發(fā)布時(shí)間：2020-07-08 04:38

【摘要】：目的:研究豚鼠近視眼鞏膜重塑中HSP47(Heat Shock Protein-47)的表達(dá)情況,以期明確HSP47在近視發(fā)生發(fā)展中鞏膜塑形中的作用,最終為后續(xù)研究通過(guò)調(diào)節(jié)鞏膜組織中HSP47水平干預(yù)近視發(fā)生發(fā)展提供理論依據(jù)。方法:2周齡健康3色豚鼠(雌雄不限)48只,按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)將豚鼠分為:對(duì)照組(16只)和形覺(jué)剝奪性近視眼(FDM)組(32只)。采用藍(lán)色半透明乳膠遮蓋右眼的方法制備單眼FDM(Form deprivation myopia)模型,FDM組(近視組和恢復(fù)組),其中近視組分別遮蓋14天、28天;近視恢復(fù)組,分別遮蓋10天去除遮蓋4天和遮蓋24天去除遮蓋4天。分別于遮蓋前及上述時(shí)間點(diǎn)采用帶狀光檢影鏡測(cè)量各組豚鼠右眼屈光度,于上述時(shí)間點(diǎn)處死豚鼠用游標(biāo)卡尺測(cè)量眼軸長(zhǎng)度,蘇木素 伊紅(HE)染色觀察后極部鞏膜組織中目標(biāo)物表達(dá)規(guī)律;并分別采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative realtimePolymerase Chain Reaction,qPCR)和蛋白免疫印跡法(Western Boltting,WB)檢測(cè)各組豚鼠后極部鞏膜組織中HSP47,I型膠原、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(Matrix Metalloproteinase 2,MMP2)、抑制因子-1、2(Tissue Inhibitors of Metalloproteinase,TIMP-1、TIMP-2)的mRNA和蛋白相對(duì)表達(dá)量及分布情況。結(jié)果:(1)屈光度及眼軸:2周齡豚鼠造模前各組屈光狀態(tài)及眼軸均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(所有P0.05)右眼屈光度均為遠(yuǎn)視狀態(tài),在分別遮蓋2、4周,遮蓋10天去除遮蓋4天和遮蓋24天去除遮蓋4天后屈光值變?yōu)?1.88±0.52D,-2.46±0.58D,-1.92±0.41D,-2.83±0.72D,眼軸長(zhǎng)度為:7.21±0.07mm,7.7±0.21mm,7.32±0.16mm,7.8±0.22mm與對(duì)照組比較組間差異均有有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(所有P0.05)。(2)IHC檢測(cè):豚鼠后極部鞏膜中HSP47與I型膠原蛋白分子均呈陽(yáng)性表達(dá)。且與相同時(shí)間對(duì)照組比較,表達(dá)呈下降趨勢(shì)。(3)qPCR檢測(cè)HSP47,I型膠原、MMP2、TIMP-1、TIMP-2的mRNA表達(dá)結(jié)果:HSP47 mRNA:4周齡和6周齡對(duì)照組,近視組,恢復(fù)組分別是0.49±0.19,0.16±0.16,0.10±0.06;1.21±0.56,0.44±0.26,0.26±0.10。FDM組各亞組與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組比較HSP47mRNA表達(dá)下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(所有P0.05)。I型膠原mRNA表達(dá)量分別是0.65±0.33,0.31±0.11,0.22±0.13;1.39±0.63,0.43±0.05,0.27±0.14.FDM組各亞組I型膠原mRNA表達(dá)量均低于對(duì)照組(所有P0.05)。MMP-2 mRNA表達(dá)量分別為0.58±0.19,1.21±0.53,1.59±0.82,1.18±0.25,2.33±0.11,5.81±1.82。FDM各亞組與對(duì)照組比較MMP-2表達(dá)量增加,除四周齡近視組(P=0.77)以外,其余各組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。TIMP-1mRNA表達(dá)量分別為0.83±0.01,0.65±0.16,0.24±0.13.0.95±0.29,0.23±0.17,0.25±0.17.FDM組各亞組與對(duì)照組比TIMP-1mRNA表達(dá)下降,(所有P0.01)。TIMP-2mRNA表達(dá)量分別為0.68±0.49,0.11±0.03,0.20±0.11,1.61±0.82,0.70±0.30,0.14±0.41.FDM組與相應(yīng)時(shí)點(diǎn)對(duì)照組比較TIMP-2 mRNA表達(dá)下降,(所有P0.05)。(4)WB檢測(cè)HSP47,I型膠原、MMP2、TIMP-1、TIMP-2的蛋白表達(dá)結(jié)果:HSP4蛋白:4周齡和6周齡對(duì)照組,近視組,恢復(fù)組表達(dá)量分別為1.42±0.35,0.66±0.19,0.44±0.20;2.05±0.38,1.11±0.38,0.79±0.53。與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)空白組對(duì)照組比較FDM組HSP47蛋白表達(dá)下降,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(所有P0.05)。I型膠原蛋白表達(dá)量分別為1.18±0.28,0.61±0.23,0.35±0.13;1.68±0.40,0.82±0.35,0.50±0.19。與對(duì)照組比較FDM組豚鼠I型膠原蛋白表達(dá)均下降(所有P0.05)。MMP-2蛋白表達(dá)量分別為0.37±0.10,0.67±0.21,1.05±0.40,0.85±0.18,1.51±0.30,1.91±0.24,除四周齡近視組(P=0.82)以外,FDM各亞組與對(duì)照組比較表達(dá)量增加明顯(P0.05)。TIMP1蛋白表達(dá)量依次為1.45±0.20,1.05±0.25,0.69±0.16,1.87±0.31,0.42±0.08,0.76±0.25,FDM組各亞組與對(duì)照組相比表達(dá)量均降低(所有P0.05)。TIMP2蛋白表達(dá)量依次為1.14±0.45,0.52±0.20,0.52±0.04,1.96±0.49,1.36±0.49,0.96±0.23,FDM組各亞組與對(duì)照相比表達(dá)量均降低(所有P0.05)。(5)Pearson線性相關(guān)分析顯示HSP47和I型膠原在mRNA和蛋白水平均呈相高度正相關(guān)。(mRNA:r=0.807,P0.001,蛋白r=0.923,P0.001)結(jié)論:1.HSP47在豚鼠鞏膜中有表達(dá)。2.近視眼鞏膜中HSP47與I型膠原表達(dá)的下降,且兩者之變化趨勢(shì)高度相似,呈高度正相關(guān)。3.近視形成過(guò)程中膠原蛋白降解增加不僅與MMPs與TIMPs體系失衡有關(guān),還可能與HSP47減少導(dǎo)致新合成的膠原對(duì)蛋白酶敏感,更易被蛋白酶水解有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R778.11
【圖文】：

