目的:探討高遷移率組box 1(HMGB1)在煙曲霉角膜炎中的炎癥放大作用及LOX-1與HMGB1在角膜免疫應(yīng)答中的關(guān)系。方法:1、BALB/c小鼠隨機分為單純PBS預處理組,單純Boxb預處理組,PBS預處理+煙曲霉菌性角膜炎組,Boxb預處理+煙曲霉菌性角膜炎組。PBS或Boxb結(jié)膜下注射對小鼠角膜進行預處理,采用直接刮上皮法建立煙曲霉菌感染BALB/c小鼠真菌性角膜炎1 d,3 d,5 d模型,觀察小鼠真菌性角膜炎炎癥進展并記錄臨床評分。采用RT-PCR法檢測小鼠角膜模型中LOX-1表達。2、BALB/c小鼠腹腔內(nèi)注射1 ml 9%酪蛋白,24 h后給予相同刺激,再次刺激3 h后提取腹腔中性粒細胞。分別用PBS,Boxb預處理RAW264.7巨噬細胞系或腹腔提取中性粒細胞2小時后加入滅活煙曲霉菌菌絲,采用RT-PCR技術(shù)檢測菌絲刺激12 h后細胞內(nèi)LOX-1,Detin-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10 mRNA變化,采用western blot技術(shù)檢測菌絲刺激24 h后LOX-1,IL-1β,TNFα蛋白水平變化。3、BALB/c小鼠腹腔注射3%硫代乙醇酸鈉1周,提取小鼠腹腔巨噬細胞,將細胞分為正常組,煙曲霉菌刺激組,Boxb預處理+煙曲霉菌刺激組,Boxb、Poly(I)(LOX-1抑制劑)預處理+煙曲霉菌刺激組,采用RT-PCR技術(shù)檢測菌絲刺激細胞12 h后檢測細胞內(nèi)LOX-1,TNFα,MIP-2和IL-10 mRNA變化,采用western blot技術(shù)檢測菌絲刺激24 h后LOX-1,IL-1β,TNFα蛋白水平變化。結(jié)果:1、在真菌感染模型中,與PBS對照組相比,Boxb預處理組炎癥表現(xiàn)更重,臨床評分更高,LOX-1在Boxb預處理組表達顯著高于PBS對照組。在單純用PBS和Boxb預處理模型中,LOX-1表達無明顯出差異。2、在煙曲霉菌菌絲刺激的RAW264.7巨噬細胞系與腹腔提取中性粒細胞中,Boxb預處理組LOX-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表達顯著升高,差距有統(tǒng)計學意義,Detin-1表達無明顯變化;無煙曲霉菌菌絲刺激的細胞中,Boxb預處理組LOX-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表達無明顯變化。3、在BALB/c小鼠腹腔巨噬細胞中,與單純加菌組相比,Boxb預處理組中LOX-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表達顯著升高,差距有統(tǒng)計學意義;與Boxb預處理組相比,Boxb+Poly(I)預處理組LOX-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表達顯著降低,差異有統(tǒng)計學意義。結(jié)論:BALB/c小鼠煙曲霉菌角膜炎中,Boxb預處理組角膜組織炎癥程度加重,臨床評分增加,提示HMGB1在真菌性角膜炎起促炎作用。HMGB1在真菌性角膜炎的先天免疫過程中刺激中性粒細胞和巨噬細胞LOX-1和炎癥因子IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表達增加,而Dectin-1表達無明顯變化,提示HMGB1在煙曲霉菌角膜炎中的促炎作用與LOX-1有關(guān)而與Dectin-1無關(guān)。小鼠腹腔巨噬細胞系中Boxb促進上述因子表達升高,而Boxb與LOX-1抑制劑Poly(I)同時作用后可以下調(diào)LOX-1及炎癥因子IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10的表達,進一步說明LOX-1參與HMGB1誘導的煙曲霉菌角膜炎炎癥放大效應(yīng)。
【學位單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R772.21
【部分圖文】：

圖 1 各組小鼠裂隙燈照片（A-F）及臨床評分（G）。感染后 1d（A）、3d（C）、5d（E）預處理組小鼠角膜臨床評分照片；感染后 1d（B）、3d（D）、5d（F）小鼠角膜 Boxb 預處理評分照片。（G）對各組角膜臨床評分。Boxb 預處理組可顯著增加角膜炎癥程度，提高炎癥

小鼠裂隙燈照片（A-F）及臨床評分（G）。感染后 1d（A）、3d（C）、5d（膜臨床評分照片；感染后 1d（B）、3d（D）、5d（F）小鼠角膜 Boxb 預處）對各組角膜臨床評分。Boxb 預處理組可顯著增加角膜炎癥程度，提高炎

圖 3.1 RAW264.7 巨噬細胞系中 Boxb+AF 組 LOX-1（A）、IL-1β（C）、TNF-α（D）、MIP-2（E）和 IL-10（mRNA 表達均顯著升高，而 Dectin-1（B）mRNA 表達無顯著變化。圖 3.2 RAW264.7 巨噬細胞系中 Boxb+AF 組 LOX-1（A）、IL-1β（B）、TNF-α（C）蛋白表達均顯著升高
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本文編號：2849130