本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對兔自身免疫性干眼免疫調(diào)控作用的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的干眼是眼科常見、免疫炎癥反應(yīng)介導(dǎo)的眼表疾病,而自身免疫性干眼是較為嚴(yán)重和難治的干眼類型,目前的治療主要以改善癥狀和延緩疾病發(fā)展為主,尚無根治的方法,因此尋找安全有效的治療方法是臨床亟待解決的問題。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一類具有高度自我復(fù)制能力和多向分化潛能的干細(xì)胞。間充質(zhì)干細(xì)胞的低免疫原性和免疫抑制的潛力使它們在治療自身免疫性疾病方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢。結(jié)合近年來的研究進(jìn)展,本課題通過優(yōu)化靜脈注射自體激活的外周血淋巴細(xì)胞建立兔自身免疫性干眼模型,首次嘗試應(yīng)用人臍帶來源的間充質(zhì)干細(xì)胞(Human Umbilical cord mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)治療自身免疫干眼,以全身靜脈輸注間充質(zhì)干細(xì)胞的治療模式觀察對干眼模型的作用,通過體內(nèi)Treg細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的研究探索其可能的作用機(jī)制,探討間充質(zhì)干細(xì)胞對自身免疫性干眼的免疫調(diào)控作用。方法1.人臍帶來源間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定。2.建立兔淚腺上皮細(xì)胞和外周血淋巴細(xì)胞的混合培養(yǎng)體系,將激活的外周血淋巴細(xì)胞兔耳緣靜脈回輸兔體內(nèi)誘導(dǎo)自身免疫性干眼模型。3.新西蘭大白兔隨機(jī)分為正常組,干眼模型組和干細(xì)胞治療組三組,治療組于造模后1-5天連續(xù)輸注h UC-MSCs,對照組輸注等體積的PBS液。4.臨床指標(biāo)的觀察:三組先在術(shù)前進(jìn)行基線指標(biāo)的記錄,然后在術(shù)后2周、4周、6周分別進(jìn)行淚液分泌量、淚膜穩(wěn)定性和角膜熒光素鈉染色的檢測。5.觀察6周后處死新西蘭大白兔,HE染色后進(jìn)行淚腺和結(jié)膜的病理組織學(xué)觀察。6.觀察6周后處死新西蘭大白兔,取各組淚腺組織并從中分離淋巴細(xì)胞,進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測Treg細(xì)胞的比例。7.觀察6周后處死新西蘭大白兔,各組淚腺組織提取RNA,RT-PCR檢測細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)水平。結(jié)果1.成功分離、培養(yǎng)并鑒定h UC-MSCs。2.建立穩(wěn)定的兔自身免疫性干眼模型。3.治療組于造模后1-5天連續(xù)輸注h UC-MSCs,兩周后癥狀較干眼模型組顯著減輕。4.干細(xì)胞治療組淚液分泌量、淚膜破裂時間顯著升高(P0.05),角膜熒光素鈉染色著色顯著減輕。5.組織病理學(xué)觀察干細(xì)胞治療組淚腺組織和結(jié)膜組織淋巴細(xì)胞浸潤較干眼模型組顯著減少。6.流式細(xì)胞學(xué)檢測干細(xì)胞治療組淚腺組織中Treg細(xì)胞的比例較干眼模型組顯著升高(P0.05)。7.RT-PCR結(jié)果顯示:干細(xì)胞治療組淚腺組織中Treg細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-10,TGF-βm RNA表達(dá)增加,Th1和Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IFN-γ,IL-17和轉(zhuǎn)錄因子T-bet,RORrt m RNA表達(dá)降低,其他炎癥相關(guān)因子IL-1β,IL-6,TNF-a,TGF-βm RNA的表達(dá)減少,MMP-2,MMP-9 m RNA的表達(dá)水平較干眼模型組顯著下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論1.本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)步驟,通過建立穩(wěn)定的兔自身免疫性干眼模型發(fā)現(xiàn)淚腺組織中MMP-2和MMP-9參與淚腺組織中炎癥反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展。2.h UC-MSCs對自身免疫性干眼顯著減輕兔自身免疫性干眼臨床指標(biāo)和組織病理學(xué)改變。3.h UC-MSCs下調(diào)Th1、Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá),同時上調(diào)Treg細(xì)胞的功能,增加Treg細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá),調(diào)節(jié)細(xì)胞因子間的平衡關(guān)系,抑制炎癥反應(yīng)的進(jìn)展,從而減輕組織的損害和控制疾病的進(jìn)展。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 兔自身免疫性干眼 細(xì)胞因子 Treg細(xì)胞 IL-10
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R777.34
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略語/符號說明9-10
• 前言10-15
• 研究現(xiàn)狀、成果10-13
• 研究目的、方法13-14
• 技術(shù)路線14-15
• 對象和方法15-32
• 結(jié)果32-43
• 討論43-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-60
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明60-61
• 綜述 間充質(zhì)干細(xì)胞在干眼中的應(yīng)用61-72
• 綜述參考文獻(xiàn)67-72
• 致謝72-74
• 個人簡歷74

  本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對兔自身免疫性干眼免疫調(diào)控作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：273671