模型遮蓋 14 天組（4 周齡近視組）、形覺(jué)剝奪性近視模型遮蓋 10 天恢復(fù) 4 天組（4周齡恢復(fù)組）、形覺(jué)剝奪性近視模型遮蓋 28 天組（6 周齡近視組）、形覺(jué)剝奪性近視模型遮蓋 24 天恢復(fù) 4 天組（6 周齡恢復(fù)組），共 5 組，其中正常組 16 只，分別于 4周齡、6 周齡取材，分析正常豚鼠鞏膜中 HSP47 的表達(dá)的基礎(chǔ)水平。近視眼模型組每組 8 只，取右眼作為實(shí)驗(yàn)眼，并與正常對(duì)照組匹配年齡。分析 HSP47 等指標(biāo)在近視發(fā)生發(fā)展中和誘導(dǎo)性近視恢復(fù)中的表達(dá)。2.2 誘導(dǎo)形覺(jué)剝奪性近視（FDM）模型取右眼為實(shí)驗(yàn)眼，用 6 號(hào)半透明藍(lán)色乳膠氣球套住 FDM 組豚鼠頭部，剪去左眼、鼻子唇部、耳部等部位的氣球以暴露這些部位，不影響攝食和進(jìn)水，遮蓋眼能自由瞬目，不壓迫眼瞼（圖 1）FDM 近視組右眼遮蓋 2、4 周，近視恢復(fù)組遮蓋10 天、24 天后去遮蓋 4 天。正常照組不做任何處理。造模期間定時(shí)檢查，防止豚鼠頭套脫落。

