發(fā)布時間：2020-08-11 13:45

【摘要】：實驗?zāi)康模?1)構(gòu)建激光誘導(dǎo)BN大鼠脈絡(luò)膜新生血管動物模型(2)觀察TSP-1在大鼠脈絡(luò)新生血管中的表達(dá)(3)探討TSP-1活性片段VR-10對大鼠脈絡(luò)膜新生血管的作用。實驗方法：(1)BN大鼠脈絡(luò)膜新生血管模型的建立BN大鼠在裂隙燈顯微鏡及+90D前置鏡下,用半導(dǎo)體激光(波長532nm),圍繞視乳頭周圍進(jìn)行視網(wǎng)膜光凝,每眼擊射8點,第一批10只BN大鼠(20眼),第二批30只BN大鼠(60眼)。(2)玻璃體腔注藥第二批30只BN大鼠(60眼),進(jìn)行視網(wǎng)膜光凝后當(dāng)天行玻璃體腔注藥,左眼為對照組,注入2ul BSS,右眼為實驗組,注入2ul VR-10 (1mg/ml),第一批不注藥。(3)眼底血管熒光素造影(fundus fluorescein angiography,FFA)結(jié)果觀察第一批BN大鼠視網(wǎng)膜光凝后分別于第7、14、28天行FFA檢查,第二批BN大鼠視網(wǎng)膜光凝后第14天行FFA檢查,觀察FFA檢查結(jié)果。(4)HE染色光鏡病理改變第一批BN大鼠于光凝后第14、28天,FFA后6小時處死,摘除眼球,進(jìn)行石蠟切片HE染色,光鏡觀察形態(tài)變化；第二批于光凝后第14天行FFA檢查,隨機(jī)選取10只大鼠(20眼),FFA后6小時處死,摘除眼球,進(jìn)行冰凍切片HE染色,光鏡觀察形態(tài)變化。(5) Western blotting實驗第二批另20只大鼠(40眼)應(yīng)用Western blotting方法對TSP、VEGF蛋白進(jìn)行定量分析。實驗結(jié)果：1.造模成功率為75%。2.第一批FFA檢查：視網(wǎng)膜光凝后第7天出現(xiàn)CNV,第14天CNV達(dá)高峰,第28天CNV減退；第二批FFA結(jié)果：光凝后14天可見高熒光滲漏,實驗組滲漏較對照組輕。3.光鏡下觀察1)正常大鼠視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜各層組織結(jié)構(gòu)清晰、完整。2)第一批BN大鼠激光光凝部位視網(wǎng)膜色素上皮(pigment epithelium of retina,RPE)層、Bruch膜破裂,呈網(wǎng)格樣改變,外核層(outer nuclear layer,ONL)、內(nèi)核層(inner nuclear layer,INL)受損,部分消失,脈絡(luò)膜見毛細(xì)血管層損傷、色素脫失,可見新生血管膜自脈絡(luò)膜突破視網(wǎng)膜各層向玻璃體腔生長。玻璃體腔可見積血。3)第二批BN大鼠光凝后14天,對照組激光光凝部位,視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)紊亂,脈絡(luò)膜見新生血管的管腔,Bruch膜破裂,新生血管向視網(wǎng)膜層生長；實驗組激光光凝部位,視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)紊亂程度較對照眼輕,脈絡(luò)膜見新生血管較對照眼程度輕。4.WB檢測：第二批另20只BN大鼠(40眼)：以β-Actin作為內(nèi)參,眼組織中均有VEGF和TSP-1的表達(dá)。對照組VEGF表達(dá)情況為0.866±0.072,實驗組VEGF表達(dá)情況為0.719±0.060*,實驗組與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=41.686,P0.05)；對照組TSP-1表達(dá)情況為0.033±0.009,實驗組TSP-1表達(dá)情況為0.333±0.053*,實驗組與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=381.971,P0.05)。結(jié)論：成功構(gòu)建激光誘導(dǎo)BN大鼠脈絡(luò)膜新生血管動物模型：激光誘導(dǎo)后14天達(dá)高峰；TSP-1活性片段VR-10對大鼠脈絡(luò)膜新生血管通過減少VEGF增加TSP-1而起抑制作用。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R774.1
【圖文】：

討論逡逑本實驗采用半導(dǎo)體激光誘導(dǎo)脈絡(luò)膜新生血管模型，成功模擬脈絡(luò)膜新化血管逡逑的動態(tài)形成過程，造模成功率為７５％，可順利進(jìn)行下一步實驗，與半導(dǎo)體激光誘逡逑導(dǎo)大鼠脈絡(luò)膜新生血管模型是目前較成熟的脈絡(luò)膜模型結(jié)論相一致。ＦＦＡ結(jié)果逡逑示：激光誘導(dǎo)后１４天達(dá)高峰，與楊秀梅等研究結(jié)果一致。逡逑一、脈絡(luò)膜新生血管模型的的成功率與無效率逡逑本實驗采用半導(dǎo)體激光誘導(dǎo)脈絡(luò)膜新生血管模型，造模成功率為７５％，分逡逑析其造模無效率，其原因可能是：（１）聚焦問題。激光光凝視網(wǎng)膜的位置選擇逡逑圍繞視郭頭進(jìn)行光凝，而ＢＮ大鼠的視乳頭，一共有５－８對中央血管從中穿出，逡逑

討論逡逑本實驗采用半導(dǎo)體激光誘導(dǎo)脈絡(luò)膜新生血管模型，成功模擬脈絡(luò)膜新化血管逡逑的動態(tài)形成過程，造模成功率為７５％，可順利進(jìn)行下一步實驗，與半導(dǎo)體激光誘逡逑導(dǎo)大鼠脈絡(luò)膜新生血管模型是目前較成熟的脈絡(luò)膜模型結(jié)論相一致。ＦＦＡ結(jié)果逡逑示：激光誘導(dǎo)后１４天達(dá)高峰，與楊秀梅等研究結(jié)果一致。逡逑一、脈絡(luò)膜新生血管模型的的成功率與無效率逡逑本實驗采用半導(dǎo)體激光誘導(dǎo)脈絡(luò)膜新生血管模型，造模成功率為７５％，分逡逑析其造模無效率，其原因可能是：（１）聚焦問題。激光光凝視網(wǎng)膜的位置選擇逡逑圍繞視郭頭進(jìn)行光凝，而ＢＮ大鼠的視乳頭，一共有５－８對中央血管從中穿出，逡逑

光凝后１４天，對照組激光光凝部位，視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)奈亂，脈絡(luò)膜見新生血管的逡逑管腔，Ｂｒｕｃｈ膜破裂，新生血管膜突破視網(wǎng)膜各層向玻璃體腔生長，可見玻璃體逡逑積血。（圖２－３－圖２－８）逡逑圖２－３光凝后第１４天ＨＥＸ邋１０邐圖２－４光凝后第１４天ＨＥｘ４０逡逑３４逡逑

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本文編號：2789145