糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)，作為一種復(fù)雜的代謝紊亂，已成為繼癌癥和心血管疾病之后的第三大死亡原因。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計，到2025年，全球糖尿病患病人數(shù)將達到3億[1]�！吨袊�2型糖尿病防治指南》2010年討論版調(diào)查顯示：我國目前糖尿病總體發(fā)病率已達9.7%，有超過9240萬的糖尿病患者；另外還有約15.5%的人處于糖尿病前期，人數(shù)達1億4千8百萬以上，高于歐美發(fā)達國家。糖尿病慢性并發(fā)癥現(xiàn)已成為造成糖尿患者致殘或過早死亡的主要原因，而糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabeticretinopathy, DR)作為最常見糖尿病慢性微血管并發(fā)癥之一，每年因其造成的失明人數(shù)超過10,000人[2]。視網(wǎng)膜組織中含有豐富的多不飽和脂肪酸，這使得相對于其他組織，其對血液中氧分子的攝取量最高，由此而產(chǎn)生的氧化應(yīng)激反應(yīng)也最強。因此，視網(wǎng)膜對氧化應(yīng)激較其他組織更為敏感。故有學(xué)者指出，高血糖、促氧化與抗氧化系統(tǒng)的平衡和氧化應(yīng)激之間的關(guān)系是DR發(fā)病機制中的關(guān)鍵所在。核因子-κB(NF-κB)作為一種多效性的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，在細胞生存、免疫、炎癥等方面發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用。此外，NF-κB不僅是氧化還原反應(yīng)的敏感因素，而且是抗氧化酶的重要調(diào)節(jié)器。根據(jù)細胞類型和疾病狀態(tài)的不同，NF-κB的激活可以是抗凋亡或致凋亡，糖尿病誘導(dǎo)激活的NF-κB在視網(wǎng)膜以及其毛細血管細胞被認為是致凋亡的[3]。細胞間黏附分子-1(ICAM-1)是一種能夠介導(dǎo)細胞間黏附的膜表面糖蛋白，它在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)和細胞凋亡等方面發(fā)揮重要作用。隨著對氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)在DR發(fā)病機制中的探索，尋找更為合理有效的抗炎抗氧化藥物，對提高患者的生活質(zhì)量、減輕經(jīng)濟負擔有重要意義，將成為DR藥物研究的新方向。 目的：本實驗通過體外培養(yǎng)，研究高糖對人視網(wǎng)膜色素上皮(HRPE)細胞形態(tài)、細胞活力影響以及氧化應(yīng)激水平和NF-κB、ICAM-1表達的變化，并應(yīng)用高糖和不同濃度的α-硫辛酸(α-LA)共同作用于HRPE細胞，再觀察上述指標的變化，探討α-LA對高糖環(huán)境下HRPE細胞形態(tài)、細胞活力以及氧化應(yīng)激水平和NF-κB、ICAM-1的表達的影響，以研究α-LA對高糖培養(yǎng)的HRPE細胞的保護作用并進一步探索該藥治療DR的可能機制。 方法：體外培養(yǎng)HRPE細胞株，取生長狀態(tài)良好的對數(shù)期細胞用于實驗。將細胞分為8組：⑴正常對照組（葡萄糖濃度：5.56mmol/L）；⑵高糖組（葡萄糖濃度：30.00mmol/L）；⑶高滲對照組（滲透壓：30.00mmol/L）；⑷高糖+α-硫辛酸（10μmol/L）組；⑸高糖+α-硫辛酸（50μmol/L）組；⑹高糖+α-硫辛酸（100μmol/L）組；⑺高糖+α-硫辛酸（200μmol/L）組；⑻高糖+α-硫辛酸（300μmol/L）組。各組細胞在不同的條件培養(yǎng)液中培養(yǎng)48h，留取樣本進行檢測。應(yīng)用MTT法測細胞活力，比色法測丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)變化并用Western Blot法測NF-κB的表達，ELISA法測ICAM-1含量的變化。 結(jié)果： 1相比正常對照組，高糖組HRPE細胞活性明顯受抑制（P＜0.05），MDA、ICAM-1含量明顯增加（P＜0.05），SOD、GSH含量明顯減低（P＜0.05），NF-κB呈高表達（P＜0.05）；高滲對照組與正常對照組無顯著差異（P＞0.05）。 2給與α-LA干預(yù)后，相比高糖組，各給藥組NF-κB表達均有所減低（P＜0.05）；除10μmol L濃度組外，其余四個濃度組細胞活性均有所恢復(fù)，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），MDA、ICAM-1含量減低（P＜0.05），SOD、GSH活性有所增加（P＜0.05）。 3不同α-LA干預(yù)組進行兩兩比較發(fā)現(xiàn)，除100μmol L、200μmol L濃度組外，其余任意兩組的MDA的含量有差別（P＜0.05）；300μmol L濃度組較50μmol L、100μmol L、200μmol L濃度組的SOD活性均有差異（P＜0.05）；各組GSH無明顯差異（P＞0.05）；10μmol L濃度組較100μmol L、200μmol L、300μmol L濃度組，300μmol L濃度組較50μmol L、100μmol L濃度組的NF-κB表達有差別（P＜0.05）；300μmol L濃度組較50μmol L、100μmol L、200μmol L濃度組，200μmol L濃度組較50μmol L、100μmol L濃度組的ICAM-1含量有差別（P＜0.05），總體上藥效呈劑量依賴性。 結(jié)論： 1高糖環(huán)境可導(dǎo)致HRPE細胞活性減低，MDA生成增加、SOD活性與GSH含量下降，NF-κB、ICAM-1表達量顯著增加，提示高糖可通過氧化應(yīng)激、NF-κB，ICAM-1對HRPE細胞造成損傷，氧化應(yīng)激、NF-κB與ICAM-1的變化可能與DR的發(fā)生有關(guān)。 2一定濃度的α-LA能降低高糖對HRPE細胞活性的影響，減少MDA生成，增加SOD活性與GSH含量，下調(diào)NF-κB、ICAM-1表達，從而改善HRPE細胞功能，減輕細胞損傷。提示α-LA可能通過這一途徑而保護了HRPE細胞，因此推測其對DR有防治作用。 3本實驗研究表明，除NF-κB外，α-LA濃度達到50μmol/L以上時，其對HRPE細胞才能發(fā)揮保護作用，并且隨藥物作用濃度升高其對細胞保護作用越強，提示α-LA的應(yīng)用須達到一定濃度才有效，且其對HRPE細胞的保護作用在一定范圍內(nèi)具有濃度依賴性。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2012
【中圖分類】：R587.2;R774.1
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
材料與方法
結(jié)果
附圖
附表
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述 氧化應(yīng)激與 NF-κB 在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的作用
    參考文獻
致謝
個人簡歷

【參考文獻】

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本文編號：2838691