【摘要】：目的:探究miR-34AHG-133aa在鼻咽癌中的表達情況及對鼻咽癌細胞惡性生物學功能的影響。方法:1.熒光定量聚合酶鏈式反應(Real-time RT-PCR)、蛋白免疫印跡(Western blot)法測定MIR-34AHG-133aa在鼻咽癌細胞和組織中的表達情況。2.KM生存分析(Kaplan Meier-plotter)評價MIR34AHG-133aa表達水平與鼻咽癌患者預后(overall survival,OS)的關系,通過Real-time RT-PCR探究MIR34AHG-133aa表達與鼻咽癌患者分期、復發(fā)和轉移之間的關系。3.慢病毒載體構建外源性穩(wěn)定過表達MIR34AHG-133aa的鼻咽癌細胞系,通過MTT比色法檢測增殖、細胞凋亡實驗、劃痕實驗、transwell侵襲和轉移實驗、裸鼠成瘤實驗、TUNEL檢測及免疫熒光實驗驗證MIR34AHG-133aa在體內(nèi)外對鼻咽癌細胞增殖、凋亡、侵襲和轉移的影響。結果:1.通過對HEK293細胞進行細胞全蛋白質(zhì)譜檢測時,我們發(fā)現(xiàn)miR-34a前體宿主RNA(MIR-34AHG)翻譯的一個肽段。隨后,利用抗體驗證的方法證實了該小分子蛋白質(zhì)的存在,并將其命名為MIR-34AHG-133aa。2.通過Western blot發(fā)現(xiàn),MIR-34AHG-133aa在鼻咽癌細胞CNE1、CNE2、TWO3、C666-1的表達低于正常鼻咽黏膜細胞NP69(P0.01)。Real time RT-PCR結果顯示鼻咽癌組織中MIR-34AHG-133aa的表達水平明顯低于正常鼻咽黏膜組織(P0.01);鼻咽癌III期患者中MIR-34AHG-133aa表達明顯高于IV期患者(P0.01);未發(fā)生局部復發(fā)的鼻咽癌患者MIR-34AHG-133aa表達水平明顯高于發(fā)生者(P0.01);同樣,未發(fā)生遠處轉移的鼻咽癌患者MIR-34AHG-133aa表達明顯高于發(fā)生者(P0.001)。KM生存分析結果表明,MIR34A-HG-133a低表達的鼻咽癌患者預后較差(P0.05)。3.構建穩(wěn)定過表達MIR-34AHG-133aa的鼻咽癌細胞系C666-1,并通過Real time RT-PCR及Western blot對細胞系進行驗證。而后通過MTT細胞增殖實驗、細胞凋亡、遷移與侵襲實驗及裸鼠成瘤實驗評估過表達MIR-34AHG-133aa基因對鼻咽癌細胞功能的影響,結果發(fā)現(xiàn)過表達MIR-34AHG-133aa的鼻咽癌細胞生長速率較對照組細胞降低(P0.01),且過表達MIR-34AHG-133aa的鼻咽癌細胞遷移穿過濾膜的細胞數(shù)量明顯少于對照組(P0.01,P0.001),再者,過表達MIR-34AHG-133aa鼻咽癌細胞的凋亡率為12.1%,高于對照組細胞的凋亡率0.23%。結果提示MIR-34AHG-133aa可以明顯抑制鼻咽癌細胞的增殖、侵襲和遷移,促進鼻咽癌細胞的凋亡。4.通過對裸鼠移植瘤瘤體進行TUNEL檢測及免疫熒光實驗,結果顯示接種過表達MIR-34AHG-133aa的鼻咽癌細胞的瘤體的凋亡率大于對照組(P0.05),而caspase-3的表達也明顯高于對照組(P0.001),但ki67的表達低于對照組(P0.01),結果提示MIR-34AHG-133aa在體內(nèi)具有抑制鼻咽癌細胞的增殖且促進鼻咽癌細胞凋亡的作用。結論:1.MIR-34AHG-133aa是miR-34a前體宿主RNA(MIR34AHG)翻譯的多肽,在鼻咽癌組織及細胞中表達下調(diào)。2.MIR-34AHG-133aa低表達的鼻咽癌患者分期較晚,且預后較差。3.MIR-34AHG-133aa可顯著抑制鼻咽癌細胞的增殖、侵襲和遷移,促進鼻咽癌細胞的凋亡。綜上提示,MIR-34A前體宿主非編碼RNA翻譯功能性蛋白(MIR-34AHG-133aa)可能為鼻咽癌的潛在抑制因子。
【圖文】：

eal-time RT-PCR was used to detect the expression of MIR-34AHG-133aa in 8 caryngeal carcinoma and 8 cases of nasopharyngeal inflammatory tissue（P＜0.01）34AHG-133aa 在鼻咽癌細胞中蛋白水平表達下調(diào)一步探究 MIR-34AHG-133aa 在鼻咽癌中的表達情況，我印跡（Western blot, WB）法檢測了 4 株鼻咽癌細胞株與皮細胞 NP69 中 MIR-34AHG-133aa 的蛋白表達水平。實-34AHG-133aa 在鼻咽癌細胞中蛋白表達顯著下調(diào)（鼻咽CNE2、TW03、C666-1；正常鼻咽部細胞：NP69，圖 1-2** P＜0.01）。

MIR-34A 前體宿主非編碼 RNA 翻譯功能性蛋白及對鼻咽癌細胞生物學功能的影響 2019 屆碩士學位論文2.3 MIR-34AHG-133aa 表達與鼻咽癌分期及預后的關系通 過 Real time RT-PCR 技 術 對 125 例 鼻 咽 癌 患 者 組 織 樣 本 中MIR-34AHG-133aa 的表達進行檢測，取表達中位數(shù)值 0.102 將患者分為高表達組及低表達組。通過 KM 生存分析不同 MIR-34AHG-133aa 表達水平患者的總體生存率，結果發(fā)現(xiàn)高表達 MIR-34AHG-133aa 的鼻咽癌患者總生存率高于低表達者，且差異有統(tǒng)計學意義（*P＜0.05，圖 1-3B）。III 期患者的 MIR-34AHG-133aa 表達水平明顯高于 IV 期患者（**P＜0.01，圖 1-3A）；無局部復發(fā)患者中 MIR-34AHG-133aa 表達明顯高于出現(xiàn)復發(fā)的患者（**P＜0.01，，圖 1-3C）；同樣，無遠處轉移的患者 MIR-34AHG-133aa 表達高于轉移者（***P＜0.001，圖 1-3D）。A B
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.63

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本文編號：2613357