【摘要】：目的:探討甘露糖結(jié)合凝集素(mannose binding lectin,MBL)在煙曲霉菌感染的人角膜上皮細(xì)胞中的作用,及其與Dectin-1、TLR2的相互作用。方法:以體外培養(yǎng)的正常人永生化角膜上皮細(xì)胞為對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組為煙曲霉菌菌絲抗原、重組人MBL(recombination human MBL,rh MBL)、MBL抗體、昆布多糖及TLR2抗體刺激的人永生化角膜上皮細(xì)胞,在4,8,12h時(shí)間點(diǎn)用Western blot法檢測(cè)MBL蛋白表達(dá),在0.5,1,2,4h用real-time PCR法檢測(cè)MBL m RNA,在8h時(shí)間點(diǎn)real-time PCR法檢測(cè)Dectin-1、TLR2、IL-1β及TNF-αm RNA,在24h時(shí)間點(diǎn)用Western blot法檢測(cè)Dectin-1、TLR2蛋白表達(dá),在24h時(shí)間點(diǎn)用Elisa法檢測(cè)IL-1β、TNF-α蛋白表達(dá)變化。結(jié)果:煙曲霉菌菌絲抗原刺激后可引起MBL基因及蛋白水平表達(dá)量相對(duì)增高,基因水平表達(dá)呈時(shí)間依賴性,1h時(shí)達(dá)到峰值。rh MBL可促進(jìn)下游細(xì)胞因子IL-1β、TNF-α的基因及蛋白水平表達(dá),并呈劑量依賴性,10ug/ml rh MBL增強(qiáng)作用最強(qiáng),抑制MBL可減少I(mǎi)L-1β、TNF-α的基因及蛋白水平表達(dá)。rh MBL能增強(qiáng)煙曲霉菌菌絲刺激引起的Dectin-1、TLR2的產(chǎn)生,呈劑量依賴,10ug/ml為最佳刺激濃度,抑制MBL能明顯下調(diào)Dectin-1、TLR2表達(dá)。分別以昆布多糖及TLR2抗體抑制Dectin-1、TLR2,MBL表達(dá)均較單純真菌刺激組降低。其表達(dá)變化差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:MBL存在于正常角膜上皮細(xì)胞中,煙曲霉菌菌絲刺激引起其表達(dá)升高。MBL參與了人角膜上皮細(xì)胞對(duì)煙曲霉菌菌絲抗原的識(shí)別,介導(dǎo)下游炎癥因子釋放,在人角膜上皮細(xì)胞固有免疫早期階段發(fā)揮作用。MBL可增強(qiáng)真菌性角膜炎中模式識(shí)別受體Dectin-1、TLR2的表達(dá),間接促進(jìn)機(jī)體抗感染作用;MBL與Dectin-1、TLR2在人角膜上皮細(xì)胞抗真菌感染中發(fā)揮協(xié)同作用,介導(dǎo)角膜上皮炎癥反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R772.21

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本文編號(hào)：2768678