【摘要】：背景:在我國(guó),隨著人均壽命逐漸延長(zhǎng)和老齡化現(xiàn)象日益嚴(yán)重,年齡相關(guān)性黃斑變性(age-related macular degeneration,AMD)的發(fā)病率也呈明顯上升。2016年眼科臨床指南將AMD分為干性AMD和濕性AMD,干性AMD的特點(diǎn)為黃斑區(qū)視網(wǎng)膜下玻璃膜疣的大量沉積伴不同程度的萎縮病灶,濕性AMD以脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)的形成為主要表現(xiàn),CNV的滲出和出血是引起視力不可逆損害的主要病因。目前對(duì)CNV的病因研究尚不太清楚,國(guó)際上的主流觀點(diǎn)認(rèn)為CNV的形成機(jī)制是包含了炎癥反應(yīng)、補(bǔ)體系統(tǒng)以及新生血管相關(guān)信號(hào)通路的激活為主的復(fù)雜病理過(guò)程。細(xì)胞粘附分子CD146(又稱MUC18、MCAM等)是免疫球蛋白超家族成員,是一類細(xì)胞跨膜蛋白。CD146的胞外區(qū)域包含5個(gè)典型的免疫球蛋白樣功能域V-V-C2-C2-C2,胞內(nèi)區(qū)含有潛在的蛋白激酶C(PKC)和ERM蛋白激酶結(jié)合位點(diǎn)。CD146作為一種細(xì)胞粘附分子,參與細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的粘附活動(dòng),它不僅起著“分子膠水”的作用,還能調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透性,促進(jìn)血管生成參與細(xì)胞跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。CD146最早發(fā)現(xiàn)和分離于黑色素瘤細(xì)胞中,多篇文獻(xiàn)報(bào)道CD146在黑色素瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌等多種類型的腫瘤組織中高表達(dá),并且可以調(diào)控腫瘤新生血管的啟動(dòng)、內(nèi)皮細(xì)胞的增殖遷移,而抗CD146抗體可以抑制腫瘤的生長(zhǎng)和新生血管的形成。Yan曾報(bào)道CD146在人眼中表達(dá),且參與了視網(wǎng)膜的形成過(guò)程,但尚未有研究表明CD146是否參與了CNV的形成過(guò)程�；诋�(dāng)前的研究背景,本課題將從以下三個(gè)方面展開(kāi)研究:(1)濕性年齡相關(guān)性黃斑變性患者血清中的可溶性CD146(Soluble CD146,sCD146)與VEGFR2的表達(dá)水平如何?(2)通過(guò)對(duì)視網(wǎng)膜下注射聚乙二醇誘導(dǎo)的CNV模型的相關(guān)研究,探討CD146是否參與了CNV的形成?(3)CD146與VEGFR2在CNV形成過(guò)程中可能的相互作用關(guān)系?目的:探索sCD146和VEGFR2在濕性AMD患者血清中的表達(dá)及其意義,探討CD146與VEGFR2在CNV形成過(guò)程中可能的相互作用關(guān)系。方法:本研究納入于我科就診,臨床診斷為濕性AMD的住院患者88例為實(shí)驗(yàn)組,并同時(shí)納入45例健康志愿者作為對(duì)照組。收集并記錄所有相關(guān)病史資料。采集靜脈血,并于采血后4小時(shí)處理并收集上清液,通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)血清中sCD146和VEGFR2的表達(dá)水平。選取60只8周齡雄性C57BL/6J小鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法,按照造模后取材時(shí)間的不同隨機(jī)分為5d組、10d組和15d組,各20只。左眼為正常對(duì)照,右眼采用視網(wǎng)膜下注射聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)誘導(dǎo)產(chǎn)生小鼠CNV模型并通過(guò)視網(wǎng)膜組織切片及HE染色,鑒定CNV模型。real-time PCR分別檢測(cè)小鼠實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組5天、10天、15天CD146、VEGF、VEGFR2的mRNA的表達(dá)變化。通過(guò)免疫組化染色法檢測(cè)小鼠眼內(nèi)CD146、VEGF、VEGFR2的表達(dá)。結(jié)果:濕性AMD患者與正常人相比,血清中sCD146與VEGFR2的表達(dá)量明顯升高,結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在視網(wǎng)膜下注射PEG誘導(dǎo)的小鼠CNV模型中,在視網(wǎng)膜下注射后第5d,神經(jīng)視網(wǎng)膜VEGF的mRNA相對(duì)表達(dá)量較正常對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在RPE/脈絡(luò)膜復(fù)合體中CD146、VEGF、VEGFR2的表達(dá),較正常組顯著升高差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在視網(wǎng)膜下注射后第10d和15d,神經(jīng)視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜中CD146、VEGF、VEGFR2的mRNA表達(dá)水平與正常組相比明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Person相關(guān)性分析提示在視網(wǎng)膜下注射PEG后,視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜復(fù)合體中CD146與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān),脈絡(luò)膜復(fù)合體中CD146的表達(dá)與VEGFR2呈正相關(guān)。免疫組化染色的結(jié)果顯示,在造模10d后,造模組與正常對(duì)照組相比較CD146、VEGF、VEGFR2在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層、外從狀層、外核層的陽(yáng)性表達(dá)均有不同程度增強(qiáng)。結(jié)論:濕性AMD患者血清中sCD146的表達(dá)水平明顯上升且與VEGFR2呈正相關(guān),提示CD146可能與濕性AMD患者眼底新生血管的形成與疾病的進(jìn)展過(guò)程密切相關(guān),視網(wǎng)膜下注射PEG誘導(dǎo)的小鼠CNV模型中CD146、VEGF、VEGFR2的一致性高表達(dá),提示在CNV形成過(guò)程中CD146與VEGF、VEGFR2之間可能存在著協(xié)同作用。雖然目前具體的機(jī)制尚不明確,但這一發(fā)現(xiàn)可以幫助我們從新的角度認(rèn)識(shí)且探究濕性AMD的發(fā)病機(jī)制,為濕性AMD的治療尋找更安全有效的治療措施和更特異的治療靶點(diǎn)提供新的理論依據(jù)。
【圖文】：

