【摘要】：背景與目的無脈絡(luò)膜癥(choroideremia,CHM)是一種進行性脈絡(luò)膜視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良性疾病,發(fā)病率約為1/50000~1/100000,遺傳方式為X染色體連鎖隱性遺傳。男性患者在青少年時期開始出現(xiàn)夜盲,隨年齡增長周邊視野逐漸喪失,視網(wǎng)膜色素上皮、光感受器及脈絡(luò)膜進行性萎縮,晚期可失明。女性攜帶者一般不表現(xiàn)嚴重的視力損害,可僅有斑片狀色素沉著或視網(wǎng)膜色素上皮變性。無脈絡(luò)膜癥的發(fā)病是由于CHM基因突變引起的REP1蛋白功能喪失,目前無有效的藥物治療,隨著技術(shù)的發(fā)展,國外已開展1/2期基因治療臨床實驗,初步治療數(shù)據(jù)樂觀,仍面臨著挑戰(zhàn)。因疾病早期與視網(wǎng)膜色素變性等難以鑒別,常通過基因測序技術(shù)來輔助臨床診斷。本研究旨在利用全外顯子測序技術(shù)對一臨床擬診無脈絡(luò)膜癥家系進行輔助診斷及基因突變位點篩查,并分析突變位點與疾病表型的關(guān)系。資料與方法1.本家系先證者于外院診斷視網(wǎng)膜色素變性,基因檢測未檢測到相關(guān)致病突變位點,臨床檢查符合無脈絡(luò)膜癥,為明確診斷,對3代共9名家系成員進行詳細的全身及眼科檢查,并行進一步基因篩查。隨機收集100名無眼部及全身系統(tǒng)性基礎(chǔ)疾病的志愿者作為正常對照。2.抽取家系成員的外周靜脈血提取DNA,對先證者進行全外顯子基因測序,比對數(shù)據(jù)庫基因篩選出候選基因,對候選基因進行高通量測序,采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴增突變基因的蛋白質(zhì)編碼區(qū)域,對精制后的PCR產(chǎn)物進行基因組測序和突變分析。發(fā)現(xiàn)可疑突變后對家系其他成員及100名正常對照者進行Sanger測序驗證,并采用CADD等分析突變位點致病性。結(jié)果1.本家系先證者(III2)為男性,主訴夜盲,雙眼中心視力正常,視野縮窄呈管形,眼底可見散在骨細胞樣色素沉著及后極部視網(wǎng)膜色素上皮和脈絡(luò)膜萎縮。先證者母親(II2)自訴無自覺癥狀,但查體結(jié)果示左眼視力下降,雙眼眼底可見黃白色椒鹽狀眼底改變、視網(wǎng)膜色素上皮及脈絡(luò)膜的萎縮。余家系成員未發(fā)現(xiàn)類似臨床表現(xiàn)及眼部疾病。2.通過全外顯子測序發(fā)現(xiàn)先證者X染色體CHM基因存在一個半合子突變位點,其12號外顯子第1441號核苷酸由鳥嘌呤變異為胸腺嘧啶(c.1441GT),引起編碼的氨基酸改變p.E481X,為無義突變,導(dǎo)致肽鏈合成提前終止,CADD等預(yù)測為有害突變,與CHM高度相關(guān)。Sanger測序驗證顯示先證者母親(II2)存在此突變,余家系成員及100名正常對照者中均不存在此突變。遺傳方式為X染色體隱性遺傳。基因庫數(shù)據(jù)顯示該突變?yōu)閲鴥?nèi)外文獻均未報道過的新發(fā)突變位點。結(jié)論1.本研究通過全外顯子測序?qū)σ慌R床擬診的無脈絡(luò)膜癥家系進行輔助診斷,篩查出X染色體CHM基因12號外顯子上一個新發(fā)突變位點(c.1441GT,p.E481X),該突變?yōu)闊o義突變,導(dǎo)致其編碼的蛋白質(zhì)功能喪失。2.Sanger測序驗證余家系成員及正常對照均無此突變,CADD、MutationTaster等軟件預(yù)測該突變?yōu)橹虏⊥蛔?該家系遺傳方式為X染色體隱性遺傳。
【圖文】：

該無脈絡(luò)膜癥家系圖譜

11圖 1.2III2 眼底照相顯示視網(wǎng)膜散在骨細胞樣色素沉著斑塊，后極部脈絡(luò)膜萎縮，透見鞏膜圖 1.3 II2 眼底見黃白色椒鹽狀改變，右眼顳側(cè)可見黃白色斑片狀改變ODII2OSII2
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R773.4

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本文編號：2659729