【摘要】：鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是一種高發(fā)于中國(guó)南部五省及香港、北非和東南亞地區(qū)的鼻咽頂部和側(cè)壁的惡性腫瘤,發(fā)病率高達(dá)0.2%。鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展與EB病毒感染、地域聚集性以及家族易感性有密切關(guān)系。盡管近些年來(lái),鼻咽癌的治療水平得到了進(jìn)一步提高,但鼻咽癌的整體預(yù)后仍然較差,遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率高達(dá)14.1%。因此,探索鼻咽癌轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的分子機(jī)制,尋找高效的治療途徑,是提高鼻咽癌患者生存率的關(guān)鍵。AT豐富結(jié)合域1A基因(ARID1A,AT-rich interactive-domain 1A)屬于染色質(zhì)重塑復(fù)合物SWI/SNF(mating-type switching,SWI/sucrose non fermenting,SNF)家族較早被發(fā)現(xiàn)的具有重要意義的成員之一。ARID1A通常被認(rèn)為是一個(gè)潛在的抑癌基因,被證明在子宮內(nèi)膜相關(guān)癌、胰腺癌、乳腺癌和胃癌等腫瘤中頻發(fā)突變。ARID1A的無(wú)意義突變或缺失與PI3K/Akt信號(hào)通路具有密切的相關(guān)性,ARID1A無(wú)意義突變或缺失常常伴隨著PI3K/Akt信號(hào)通路的激活。到目前為止,ARID1A對(duì)鼻咽癌的影響尚未有人報(bào)道。目的:本研究主要明確ARID1A在鼻咽癌以及正常鼻咽粘膜中的表達(dá)差異,分析ARID1A對(duì)鼻咽癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響以及相關(guān)作用機(jī)制。方法:1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)ARID1A在鼻咽癌組織、正常鼻咽粘膜組織中的表達(dá)情況,應(yīng)用熒光定量PCR以及Western Blot方法檢測(cè)ARID1A在不同鼻咽癌細(xì)胞系及正常鼻咽粘膜細(xì)胞中表達(dá)情況;2.應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)ARID1A與鼻咽癌臨床病理特征的相關(guān)性;3.CCK-8檢測(cè)ARID1A下調(diào)對(duì)鼻咽癌CNE1、HNE1細(xì)胞增殖的影響;4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ARID1A下調(diào)對(duì)鼻咽癌CNE1、HNE1細(xì)胞周期的影響;5.Tanswell侵襲、遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ARID1A下調(diào)對(duì)鼻咽癌CNE1、HNE1細(xì)胞侵襲、遷移能力的影響;6.WB檢測(cè)ARID1A下調(diào)對(duì)鼻咽癌CNE1、HNE1細(xì)胞相關(guān)Akt分子通路相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1.免疫組化結(jié)果顯示鼻咽癌組織ARID1A相對(duì)表達(dá)量顯著低于正常鼻咽粘膜組織,差異顯著(P0.001);熒光定量PCR及Western Blot結(jié)果顯示在鼻咽癌細(xì)胞系中ARID1A的表達(dá)顯著低于正常鼻咽粘膜細(xì)胞(P0.05);2.免疫組化鼻咽癌組織中ARID1A的表達(dá)水平隨著臨床分期、TNM分期的上升而降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);ARID1A與鼻咽癌患者年齡、性別無(wú)相關(guān)性;3.CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ARID1A下調(diào)促進(jìn)鼻咽癌CNE1、HNE1細(xì)胞增殖;4.流式周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ARID1A下調(diào)增加鼻咽癌CNE1、HNE1細(xì)胞S期的比例;5.Tanswell侵襲、遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ARID1A下調(diào)促進(jìn)CNE1、HNE1細(xì)胞的侵襲、遷移;6.WB結(jié)果顯示鼻咽癌CNE1、HNE1細(xì)胞下調(diào)ARID1A后,磷酸化Akt水平明顯增高,從而激活了Akt信號(hào)通路。結(jié)論:1.鼻咽癌組織中ARID1A的表達(dá)顯著低于正常鼻咽粘膜組織;2.鼻咽粘膜細(xì)胞中ARID1A的表達(dá)顯著低于正常鼻咽粘膜細(xì)胞;3.ARID1A的表達(dá)與鼻咽癌患者年齡、性別無(wú)相關(guān)性,與鼻咽癌患者的臨床分期、TNM分期以及組織學(xué)分型顯著相關(guān);4.ARID1A下調(diào)促進(jìn)鼻咽癌CNE1、HNE1細(xì)胞增殖;5.ARID1A下調(diào)促進(jìn)CNE1、HNE1細(xì)胞的侵襲、遷移;6.鼻咽癌組織及鼻咽癌細(xì)胞中下調(diào)ARID1A后,磷酸化Akt水平明顯增高,與Akt信號(hào)通路激活相關(guān)。
【圖文】：

.1 ARID1A 在鼻咽癌組織及鼻咽癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)用免疫組化分析正常鼻咽組織和鼻咽癌組織中 ARID1A 的表達(dá)情況 HE 切片及免疫組化結(jié)果判讀的準(zhǔn)確性，所有組織標(biāo)本均由兩名病在不知情患者的臨床病理結(jié)果的情況下，對(duì)組織標(biāo)本進(jìn)行獨(dú)立評(píng)欠佳或脫片者進(jìn)行復(fù)染，不合格的組織標(biāo)本予以剔除。對(duì)評(píng)估有本，兩名病理學(xué)專家對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重新評(píng)估，最終達(dá)成一致意見。為 0：陰性；1：弱陽(yáng)性；2：陽(yáng)性；和 3：強(qiáng)陽(yáng)性。染色面積：0:不:1%--10%；2:10%-50%；3:50%--100%；其中最后得分=染色強(qiáng)度 X ，0--3 分定義為低表達(dá)，，4--9 分定義為高表達(dá)。通過(guò)免疫組化分發(fā)現(xiàn)在 177 例鼻咽癌組織中，ARID1A 的表達(dá)明顯下調(diào)，P <0.001,統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（圖 1，表一）

變量 nARID1A 表達(dá)(n, %)χ2 高 低非癌鼻咽上皮組織 61 45 (73.8) 16 (26.2)14.2880.0鼻咽癌組織17779(44.6) 98 (55.4)采用 Western blotting 和 qRT-PCR（圖 2，圖 3）分析 ARID1A 在細(xì)胞和鼻咽上皮細(xì)胞中的表達(dá)，通過(guò)結(jié)果分析，我們發(fā)現(xiàn) ARID1A 在細(xì) 胞 中 的 表 達(dá) 明 顯 下 調(diào) ， P <0.05 ， 具 有 統(tǒng) 計(jì) 學(xué) 意表 1：ARID1A 在 66 例非癌性上皮組織和 177 例鼻咽癌組織中的表達(dá)Table 1:Expression of ARID1A in 61 non-cancerous epithelial tissues and 177 NPC tissues
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：2704842