【摘要】：目的:研究四甲基吡嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)滴眼液在內(nèi)毒素誘導(dǎo)性葡萄膜炎(Endotoxin-induced uveitis,EIU)動物模型中的作用及其對視網(wǎng)膜基因表達(dá)的影響,研討四甲基吡嗪滴眼液治療內(nèi)毒素誘導(dǎo)性葡萄膜炎的可能分子機(jī)制。方法:在小鼠玻璃體腔內(nèi)注射125 ng脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)誘導(dǎo)EIU動物模型。將小鼠隨機(jī)分為:LPS組和TMP+LPS組。TMP+LPS組使用0.1%TMP滴眼治療(6次/24 h,每次10μl);LPS組未予以治療。于LPS注射24小時后,觀察小鼠眼前房炎癥并進(jìn)行EIU臨床評分,評估小鼠眼內(nèi)炎癥嚴(yán)重程度。Illumina Hiseq 2500平臺用于TMP治療組和LPS組EIU小鼠視網(wǎng)膜轉(zhuǎn)錄組測序。STRING軟件用于蛋白質(zhì)相互作用分析(Protein-to-protein interaction,PPI)。Real-time PCR用于驗證差異表達(dá)基因在mRNA水平的表達(dá)。結(jié)果:注射LPS 24小時后,LPS組小鼠的炎癥反應(yīng)程度和臨床評分明顯高于TMP治療組。RNA測序結(jié)果顯示,與TMP治療組相比,LPS組中共有407個差異表達(dá)基因(Differentially expressed genes,DEGs),其中包括356個上調(diào)基因和51個下調(diào)基因。與TMP治療組相比,LPS組中顯著富集的上調(diào)的GO有12條,顯著富集的上調(diào)的KEGG通路有27條。蛋白質(zhì)相互作用分析結(jié)果表明,蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖中包含386個節(jié)點和2393條邊,共構(gòu)成的42條子網(wǎng)絡(luò)中3條有統(tǒng)計學(xué)意義。Real-time PCR結(jié)果顯示一些炎癥相關(guān)基因(Ccl12,Ccl2,Gzmb)、補(bǔ)體系統(tǒng)相關(guān)基因(C1ra)和干擾素相關(guān)基因(Siglec1,Zbp1and Ifit1)在TMP治療組中表達(dá)水平顯著低于LPS組,與轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果一致。結(jié)論:TMP在內(nèi)毒素誘導(dǎo)性小鼠葡萄膜炎中起保護(hù)作用,此保護(hù)作用可能與一些炎癥相關(guān)基因、補(bǔ)體系統(tǒng)相關(guān)基因和干擾素相關(guān)基因有關(guān),提示抑制這些基因的表達(dá)可能為葡萄膜炎的治療提供新的策略。
【圖文】：

圖 1. LPS 注射 24 小時后，TMP 明顯降低了 EIU 小鼠的前房炎癥和臨床評分Figure 1. TMP reduced the anterior chamber inflammation and lowered clinical scores 24hafter injecting LPSLPS 注射 24 小時后眼部癥狀的典型圖像（A）。采用裂隙燈顯微鏡觀察不同實驗組在 LPS注射 24 小時后的 EIU 臨床評分（B）。兩名評估者在注射 LPS 24 小時后根據(jù) EIU 臨床評分標(biāo)準(zhǔn)評估臨床癥狀的嚴(yán)重程度（n=12）。Representative images of ocular symptoms 24h after LPS challenge (A). The clinical scores ofEIU were determined 24h after LPS challenge with a slit lamp microscope in different groups (B).The severity of clinical signs was evaluated by two individuals following the criteria of EIU clinicalscore 24h after injecting LPS (n=12).2.2 差異表達(dá)基因（DEGs）分析為了揭示經(jīng)TMP處理和未經(jīng)TMP處理的EIU小鼠視網(wǎng)膜轉(zhuǎn)錄組表達(dá)的變化，我們對 DEGs 進(jìn)行了計算分析。校正后 p < 0.05，且 log 2-fold change ≥ 1 的基因被

圖 2. 上調(diào)及下調(diào) DEGs 的火山圖Figure 2. Volcano plot of the up- and -down regulated DEGs火山圖中為 TMP 處理組和未處理組的所有差異表達(dá)基因。橫坐標(biāo)為 log 2-fold change(FC)，縱坐標(biāo)為負(fù)對數(shù)轉(zhuǎn)換后的 p 值。紅點表示上調(diào)基因，綠點表示下調(diào)基因。校正后的 p < 0.05的基因為 DEGs。Number of the differential genes between TMP-treated and non-treated group were showed inthe volcano plots. The horizontal axis is log 2-fold change (FC), and the vertical axis represents thep-value after the negative logarithm conversion. The red dots indicate the up-regulated genes,whereas the green dots represent the down-regulated genes. The corrected p<0.05 was an absolutethreshold used to select DEGs.2.3 TMP 治療組與非治療組中 DEGs 的 GO 富集分析與 TMP+LPS 組相比，，LPS 組中 DEGs 的 GO Terms 涉及三大類：生物學(xué)過程、細(xì)胞組分和分子功能。圖 3 顯示了 LPS 組前 30 個富集的上調(diào)和下調(diào)的 GO Terms。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R773

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本文編號：2627088