【摘要】：目的:通過(guò)摘除淚腺、哈氏腺及第三眼瞼建立淚液生成不足型兔干眼模型,評(píng)價(jià)重組人溶菌酶滴眼液對(duì)干眼模型眼表的影響,并探索其作用機(jī)制。方法:健康新西蘭兔36只,以左眼為手術(shù)眼建立干眼模型,右眼不做任何處理。分別在手術(shù)前、手術(shù)后7d及14d進(jìn)行Schirmer I試驗(yàn)、淚液蕨樣變?cè)囼?yàn)及角膜熒光染色。術(shù)后14d隨機(jī)分為模型組,基礎(chǔ)液組,低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組,玻璃酸鈉組,將模型對(duì)照組的右眼設(shè)為正常對(duì)照組,共7個(gè)組,42只兔眼。模型對(duì)照組不做任何治療;基礎(chǔ)液組予以基礎(chǔ)液(含0.75%NaCl的5 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH6.5)),低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組分別依次給予含0.75mg/ml、1.50mg/ml及3.00mg/ml重組人溶菌酶滴眼液(溶菌酶+基礎(chǔ)液),玻璃酸鈉組予以玻璃酸鈉滴眼液(商品名“海露”),各給藥組均每日點(diǎn)眼3次、每次2滴,持續(xù)點(diǎn)眼28d。分別在給藥前、給藥后7d、14d、21d及28d進(jìn)行Schirmer I試驗(yàn)、淚液蕨樣變?cè)囼?yàn)及角膜熒光染色。給藥28d后光鏡觀察角膜、結(jié)膜病理學(xué)改變,免疫組化法檢測(cè)TGF-β1及TNF-α表達(dá),SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳法檢測(cè)滴加及未滴加溶菌酶的兔眼房水中溶菌酶含量。結(jié)果:1.術(shù)后第14d,模型組動(dòng)物角膜結(jié)膜干燥,Schirmer I試驗(yàn)值均5mm/5min(右眼自身對(duì)照均10mm);淚液蕨樣變?cè)囼?yàn)結(jié)晶數(shù)量少,間隔大,且形狀不規(guī)則;熒光素鈉染色見(jiàn)角膜點(diǎn)、片狀染色。統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明,與正常組相比,模型組動(dòng)物淚液分泌量顯著降低(P0.01)但淚液結(jié)晶評(píng)級(jí)及角膜熒光素染色評(píng)分顯著升高(P0.01),表現(xiàn)了淚液“量”和“質(zhì)”的顯著變化,與既往文獻(xiàn)報(bào)道的干眼癥動(dòng)物模型特征基本類(lèi)似,表明模型復(fù)制成功。2.給藥7d,高濃度溶菌酶滴眼液組Schirmer I值最先較模型組顯著升高(P0.05);給藥14d,中、高濃度溶菌酶滴眼液治療組,玻璃酸鈉組Schirmer I值均較模型對(duì)照組、基礎(chǔ)液組顯著升高(P0.05/0.01);給藥28d,低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組,玻璃酸鈉組淚液分泌量均比模型對(duì)照組顯著升高(P0.05/0.01)。隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng),各用藥組淚液結(jié)晶形態(tài)也逐漸呈間隔較小的羊齒狀結(jié)晶,至給藥28d,低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組、玻璃酸鈉組4個(gè)組結(jié)晶評(píng)級(jí)較模型組均明顯降低(P0.05),以Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)為主;模型對(duì)照組、基礎(chǔ)液組雖較0d有所改善,但仍以Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)為主。用藥7d,高濃度溶菌酶滴眼液組最先較模型對(duì)照組熒光素染色評(píng)分降低(P0.05);給藥14d,低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組、玻璃酸鈉組熒光素染色評(píng)分均比模型對(duì)照組顯著降低(P0.05/0.01);給藥28d,低、中及高濃度組溶菌酶滴眼液組,玻璃酸鈉組熒光素染色評(píng)分均比模型對(duì)照組和基礎(chǔ)液組顯著降低(P0.05/0.01)。但以上指標(biāo)在低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組、玻璃酸鈉組這4個(gè)組間兩兩比較無(wú)明顯差異。3.與正常組相比,模型組TNF-α及TGF-β1表達(dá)均顯著升高(P0.01)。與模型組相比,低、中及高濃度溶菌酶滴眼液組,以及玻璃酸鈉4組動(dòng)物TNF-α的表達(dá)顯著降低(P0.05)而TGF-β1表達(dá)顯著升高(P0.05),且較玻璃酸鈉組相比,中及高濃度溶菌酶滴眼液組TGF-β1表達(dá)顯著升高(P0.05),高濃度溶菌酶滴眼液組TNF-α表達(dá)顯著降低(P0.05)。4、與正常組相比,模型組房水溶菌酶含量均明顯降低(P0.01);雖然溶菌酶滴眼液治療組結(jié)果為陽(yáng)性的數(shù)量多于模型組,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.摘除淚腺、哈氏腺及第三眼瞼可以成功建立穩(wěn)定持續(xù)的兔淚液生成不足型干眼模型。2.分泌不足型干眼動(dòng)物房水中溶菌酶濃度顯著降低,補(bǔ)充重組人溶菌酶滴眼液可有效緩解干眼癥狀,促進(jìn)眼表?yè)p傷修復(fù),且在關(guān)鍵評(píng)價(jià)指標(biāo)(淚液分泌量、淚液結(jié)晶形態(tài))的恢復(fù)速度上明顯優(yōu)于臨床已應(yīng)用的治療藥物玻璃酸鈉滴眼液。3.重組人溶菌酶滴眼液在緩解和改善干眼癥狀的同時(shí),可發(fā)揮抑制炎性反應(yīng)的重要作用,提示其作用機(jī)制可能與其對(duì)炎性反應(yīng)的抑制作用相關(guān)。4.在人工淚液中添加人工合成的溶菌酶,可顯著提升對(duì)干眼的治療效果,本研究為新作用特點(diǎn)的干眼治療藥物研發(fā)提供了新的思路。
【學(xué)位授予單位】：軍事科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R777.34
【圖文】：

