【摘要】：目的:本課題的研究目的在于通過干擾SERPINB6基因在鼻咽癌CNE-1細胞中的表達,然后觀察該基因表達降低對CNE-1細胞增殖、侵襲及遷移的影響,以及對腫瘤轉(zhuǎn)移蛋白MMP-2活性的影響,并分析它的表達降低在鼻咽癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用,進一步揭示鼻咽癌的發(fā)病機制,為臨床診斷提供理論依據(jù),也為以SERPINB6作為潛在靶點的NPC基因治療提供實驗依據(jù)。方法:1.采用人鼻咽癌CNE-1細胞株作為研究對象進行細胞培養(yǎng),首先進行預實驗,預實驗分五組:mock組(空白組A)、N.C-siRNA組(陰性對照組B)和siRNA-SERPNB6-1組(實驗組C)、siRNA-SERPINB6-2 組(實驗組 D)、siRNA-SERPINB6-3 組(實驗組E).2.通過使用普通siRNA經(jīng)濟型套餐,對CNE-1細胞進行SERPINB6的轉(zhuǎn)染小干擾,檢測轉(zhuǎn)染率(NC-FAM);實時熒光定量PCR(RT-PCR)檢測5組細胞中SERPINB6的表達情況,并篩選出干擾效果最佳一組,作為后續(xù)的正式實驗。3.正式實驗分三組:mock組(空白組A)、N.C-siRNA組(陰性對照組B)和siRNA-SERPINB6組(實驗組C,干擾最佳)。MTT法檢測被干擾后的SERPINB6對NPCCNE-1細胞增殖活性的影響;劃痕實驗檢測被干擾后的SERPINB6對NPCCNE-1細胞遷移能力的影響;Transwell侵襲實驗檢測被干擾后的SERPINB6對NPCCNE-1.細胞侵襲能力的影響。4.WB檢測腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白MPP-2的表達情況。結(jié)果:1.在預實驗中,轉(zhuǎn)染siRNA后,RT-PCR法檢測實驗組CDE的SERPINB6相對表達量比陰性對照組和空白組明顯下降(P0.05)。轉(zhuǎn)染siRNA3序列即實驗組C下降最明顯(P0.01),干擾效果最佳,說明本實驗成功干擾SERPINB6,故后續(xù)實驗采用實驗組C的siRNA3 序列。2.在正式實驗中,每隔24小時用MTT法檢測實驗組的增殖速度分別是 0.184±0.017、0.278土0.019、0.389±0.023,較陰性對照組和空白組細胞生長增大明顯。(P0.05)。3.劃痕實驗結(jié)果示轉(zhuǎn)染了 si-RNA的實驗組細胞遷移距離明顯快于陰性對照組和空白組。(p0.05)。4.Transwell實驗檢測實驗組5個視野下的侵襲細胞平均值為135,較陰性對照組和空白組進入下層小室的細胞數(shù)明顯增多,侵襲能力明顯增強。(P0.05)。5.Western Blot法顯示實驗組中MMP-2的蛋白活化水平明顯升高,高于陰性對照組和空白組。(P0.05)。結(jié)論:1.SERPINB6能夠抑制CNE-1細胞的增殖、遷移和侵襲,可為基因治療提供新的靶點依據(jù)。2.外源性轉(zhuǎn)染si-SERPINB6促進CNE-1細胞的遷移與侵襲,腫瘤轉(zhuǎn)移蛋白MMP-2的活化表達水平升高,SERPINB6可能是通過介導MMPS活化參與CNE-1細胞的轉(zhuǎn)移調(diào)節(jié)。
【圖文】：

３．３正式實驗：細胞的培養(yǎng)及生長逡逑細胞分組：ＣＮＥ－１＋ｍｏｃｋ組（空白組Ａ）、ＣＮＥ－１＋Ｎ．Ｃ－ｓｉＲＮＡ組（陰性對逡逑照組Ｂ）和ＣＮＥ－】＋邋ｓｉＲＮＡ－ＳＥＲＰ丨ＮＢ６組（實驗組Ｃ，干擾最佳）。培養(yǎng)４８ｈ后，逡逑１６逡逑

３．３正式實驗：細胞的培養(yǎng)及生長逡逑細胞分組：ＣＮＥ－１＋ｍｏｃｋ組（空白組Ａ）、ＣＮＥ－１＋Ｎ．Ｃ－ｓｉＲＮＡ組（陰性對逡逑照組Ｂ）和ＣＮＥ－】＋邋ｓｉＲＮＡ－ＳＥＲＰ丨ＮＢ６組（實驗組Ｃ，干擾最佳）。培養(yǎng)４８ｈ后，，逡逑１６逡逑
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.63

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本文編號：2603014