發(fā)布時間：2020-04-10 05:37

【摘要】：第一部分組蛋白H3K4me3在中耳膽脂瘤中的表達目的:量化組蛋白H3賴氨酸4的三甲基化(H3K4me3)在中耳膽脂瘤母組織及外耳道上皮組織中的表達,以研究其在中耳膽脂瘤發(fā)生、發(fā)展過程中的重要意義。方法:收集2017年9月到2018年6月我院耳鼻咽喉頭頸外科收治的中耳膽脂瘤患者30例,以中耳膽脂瘤患者的膽脂瘤母組織為實驗組,及同一患者的外耳道上皮組織為對照組,根據(jù)免疫印跡實驗(Western blot)結果分析H3K4me3的表達水平;得到Western blot結果后,進行免疫組織化學染色實驗驗證Western blot實驗結果,并定位H3K4me3在實驗組和對照組中的表達。結果:1.免疫印跡實驗結果顯示組蛋白H3K4me3在膽脂瘤母組織中的表達水平的明顯低于外耳道上皮組織,兩者差異有統(tǒng)計學意義。2.免疫組織化學染色結果顯示組蛋白H3K4me3在膽脂瘤上皮組織以及外耳道上皮組織中均有表達,定位于膽脂瘤上皮組織以及外耳道上皮組織細胞核中,表現(xiàn)為上皮組織細胞核中棕黃色或棕褐色顆粒;膽脂瘤母組織中組蛋白H3K4me3的表達量明顯低于外耳道上皮組織,兩者差異有統(tǒng)計學意義。結論:組蛋白H3K4me3在中耳膽脂瘤上皮組織中表達明顯下調,可能參與了中耳膽脂瘤發(fā)生和發(fā)展過程,其有可能成為治療中耳膽脂瘤的新靶點。第二部分組蛋白H3K4me3甲基化酶及去甲基化酶在中耳膽脂瘤中的表達目的:篩選影響中耳膽脂瘤上皮組織中組蛋白H3K4me3表達異常的主要因子。方法:收集2017年9月到2018年6月我院耳鼻咽喉頭頸外科收治的中耳膽脂瘤患者13例,以中耳膽脂瘤患者的膽脂瘤母組織為實驗組,及同一患者的外耳道上皮組織為對照組,通過RT-qPCR檢測兩組標本中JARID1家族(JARID1A,JARID1B,JARID1C,JARID1D),MLL家族(MLL1,MLL2,MLL3,MLL4,SETD1A/B),MLL5以及SET7/9各基因mRNA表達水平,進行相對定量分析,篩選出影響H3K4me3表達差異的可能因子。結果:熒光定量逆轉錄聚合鏈反應(RT-qPCR)結果顯示組蛋白H3K4me3特異性甲基轉移酶MLL家族多種基因在中耳膽脂瘤母組織中表達呈下降趨勢,其中包括MLL1、MLL2、MLL5和SETD1A等;其特異性去甲基化酶在中耳膽脂瘤母組織中表達無明顯差異。結論:組蛋白H3K4me3在中耳膽脂瘤組織中下調可能是MLL1、MLL2、MLL5和SETD1A等多種特異性甲基轉移酶共同作用的結果。
【圖文】：

青島大學碩士學位結果1 Western blot 結果30 例研究對象的 60 例標本經(jīng) Western blot 參，60 例樣本結果分析中耳膽脂瘤母組織中組為 0.65±0.26，外耳道上皮組織中組蛋白 H3K4m所得統(tǒng)計資料通過方差齊性檢驗，因此采用配對5.148，P 值為 0.001，，P＜0.05，差異具有統(tǒng)計學組織中組蛋白 H3K4me3 表達水平明顯低于外耳

結果陽性為 3 分。免疫組化染色陽性細胞的百分比分級：0 分；<33%為 1 分；33-66%為 2 分；66-100%為 3 分。免疫組化綜合評分以染色強度分級和免疫反應陽性細胞百分比之和為依據(jù)。H3K4me3 組織表達主要定位于鱗狀上皮組織細胞核內，表現(xiàn)為在鱗狀上皮細胞核內棕黃色或棕褐色顆粒。（見圖 2）所得數(shù)據(jù)采用卡方檢驗進行分析，X2=29.433，P=0.001（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計學意義（見表 7），表明中耳膽脂瘤母組織中組蛋白 H3K4me3 表達水平明顯低于外耳道上皮組織。表 7 H3K4me3 在實驗組與對照組在免疫組化評分（強度分級+百分比分級）分組\評分 0 ＜4 分 ≥4 分 總計實驗組 0 26 4 30對照組 0 5 25 30總計 0 31 29 60
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R764.21

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本文編號：2621825