【摘要】：【背景】內質網(endoplasmic reticulum,ER)應激在慢性間歇性缺氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)誘導的內皮細胞凋亡中起著關鍵作用,但CIH如何引起內質網應激,其中的機制尚不清楚。血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)-PLC-三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP3)信號通路已被證實可引起ER應激。本研究的目的是為了探索AngⅡ-PLC-IP3信號通路是否參與CIH誘導的血管損傷,是否可以調控CIH誘導的ER應激,以及選擇性血管緊張素Ⅱ型受體(angiotensinⅡtype 1receptor,AT1R)阻滯劑氯沙坦(losartan)是否能夠抑制CIH誘導的主動脈內皮細胞凋亡�！痉椒ā繉�64只8周齡成年雄性SD大鼠隨機分配為八組(每組8只):常氧(room air,RA)組,RA+氯沙坦組,CIH組,CIH+氯沙坦組;RA+U73122(PLC的選擇性抑制劑)組,RA+氯沙坦+U73122組,CIH+U73122組,CIH+氯沙坦+U73122組。大鼠主動脈內皮細胞凋亡水平用原位末端標記法(terminal deoxynucleotidyl transferase mediated d UTP-biotin nick end labeling,TUNEL)的方法檢測,用免疫組化、實時定量PCR(quantitative real time PCR,RT-q PCR)、蛋白免疫印跡(western blotting,WB)檢測ER應激標記物的表達水平,用WB檢測PLC-γ1、三磷酸肌醇受體(inositol triphosphate receptor,IP3R)和AT1R的蛋白表達水平,大鼠血漿內AngⅡ的表達水平用酶聯免疫吸附試驗(enzyme-lined immunosorbent assay,ELISA)檢測�！窘Y果】CIH引起PLC-γ1和IP3R的表達水平增加,ER應激水平降低,主動脈內皮細胞凋亡增加。氯沙坦可保護主動脈內皮細胞凋亡,減少PLC-γ1、IP3R和內質網應激的表達水平,氯沙坦和U73122聯合使用與單獨使用氯沙坦效果相似。【結論】本研究表明,AngⅡ-PLC-IP3信號通路參與了CIH誘導的ER應激,氯沙坦通過抑制AngⅡ-PLC-IP3信號通路改善CIH引起的主動脈內皮細胞凋亡�！颈尘啊堪⑼蟹ニ”蛔C實可以改善慢性間歇性缺氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)引起的心肌肥厚。然而,對于阿托伐他汀調控CIH誘導的心肌肥大的機制,以及心肌肥大特異性相關的micro RNAs是否參與調控尚不清楚。Mi R-31在缺血/缺氧誘導的心肌肥大的過程中起著關鍵作用。本研究主要是為了探索mi R-31是否參與了阿托伐他汀對CIH誘導的心肌肥大的保護作用�！痉椒ā縃9c2細胞每天在有或沒有阿托伐他汀干預的情況下進行8小時CIH或常氧(room air,RA),持續(xù)5天。用免疫熒光技術檢測心肌細胞大小,用實時熒光定量PCR(quantitative real time PCR,RT-q PCR)檢測心肌細胞內mi R-31、ANP、BNP、MYH7的表達,蛋白免疫印跡(western blotting,WB)檢測心肌細胞內caspase 3表達情況。用mi R-31 mimics或特定的蛋白激酶Cε亞型(protein kinase C epsilon,PKCε)抑制劑Ro31-8220干預,探索mi R-31在阿托伐他汀對抗心肌細胞肥大中的作用。在心肌細胞中,上調或下調mi R-31的表達,用WB和RT-q PCR方法檢測PKCε的表達情況�！窘Y果】結果表明,CIH誘導心肌細胞明顯增大,并伴有心房利鈉肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、腦利鈉肽(brain natriuretic peptide,BNP)和心肌肌球蛋白重鏈(slow/beta cardiac myosin heavy-chain,MYH7)m RNA水平升高,所有這些改變都被阿托伐他汀阻止。與此同時,CIH能使mi R-31在心肌細胞內表達升高,阿托伐他汀預處理可減少mi R-31的表達,顯著增加PKCε的m RNA和蛋白表達水平。而過表達mi R-31則抑制了阿托伐他汀對心肌細胞的保護作用。上調和下調mi R-31分別減少和增加PKCε的m RNA和蛋白表達�！窘Y論】這些結果表明,阿托伐他汀可能通過上調PKCε和下調mi R-31保護CIH導致的心肌細胞肥大�！颈尘啊恐靖伟l(fā)展為非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis,NASH)與阻塞性睡眠呼吸暫停(obstructive sleep apnea syndrome,OSAS)有關。許多研究表明,自噬對各種疾病引起的肝損傷具有保護作用,褪黑素也具有強大的肝臟保護功能。然而,慢性間歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)導致肝損傷的機制以及褪黑素對肝損傷的調控作用尚不清楚。本研究旨在研究CIH導致肝損傷的機制,褪黑素對CIH引起肝損傷的調控作用,以及自噬這一信號通路是否參與其中�！痉椒ā繉⒏咧撅嬍�(high-fat diet,FD)的全身肥胖小鼠暴露于CIH或者常氧,每天8 h,持續(xù)6周。同時使用自噬興奮劑雷帕霉素,或自噬抑制劑3-methyladenine(3-MA);sirtuin 1(SIRT1)激活劑SRT1720,或SIRT1抑制劑sirtinol;用或不用褪黑素干預,然后檢測自噬相關基因的表達和小鼠血清轉氨酶的活性以及組織學評估肝臟的組織學形態(tài)。【結果】單獨的FD或者CIH均不引起明顯的肝損傷;然而,這兩種刺激聯合導致小鼠更高的血清轉氨酶活性和更嚴重的肝臟組織學病變,伴隨著自噬活性的降低。褪黑素通過增強自噬顯著抑制FD/CIH引起的肝損傷。然而,抑制SIRT1導致自噬相關基因表達減少,并降低褪黑素對FD/CIH誘導的肝損傷的保護作用�！窘Y論】這些結果提示褪黑素通過激活SIRT1介導的自噬信號通路改善FD/CIH誘導的肝細胞損傷。
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R766
【圖文】：

