mfn2 基因 HE 染色觀察小鼠角膜形態(tài)發(fā)育差異為了觀察 Mfn2 CKO 鼠角膜發(fā)育情況，選取 E15.5,16.5,17.5,P4 和 P60 的鼠取眼球進行 HE 染色。根據(jù)染色結(jié)果可以看出，在 E15.5 時，Mfn2 WT 小鼠角膜形態(tài)發(fā)育與正常小鼠一致，但 Mfn2 CKO 小鼠前房塌陷，角膜不與晶狀體表面分離。從 E16.5 到 E17.5，Mfn2 CKO 小鼠的角膜厚度明顯大于 Mfn2 WT小鼠。分別測量 Mfn2 CKO 小鼠和 Mfn2 WT 小鼠的角膜上皮、角膜基質(zhì)和角膜內(nèi)皮細胞厚度。與 Mfn2 WT 小鼠相比，Mfn2 CKO 小鼠的角膜上皮和角膜內(nèi)皮未見明顯異常，但角膜基質(zhì)存在顯著差異，Mfn2 CKO 小鼠的角膜基質(zhì)厚度明顯增加。在 P60 時，Mfn2 WT 小鼠有清晰的內(nèi)皮層，角膜基質(zhì)纖維呈平行排列。而在 Mfn2 CKO 小鼠中發(fā)現(xiàn)，角膜基質(zhì)纖維隨機排列，且厚度增加。故推測這
【參考文獻】：
期刊論文
[1]線粒體融合蛋白2的結(jié)構(gòu)與功能研究進展[J]. 應(yīng)嵐,盧中秋,姚詠明. 生理科學進展. 2016(02)
[2]線粒體融合蛋白-2的功能[J]. 朱學敏,孟慶華. 北京醫(yī)學. 2015(12)
[3]線粒體DNA損傷與視網(wǎng)膜色素上皮細胞關(guān)系的研究進展[J]. 俞永珍,鄒秀蘭,鄒玉平. 天津醫(yī)藥. 2015(09)
[4]線粒體融合蛋白2改善高脂誘導(dǎo)的骨骼肌細胞胰島素抵抗機制的研究[J]. 聶倩,宋桉,王超,孔德賢,張雪梅,宋光耀. 中國糖尿病雜志. 2014(11)
[5]角膜發(fā)育的分子調(diào)控機制研究進展[J]. 何雪菲,趙江月,張勁松. 中華實驗眼科雜志. 2011 (12)
[6]遺傳性感覺神經(jīng)病I型一家系調(diào)查[J]. 韓立影,方琪,俞立強. 中國誤診學雜志. 2011(25)
[7]mfn2基因轉(zhuǎn)染對非酒精性脂肪肝細胞線粒體功能的影響[J]. 張勇,胡文君,王堯,夏耘,鄭啟昌. 中國病理生理雜志. 2010(03)
[8]視網(wǎng)膜色素上皮細胞線粒體DNA的氧化損傷研究[J]. 唐敏,樊瑩,傅揚,顧青. 眼科研究. 2007(11)
[9]氧化應(yīng)激與細胞凋亡關(guān)系的研究進展[J]. 褚啟龍. 衛(wèi)生研究. 2003(03)
本文編號：2906754
【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省
【文章頁數(shù)】：41 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
實驗動物培育圖
圖 2 PCR 鑒定方案分析 Mfn2 基因敲除鼠的基因型。胚層 Mfn2 基因條件性敲除導(dǎo)致小眼球畸形出生 2 個月大實驗組與對照組小鼠進行眼部的大體照相，下圖 a 和 b 對fn2 基因敲除小鼠眼裂小。將眼球取出后放入 1*PBS 的緩沖液中解剖顯并拍照，下圖 c 和 d 對比顯示兩組完整眼球差異為實驗組小鼠的眼球虹膜與角膜相貼。2 組小鼠眼球的 HE 染色結(jié)果在下圖 e 和 f 對比顯小鼠的整個眼球體積相比對照組減小，正常房角結(jié)構(gòu)消失。圖 e 和 f為 20um。分別對 2 組小鼠眼球進行免疫熒光實驗驗證 Mfn2 在蛋白達，結(jié)果顯示實驗組 h 中的 Mfn2 基因被敲除。（圖 3）
