【摘要】：第一部分組蛋白H3K4me3在中耳膽脂瘤中的表達目的:量化組蛋白H3賴氨酸4的三甲基化(H3K4me3)在中耳膽脂瘤母組織及外耳道上皮組織中的表達,以研究其在中耳膽脂瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的重要意義。方法:收集2017年9月到2018年6月我院耳鼻咽喉頭頸外科收治的中耳膽脂瘤患者30例,以中耳膽脂瘤患者的膽脂瘤母組織為實驗組,及同一患者的外耳道上皮組織為對照組,根據(jù)免疫印跡實驗(Western blot)結(jié)果分析H3K4me3的表達水平;得到Western blot結(jié)果后,進行免疫組織化學(xué)染色實驗驗證Western blot實驗結(jié)果,并定位H3K4me3在實驗組和對照組中的表達。結(jié)果:1.免疫印跡實驗結(jié)果顯示組蛋白H3K4me3在膽脂瘤母組織中的表達水平的明顯低于外耳道上皮組織,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示組蛋白H3K4me3在膽脂瘤上皮組織以及外耳道上皮組織中均有表達,定位于膽脂瘤上皮組織以及外耳道上皮組織細胞核中,表現(xiàn)為上皮組織細胞核中棕黃色或棕褐色顆粒;膽脂瘤母組織中組蛋白H3K4me3的表達量明顯低于外耳道上皮組織,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論:組蛋白H3K4me3在中耳膽脂瘤上皮組織中表達明顯下調(diào),可能參與了中耳膽脂瘤發(fā)生和發(fā)展過程,其有可能成為治療中耳膽脂瘤的新靶點。第二部分組蛋白H3K4me3甲基化酶及去甲基化酶在中耳膽脂瘤中的表達目的:篩選影響中耳膽脂瘤上皮組織中組蛋白H3K4me3表達異常的主要因子。方法:收集2017年9月到2018年6月我院耳鼻咽喉頭頸外科收治的中耳膽脂瘤患者13例,以中耳膽脂瘤患者的膽脂瘤母組織為實驗組,及同一患者的外耳道上皮組織為對照組,通過RT-qPCR檢測兩組標(biāo)本中JARID1家族(JARID1A,JARID1B,JARID1C,JARID1D),MLL家族(MLL1,MLL2,MLL3,MLL4,SETD1A/B),MLL5以及SET7/9各基因mRNA表達水平,進行相對定量分析,篩選出影響H3K4me3表達差異的可能因子。結(jié)果:熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合鏈反應(yīng)(RT-qPCR)結(jié)果顯示組蛋白H3K4me3特異性甲基轉(zhuǎn)移酶MLL家族多種基因在中耳膽脂瘤母組織中表達呈下降趨勢,其中包括MLL1、MLL2、MLL5和SETD1A等;其特異性去甲基化酶在中耳膽脂瘤母組織中表達無明顯差異。結(jié)論:組蛋白H3K4me3在中耳膽脂瘤組織中下調(diào)可能是MLL1、MLL2、MLL5和SETD1A等多種特異性甲基轉(zhuǎn)移酶共同作用的結(jié)果。
【圖文】：

青島大學(xué)碩士學(xué)位結(jié)果1 Western blot 結(jié)果30 例研究對象的 60 例標(biāo)本經(jīng) Western blot 參，60 例樣本結(jié)果分析中耳膽脂瘤母組織中組為 0.65±0.26，外耳道上皮組織中組蛋白 H3K4m所得統(tǒng)計資料通過方差齊性檢驗，因此采用配對5.148，P 值為 0.001，，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學(xué)組織中組蛋白 H3K4me3 表達水平明顯低于外耳

結(jié)果陽性為 3 分。免疫組化染色陽性細胞的百分比分級：0 分；<33%為 1 分；33-66%為 2 分；66-100%為 3 分。免疫組化綜合評分以染色強度分級和免疫反應(yīng)陽性細胞百分比之和為依據(jù)。H3K4me3 組織表達主要定位于鱗狀上皮組織細胞核內(nèi)，表現(xiàn)為在鱗狀上皮細胞核內(nèi)棕黃色或棕褐色顆粒。（見圖 2）所得數(shù)據(jù)采用卡方檢驗進行分析，X2=29.433，P=0.001（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（見表 7），表明中耳膽脂瘤母組織中組蛋白 H3K4me3 表達水平明顯低于外耳道上皮組織。表 7 H3K4me3 在實驗組與對照組在免疫組化評分（強度分級+百分比分級）分組\評分 0 ＜4 分 ≥4 分 總計實驗組 0 26 4 30對照組 0 5 25 30總計 0 31 29 60
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R764.21

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本文編號：2621825