目的:研究lnc-PCK1-2:1在人晶狀體上皮細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化過程中的表達并初步探討其分子功能。方法:本課題組前期通過應用10ng/ml的TGF-β2誘導人晶狀體上皮細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化,然后應用基因芯片技術篩選出差異表達的lncRNAs,并篩選出上調(diào)的前10位lncRNAs。本實驗選擇其中一種lncRNAs—lnc-PCK1-2:1進行驗證和功能研究。利用qRT-PCR驗證lnc-PCK1-2:1在人晶狀體上皮細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化過程中的表達。應用10ng/ml TGF-β2的DMEM培養(yǎng)基,再轉(zhuǎn)染siRNA-lnc-PCK1-2:1質(zhì)粒,此為siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2組。加入10ng/ml TGF-β2的DMEM培養(yǎng)基,再轉(zhuǎn)染siRNA-NC質(zhì)粒,此為siRNA-NC+TGF-β2組。只加入DMEM培養(yǎng)基,再轉(zhuǎn)染siRNA-lnc-PCK1-2:1質(zhì)粒,此為siRNA-lnc-PCK1-2:1組。只加入DMEM培養(yǎng)基,再轉(zhuǎn)染siRNA-NC質(zhì)粒,此為siRNA-NC組。應用細胞免疫熒光和Western blot方法觀察各組細胞中EMT相關分子平滑肌肌動蛋白(a-SMA)、鈣黏附蛋白E(E-Cadherin)在蛋白水平的表達;應用qRT-PCR檢測各組細胞中mRNA的表達變化。結果:證實lnc-PCK1-2:1在人晶狀體上皮細胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化過程中表達。在siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2組、siRNA-NC+TGF-β2組中細胞胞漿中a-SMA熒光強度逐漸增強,蛋白表達逐漸增加;E-Cadherin熒光強度逐漸減弱,蛋白表達逐漸減少;在siRNA-lnc-PCK1-2:1組、siRNA-NC組中細胞胞漿中a-SMA熒光強度逐漸增強,蛋白表達逐漸增加;E-Cadherin熒光強度逐漸減弱,蛋白表達逐漸減少;a-SMA的熒光強度、蛋白表達量siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2組大于siRNA-lnc-PCK1-2:1組,siRNA-NC+TGF-β2組大于siRNA-NC組,siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2組的E-Cadherin熒光強度、蛋白表達量小于siRNA-lnc-PCK1-2:1組,siRNA-NC+TGF-β2組小于siRNA-NC組;lnc-PCK1-2:1的表達量siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2組大于siRNA-NC+TGF-β2組,siRNA-lnc-PCK1-2:1組大于siRNA-NC組,siRNA-lnc-PCK1-2:1+TGF-β2組大于siRNA-lnc-PCK1-2:1組,siRNA-NC+TGF-β2組大于siRNA-NC組。結論:人晶狀體上皮細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化過程中l(wèi)nc-PCK1-2:1高表達并且沉默lnc-PCK1-2:1的表達可抑制晶狀體上皮細胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)分化。
【學位單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R776.1
【部分圖文】：

16圖 1 倒置顯微鏡下細胞的形態(tài)（×100）Figure 1 Morphology of cells under inverted microscope (x 100).2 qRT - PCR 檢測細胞中 lnc-PCK1-2:1 表達為了證實 HLE B - 3 經(jīng) TGF - β2誘導后存在 lnc-PCK1-2:1 表達變化，我 使 用 實 時 熒 光 定 量 PCR 法 來 檢 測 對 照 組 和 TGF - β2誘 導 組 中nc-PCK1-2:1 mRNA 含量。結果顯示：人晶狀體上皮細胞 HLE B - 3 經(jīng) TGF β2誘導后，細胞 lnc-PCK1-2:1 的 mRNA 相對表達量在對照組和誘導組分為 （1.41 ± 0.36），（6.41 ± 0.71），TGF - β2誘導組與對照組比，lnc-PCK1-2:1 的表達量顯著增高，差異具有統(tǒng)計學意義（**P ＜0．01）。

圖 2 實時熒光定量 PCR 檢測 lnc-PCK1-2:1 的表達Figure 2 qRT - PCR of lnc-PCK1-2:1與對照組比較，lnc-PCK1-2:1 的 mRNA 的表達量顯著增高，差異具有統(tǒng)）。PCR 檢測 SiRNA-lnc-PCK1-2:1 對細胞中 lnc-PCK1-2:1 m驗轉(zhuǎn)染后各組細胞 lnc-PCK1-2:1 的表達變化，我們采用R 法 來 檢 測 對 照 組 和 TGF - β2誘 導 組 分 別 轉(zhuǎn) 染 后1 的 變 化 。 結 果 顯 示 ： lnc-PCK1-2:1 在 siRNA-NCCK1-2:1 組的相對表達量分別為（1.02 ± 0.32）、（0.51 ±C+ TGF-β2 組、siRNA-lnc-PCK1-2:1+ TGF-β2 組中的相.52 ± 0.27）、（0.69 ± 0.33）。誘導組與對照組比較，lnc-PC

圖 3 實時熒光定量 PCR 檢測各組 lnc-PCK1-2:1 的表達Figure 3 qRT - PCR of lnc-PCK1-2:1量 PCR 檢測各組 lnc-PCK1-2:1 的表達。NC=siRNA-NC 組，Si=siA-NC+ TGF-β2，Si+=siRNA-lnc-PCK1-2:1+ TGF-β2 組，NC vs SSi+ vs Si P<0.05，NC+ vs Si+ P<0.001，各組比較均有統(tǒng)計學意胞免疫熒光法檢測SiRNA-lnc-PCK1-2:1對細胞EM響免疫熒光法檢測正常對照組和 TGF - β2誘導組轉(zhuǎn) - SMA 和 E - cadherin 的表達變化。結果可得，E膜上，而α - SMA 主要分布在細胞質(zhì)中，在 TGF in 在 siRNA-lnc-PCK1-2:1+ TGF-β2 組、siRNA-NC弱，同樣的在對照組中， E - cadherin 在 siRNA-

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本文編號：2835005