圖 3 條件性敲除表面外胚層上的 Mfn2 基因引起鼠眼形態(tài)改變3.3 Mfn2 CKO 鼠與 Mfn2 WT 鼠角膜發(fā)育差異3.3.1 條件敲除表面外胚層上 Mfn2 基因 HE 染色觀察小鼠角膜形態(tài)發(fā)育差異為了觀察 Mfn2 CKO 鼠角膜發(fā)育情況，選取 E15.5,16.5,17.5,P4 和 P60 的鼠取眼球進行 HE 染色。根據(jù)染色結(jié)果可以看出，在 E15.5 時，Mfn2 WT 小鼠角膜形態(tài)發(fā)育與正常小鼠一致，但 Mfn2 CKO 小鼠前房塌陷，角膜不與晶狀體表面分離。從 E16.5 到 E17.5，Mfn2 CKO 小鼠的角膜厚度明顯大于 Mfn2 WT小鼠。分別測量 Mfn2 CKO 小鼠和 Mfn2 WT 小鼠的角膜上皮、角膜基質(zhì)和角膜內(nèi)皮細胞厚度。與 Mfn2 WT 小鼠相比，Mfn2 CKO 小鼠的角膜上皮和角膜內(nèi)皮未見明顯異常，但角膜基質(zhì)存在顯著差異，Mfn2 CKO 小鼠的角膜基質(zhì)厚度明顯增加。在 P60 時，Mfn2 WT 小鼠有清晰的內(nèi)皮層，角膜基質(zhì)纖維呈平行排列。而在 Mfn2 CKO 小鼠中發(fā)現(xiàn)，角膜基質(zhì)纖維隨機排列，且厚度增加。故推測這
【參考文獻】：
期刊論文
[1]線粒體融合蛋白2的結(jié)構(gòu)與功能研究進展[J]. 應(yīng)嵐,盧中秋,姚詠明. 生理科學進展. 2016(02)
[2]線粒體融合蛋白-2的功能[J]. 朱學敏,孟慶華. 北京醫(yī)學. 2015(12)
[3]線粒體DNA損傷與視網(wǎng)膜色素上皮細胞關(guān)系的研究進展[J]. 俞永珍,鄒秀蘭,鄒玉平. 天津醫(yī)藥. 2015(09)
[4]線粒體融合蛋白2改善高脂誘導(dǎo)的骨骼肌細胞胰島素抵抗機制的研究[J]. 聶倩,宋桉,王超,孔德賢,張雪梅,宋光耀. 中國糖尿病雜志. 2014(11)
[5]角膜發(fā)育的分子調(diào)控機制研究進展[J]. 何雪菲,趙江月,張勁松. 中華實驗眼科雜志. 2011 (12)
[6]遺傳性感覺神經(jīng)病I型一家系調(diào)查[J]. 韓立影,方琪,俞立強. 中國誤診學雜志. 2011(25)
[7]mfn2基因轉(zhuǎn)染對非酒精性脂肪肝細胞線粒體功能的影響[J]. 張勇,胡文君,王堯,夏耘,鄭啟昌. 中國病理生理雜志. 2010(03)
[8]視網(wǎng)膜色素上皮細胞線粒體DNA的氧化損傷研究[J]. 唐敏,樊瑩,傅揚,顧青. 眼科研究. 2007(11)
[9]氧化應(yīng)激與細胞凋亡關(guān)系的研究進展[J]. 褚啟龍. 衛(wèi)生研究. 2003(03)
本文編號：2906754
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