本文關(guān)鍵詞：間質(zhì)蛋白Periostin對(duì)鼻咽癌6-10B細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)理的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:前期研究發(fā)現(xiàn)Periostin(POSTN)是高表達(dá)于鼻咽癌間質(zhì)的一種分泌蛋白。臨床資料分析發(fā)現(xiàn)POSTN與鼻咽癌的轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后密切相關(guān),體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)POSTN可以促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。本研究擬在前期研究的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探究POSTN對(duì)鼻咽癌細(xì)胞凋亡的影響及其可能的機(jī)理。方法:利用本室保存的鼻咽癌6-10B系列細(xì)胞株6-10B、6-10B-GFP(為穩(wěn)轉(zhuǎn)了空載體的6-10B)、6-10B-POSTN(為穩(wěn)轉(zhuǎn)了POSTN的6-10B),經(jīng)Western Blot驗(yàn)證POSTN表達(dá)效果。接著用Western blot檢測(cè)POSTN轉(zhuǎn)染前后,6-10B細(xì)胞中P53、P-AKT、BAX等凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率的改變。免疫組化檢測(cè)正常鼻咽黏膜組織和鼻咽癌組織中P53蛋白的表達(dá)水平。提取穩(wěn)轉(zhuǎn)了POSTN的6-10B系列細(xì)胞和穩(wěn)轉(zhuǎn)了POSTN的成纖維系列細(xì)胞培養(yǎng)上清,分別刺激6-10B細(xì)胞,檢測(cè)刺激前后6-10B細(xì)胞中P53、P-AKT、BAX等凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。最后,構(gòu)建能穩(wěn)定干擾人P53表達(dá)的shRNA干擾載體,用shRNA干擾載體分別轉(zhuǎn)染鼻咽癌細(xì)胞6-10B、6-10B-GFP、6-10B-POSTN細(xì)胞,Western Blot驗(yàn)證干擾的效果,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)P53干擾前后6-10B系列細(xì)胞的凋亡率。結(jié)果:(1)6-10B-POSTN細(xì)胞組凋亡率較6-10B組和6-10B-GFP組明顯提高,6-10B-POSTN細(xì)胞內(nèi)P53、BAX蛋白表達(dá)上調(diào),P-AKT表達(dá)下調(diào)。(2)與正常的鼻咽黏膜組織相比,鼻咽癌組織中的P53蛋白表達(dá)水平明顯升高。(3)6-10B-POSTN細(xì)胞培養(yǎng)上清能促進(jìn)6-10B的凋亡,而來(lái)自3T3-POSTN培養(yǎng)上清并不能促進(jìn)6-10B的凋亡。(4)成功構(gòu)建能夠穩(wěn)定干擾6-10B細(xì)胞P53基因的shRNA載體,干擾6-10B細(xì)胞中的P53并不能降低6-10B細(xì)胞的凋亡率,而POSTN可以提高干擾了P53的6-10B細(xì)胞的凋亡率。結(jié)論:(1)間質(zhì)蛋白Periostin可以促進(jìn)鼻咽癌6-10B細(xì)胞的凋亡;(2)Periostin不是通過(guò)調(diào)控P53蛋白的表達(dá)來(lái)促進(jìn)鼻咽癌6-10B的凋亡的(其促凋亡機(jī)制可能與BAX、P-AKT的表達(dá)變化有關(guān))。
【關(guān)鍵詞】：鼻咽癌 基因轉(zhuǎn)染 Periostin P53 凋亡
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.63
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 第1章 引言12-16
• 第2章 材料與方法16-28
• 2.1 材料16-17
• 2.1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器16
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞系與菌株16-17
• 2.1.3 主要試劑17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法17-27
• 2.2.1 細(xì)胞系的復(fù)蘇、傳代和凍存17-19
• 2.2.1.1 細(xì)胞的復(fù)蘇17-18
• 2.2.1.2 細(xì)胞的換液18
• 2.2.1.3 細(xì)胞的傳代18
• 2.2.1.4 細(xì)胞的凍存18-19
• 2.2.2 免疫組化檢測(cè)正常鼻咽黏膜組織和鼻咽癌組織中P53的表達(dá)19
• 2.2.3 6-10B系列細(xì)胞瞬轉(zhuǎn)P53干擾慢病毒載體19-24
• 2.2.3.1 P53干擾慢病毒載體的設(shè)計(jì)19-20
• 2.2.3.2 sh RNA的構(gòu)建20-21
• 2.2.3.3 測(cè)序引物的設(shè)計(jì)21-22
• 2.2.3.4 P53干擾慢病毒載體的轉(zhuǎn)化22
• 2.2.3.5 P53干擾慢病毒載體的擴(kuò)增、提取22-24
• 2.2.3.6 P53干擾慢病毒載體的瞬轉(zhuǎn)24
• 2.2.4 流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定 6-10B系列細(xì)胞凋亡率24-25
• 2.2.5 6-10B-POSTN系列細(xì)胞培養(yǎng)上清的收集及其對(duì) 6-10B細(xì)胞的處理25
• 2.2.6 3T3-POSTN系列細(xì)胞培養(yǎng)上清的提取及其對(duì) 6-10B細(xì)胞的處理25
• 2.2.7 6-10B系列細(xì)胞的總蛋白的提取25-26
• 2.2.8 Western Blot26-27
• 2.3 技術(shù)路線27-28
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-36
• 3.1 檢測(cè)Periostin在轉(zhuǎn)染前后鼻咽癌細(xì)胞株中的表達(dá)28
• 3.2 檢測(cè)POSTN高表達(dá)后 6-10B細(xì)胞內(nèi)促凋亡相關(guān)蛋白P53、BAX，抑凋亡相關(guān)蛋白P-AKT的表達(dá)28-29
• 3.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) 6-10B細(xì)胞中POSTN表達(dá)上調(diào)后凋亡情況29-30
• 3.4 檢測(cè) P53 在人正常鼻咽黏膜和鼻咽癌組織中的表達(dá)30-31
• 3.5 6-10B系列細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì) 6-10B細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響31
• 3.6 檢測(cè)轉(zhuǎn)染shRNA前后，鼻咽癌 6-10B細(xì)胞P53的干擾效果及鼻咽癌 6-10B系列細(xì)胞的凋亡率31-35
• 3.7 3T3-POSTN細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì) 6-10B細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響35-36
• 第4章 討論36-40
• 第5章 結(jié)論40-42
• 第6章 參考文獻(xiàn)42-46
• 綜述 間質(zhì)蛋白 Periostin 及其與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展46-62
• 參考文獻(xiàn)55-62
• 附錄62-68
• 作者攻讀學(xué)位期間的科研成果68-70
• 致謝70

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6 馬

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