FSTL1在鼻咽癌患者樹突狀細胞中對淋巴細胞影響的研究
發(fā)布時間:2017-04-06 15:02
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【摘要】:目的 研究體外卵泡抑素樣蛋白1 (FSTL1)刺激鼻咽癌(NPC)患者樹突狀細胞(DC),誘導(dǎo)成熟后并與自體淋巴細胞混合培養(yǎng),檢測其細胞上清液中IL-12、IL-4和細胞總蛋白中磷酸化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子4(P-STAT4)及磷酸化的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活子6 (P-STAT6)的表達量,研究FSTL1對鼻咽癌患者樹突狀和淋巴細胞免疫效能的作用,并進一步探討其作用的可能機理。研究方法(1) 等密度離心法分離出33例鼻咽癌患者和18例健康志愿者外周血25ml的單個核細胞(PBMC)和血清,貼壁法分離單核細胞與淋巴細胞,血清-20℃凍存?zhèn)溆。淋巴細胞維持培養(yǎng)備用。(2)體外使用腫瘤壞死因子(終濃度1000U/ml)、白細胞介素-4(終濃度為500U/ml)和集落刺激因子(終濃度為1000U/ml)刺激培養(yǎng)單核細胞,第5天DC分成實驗組和對照組:實驗組加入FSTL1,即FSTLl+DC組;對照不加FSTL1,即DC組。第8天收集成熟DC。(3)成熟DC呈遞抗原肽LMP2給自體淋巴細胞,混合培養(yǎng),第12天收集細胞上清液,提取裂解后細胞的總蛋白,通過ELISA檢測血清FSTL1、IL-12和IL-4濃度和細胞上清液IL-12、IL-4濃度,Western Blotting檢測STAT4和STAT6磷酸化的表達。結(jié)果1成功培養(yǎng)出形態(tài)多樣,且突起大小和長短都不一樣的典型樹突狀突起的細胞。2酶聯(lián)免疫吸附實驗結(jié)果2.1 NPC和健康人血清:①鼻咽癌患者血清和健康人血清FSTL1、IL-12及IL-4濃度差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。②FSTLl與IL-12呈正相關(guān)關(guān)系,與IL-4呈正負相關(guān)關(guān)系,IL-4與IL-12成負相關(guān)關(guān)系,但P值均大于0.05,無統(tǒng)計學(xué)意義。2.2鼻咽癌患者和健康人細胞上清液:①鼻咽癌組:DC組和DC+FSTL1組分泌IL-12濃度比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);IL-4濃度比較,兩組數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.029), DC+FSTL1組濃度高于DC組。②健康人對照組:DC組和DC+FSTL1組分泌IL-12濃度比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);IL-4濃度比較,兩組數(shù)據(jù)差異顯著(P=0.003), DC+FSTL1組明顯高于DC組。③鼻咽癌患者和健康人的DC+FSTL1組相比較:IL-12濃度比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),IL-4濃度比較,差異顯著(P=0.001),健康人DC+FSTL1組遠高于鼻咽癌組。④鼻咽癌患者和健康人DC組相比較:IL-4和IL-12濃度差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。⑤NPC實驗組細胞上清液IL-12和IL-4濃度之間的Pearson相關(guān)系數(shù)為0.21,P0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義;正常實驗組細胞上清液IL-12和IL-4濃度之間的Pearson相關(guān)系數(shù)為0.45,P0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。3 Western Blotting結(jié)果①鼻咽癌患者組:DC組和DC+FSTL1組比較,P-STAT4半定量表達,差異非常顯著(P=0.000), DC+FSTL1組遠遠高于DC組;p-STAT6半定量表達,差異顯著(P=0.001), DC+FSTL1組遠高于DC組。②健康人對照組:單獨DC組和DC+FSTL1組比較,P-STAT4半定量表達,差異顯著(P=0.008); P-STAT6半定量表達,差異顯著(P=0.003), DC+FSTL1組明顯高于DC組。③鼻咽癌患者和健康人DC+FSTL1組相比較,P-STAT4半定量表達,差異顯著(P=0.001),鼻咽癌患者遠遠低于健康人;P-STAT6半定量表達,差異非常顯著(P=0.005),鼻咽癌患者明顯低于健康人。④鼻咽癌患者和健康人DC組相比較,P-STAT4半定量表達,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.145); P-STAT6半定量表達,差異顯著(P=0.005),健康人DC組明顯高于鼻咽癌DC組。結(jié)論 DC受FSTLl刺激后,其遞呈活性提高,使淋巴細胞分泌的IL-4增加,影響STAT4和STAT6的磷酸化水平,從而提高淋巴細胞的腫瘤免疫功能。
【關(guān)鍵詞】:鼻咽癌 FSTL1 IL-12 IL-4 P-STAT4 P-STAT6
【學(xué)位授予單位】:廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類號】:R739.63
【目錄】:
- 個人簡歷3-5
- 英文縮略詞表5-7
- 中文摘要7-10
- 英文摘要10-14
- 前言14-16
- 1 材料與方法16-31
- 2 結(jié)果31-38
- 3 討論38-41
- 研究總結(jié)41-43
- 參考文獻43-45
- 文獻綜述45-54
- 參考文獻50-54
- 致謝54-55
- 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文目錄55
【相似文獻】
中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條
1 黃詩平;FSTL1在鼻咽癌患者樹突狀細胞中對淋巴細胞影響的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2015年
2 吳森勇;FSTL1對鼻咽癌患者樹突狀細胞免疫功能影響的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年
本文關(guān)鍵詞:FSTL1在鼻咽癌患者樹突狀細胞中對淋巴細胞影響的研究,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
本文編號:289057
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