不同組別 HSP47、collagen I、 MMP-2 、 TIMP-1、TIMP-2 的蛋白表達(dá)量，注：D1/2 表示：4 周齡對(duì)照組 J1/2 表示：4 周齡近視組，H1/2 表示：4 周齡近視恢復(fù)組，D 表示：6 周齡對(duì)照組，J 表示：6 周齡近視組，H 表示：6 周齡近視恢復(fù)組3.2.1 空白對(duì)照組與 FDM 組不同時(shí)間點(diǎn) HSP47、I 型膠原蛋白相對(duì)表達(dá)量比較。FDM 組豚鼠（近視組、恢復(fù)組）相對(duì)于空白對(duì)照組不同時(shí)間點(diǎn) HSP47、I 型膠原蛋白總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（HSP47 F分組=16.043，P=0.000; F時(shí)間=8.088 P=0.015 ，I 型膠原 F分組=20.830，P=0.000; F時(shí)間=4.765 P=0.049 .），與相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)空白組對(duì)照組比較 FDM 組豚鼠（近視組、恢復(fù)組）右眼 HSP47、I 型膠原蛋白表達(dá)減少明顯，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。（表 5,6）表 5 空白對(duì)照組與 FDM 組不同時(shí)間點(diǎn) HSP47 蛋白相對(duì)表達(dá)量比較（ x±s）組別 n不同時(shí)點(diǎn) HSP47 蛋白相對(duì)表達(dá)量4 周齡 6 周齡 P 值對(duì)照組 6 1.42±0.35 2.05±0.38近視組 6 0.66±0.19a1.11±0.38a

圖 5 各組豚鼠后極部鞏膜中 HSP47 的表達(dá)及分布(DABx100), A：4 周齡空白對(duì)照組豚鼠后極部鞏膜中 HSP47 陽(yáng)性表達(dá)，呈棕色（箭頭）B: FDM 組遮蓋 10 天恢復(fù) 4 天組可見(jiàn)豚鼠后極部鞏膜中 HSP47 陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)強(qiáng)度較空白對(duì)照組減弱(箭頭) C: FDM 組遮蓋 2 周組可見(jiàn)豚鼠后極部鞏膜中 HSP47 陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)強(qiáng)度較空白對(duì)照組減弱(箭頭). D：6 周齡空白對(duì)照組豚鼠后極部鞏膜中 HSP47 陽(yáng)性表達(dá)，呈棕色（箭頭）E: FDM 組遮蓋 24 天恢復(fù) 4天組可見(jiàn)豚鼠后極部鞏膜中 HSP47 陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)強(qiáng)度較空白對(duì)照組減弱(箭頭) F: FDM 組遮蓋 4 周組可見(jiàn)豚鼠后極部鞏膜中 HSP47 陽(yáng)性表達(dá)，表達(dá)強(qiáng)度較空白對(duì)照組減弱(箭頭)。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 傅培，李美玉;人眼鞏膜篩板結(jié)構(gòu)的研究[J];中華眼科雜志;1994年05期

2 李建軍，張希蘭，楊濟(jì)芳，孫芳娥，劉英奇;足月胎兒鞏膜篩板的形態(tài)測(cè)量學(xué)研究[J];眼科研究;1995年02期

3 王 華，劉桂香，袁桂芬，侯穎一，王濟(jì)中，田德明;人眼鞏膜篩板發(fā)育的研究[J];中華眼科雜志;1994年05期

4 張穎;姜萬(wàn)玲;張慧芝;孫惠斌;;復(fù)方樟柳堿聯(lián)合維生素B_(12)眼局部注射治療前部和后部缺血性視神經(jīng)病變[J];中國(guó)藥物與臨床;2016年03期

5 李建軍,張希蘭,楊濟(jì)芳,孫芳娥,劉英奇;人視神經(jīng)篩板的發(fā)育和結(jié)構(gòu)研究──光鏡觀察[J];眼科研究;1996年01期

6 李榮德;;視神經(jīng)乳頭水腫的發(fā)生機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)文摘(眼科學(xué));1965年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 容爍;離子導(dǎo)入核黃素—紫外線A快速鞏膜交聯(lián)術(shù)治療近視的實(shí)驗(yàn)研究[D];太原理工大學(xué);2017年

2 魏菁;貓眼放射狀視神經(jīng)切開(kāi)術(shù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 田青山;形覺(jué)剝奪性近視眼鞏膜組織中HSP47表達(dá)變化[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2746105