圖 1 人血清中 sCD146 和 VEGFR2 的表達(dá)水平Figure 1 The expressions of sCD146 and VEGFR2 in human serum .表 1 濕性 AMD 患者血清中 sCD146 表達(dá)水平分布Table 2 Distribution of sCD146 levels in the exudative AMD and control groupsGroup nsCD146 level (ng/mL) Test for normal distributionMean ± SD Minimum Maximum Z-value P-valueControl 45 125.52 ± 60.99 54.10 363.40 0.882 0.418Exudative AMDTotal 88 171.88 ± 65.67 19.18 286.40 1.049 0.221Unilateral CNV 44 165.69 ± 68.43 67.74 333.20 0.967 0.307Bilateral CNV 44 178.06 ± 62.96 54.10 363.40 0.633 0.818Occult CNV 22 103.09 ± 27.53 54.10 161.66 0.559 0.914

15 (33.33) 18 (20.45)8 (17.78) 25 (28.41)5 (11.11) 29 (32.96)n 45 88清 sCD146 水平作為濕性 AMD 生物標(biāo)志物的可行性分析為反映敏感性和特異性連續(xù)變量的綜合指標(biāo)，受試者工作特征（ng characteristic curve, ROC）曲線分析可用于判斷實(shí)驗(yàn)因子對(duì)疾病識(shí)特異性，綜合評(píng)價(jià)其對(duì)該疾病的診斷價(jià)值，ROC 曲線下面積越大或 1，，表明該因子的診斷價(jià)值越大。分析結(jié)果顯示：sCD146 檢測(cè)結(jié)果（area under the curve, AUC）為 0.696（95%置信區(qū)間 0.601 0.791）臨界值為 157.16ng/ml，敏感性和特異性分別為 55.7%和 88.2%。sC確性較高，有望成為濕性 AMD 的新的檢測(cè)靶點(diǎn)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R774.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 戚艷;戴旭鋒;張華;何穎;龐繼景;;小鼠經(jīng)角膜視網(wǎng)膜下腔注射的方法學(xué)研究[J];中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志;2015年07期

2 陳偉;張森林;;CD146的結(jié)構(gòu)和生理功能及其與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2010年11期

本文編號(hào)：2590019