圖 1.1 兔淚液生成不足型干眼模型建立過(guò)程A：全身麻醉后剪除睫毛；B：摘除淚腺；C：摘除第三眼瞼；D：摘除哈氏腺；E：暴露球結(jié)膜后用 30%三氯乙酸灼燒球結(jié)膜；F：從左至右依次為摘除的第三眼瞼、哈氏腺、淚腺。1.4 干眼模型的評(píng)價(jià)指標(biāo)及方法分別在手術(shù)前、手術(shù)后 7d 及 14d 進(jìn)行 Schirmer I 試驗(yàn)、淚液蕨樣變?cè)囼?yàn)及角膜熒光染色。所有檢查均由同一人在相同的時(shí)間段、地點(diǎn)、溫度、亮度、濕度環(huán)境下進(jìn)行。1.4.1 Schirmer I 試驗(yàn)在中等濕度和亮度的室內(nèi)環(huán)境下進(jìn)行。如圖 1.2 所示，取一條 5×35mm 濾紙，在首端 5mm 處反折，置于下結(jié)膜囊中外 1/3 交界處，5 min 后取出紙條（兔通過(guò)眨眼運(yùn)動(dòng)有可能擠出濾紙條，注意測(cè)量時(shí)間內(nèi)不要讓濾紙條離開(kāi)眼眶），根據(jù)刻度讀取濾紙濕潤(rùn)部分試紙長(zhǎng)度并記錄。取連續(xù)測(cè)量 3 次的平均值為 chirmer I 試驗(yàn)結(jié)果。正常情況下濾紙濕潤(rùn)長(zhǎng)度大于 10mm/5min。

SchirmerI試驗(yàn)

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1 池學(xué);林圣娟;唐s

本文編號(hào)：2717604