華 中 科 技 大 學 博 士 學 位 論 文.6 數據分析所有的數據都用平均數±標準差來表示。采用單因素方差分析(ANOVA)對數據統計分析。采用 Newman-Keuls 檢驗方法。P＜0.05 為差異有統計學意義。3.結果.1 氯沙坦能顯著降低 CIH 誘導的大鼠主動脈內皮細胞凋亡CIH 組大鼠與 RA 組相比，主動脈內皮細胞凋亡明顯增加(P＜0.05)（圖 1)。氯或 U73122 治療可有效降低 CIH 誘導的大鼠主動脈內皮細胞凋亡。聯合使用氯沙 U73122 的效果與單獨使用氯沙坦或 U73122 的效果相似。

華 中 科 技 大 學 博 士 學 位 論 文 為被認為具有統計顯著性。*P＜0.05 vs RA+saline；**P＜0.01 vs CIH+salin氯沙坦降低了 CIH 誘導的 RAS 活化如圖 2 所示，CIH 可使大鼠血漿中 AngⅡ濃度顯著高于 RA 組(P＜0.05)（ RT-qPCR 方法檢測主動脈弓內 AGT 的表達，CIH 組與 RA 組相比 AGTP＜0.05)（圖 2b)。與 RA 組相比，CIH 還能顯著提高主動脈動脈弓內 AT1水平(P＜0.05)（圖 2c、2d)。氯沙坦能減少 CIH 組 AngⅡ、AGT 和 AT1R；然而，U73122 卻不能改變 AngⅡ、AGT 和 AT1R 的表達，其中 AngⅡ濃度。

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本文編號：2736593