【摘要】：背景:在我國,隨著人均壽命逐漸延長和老齡化現(xiàn)象日益嚴重,年齡相關(guān)性黃斑變性(age-related macular degeneration,AMD)的發(fā)病率也呈明顯上升。2016年眼科臨床指南將AMD分為干性AMD和濕性AMD,干性AMD的特點為黃斑區(qū)視網(wǎng)膜下玻璃膜疣的大量沉積伴不同程度的萎縮病灶,濕性AMD以脈絡(luò)膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)的形成為主要表現(xiàn),CNV的滲出和出血是引起視力不可逆損害的主要病因。目前對CNV的病因研究尚不太清楚,國際上的主流觀點認為CNV的形成機制是包含了炎癥反應(yīng)、補體系統(tǒng)以及新生血管相關(guān)信號通路的激活為主的復(fù)雜病理過程。細胞粘附分子CD146(又稱MUC18、MCAM等)是免疫球蛋白超家族成員,是一類細胞跨膜蛋白。CD146的胞外區(qū)域包含5個典型的免疫球蛋白樣功能域V-V-C2-C2-C2,胞內(nèi)區(qū)含有潛在的蛋白激酶C(PKC)和ERM蛋白激酶結(jié)合位點。CD146作為一種細胞粘附分子,參與細胞與細胞間、細胞與細胞外基質(zhì)之間的粘附活動,它不僅起著“分子膠水”的作用,還能調(diào)節(jié)細胞滲透性,促進血管生成參與細胞跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。CD146最早發(fā)現(xiàn)和分離于黑色素瘤細胞中,多篇文獻報道CD146在黑色素瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌等多種類型的腫瘤組織中高表達,并且可以調(diào)控腫瘤新生血管的啟動、內(nèi)皮細胞的增殖遷移,而抗CD146抗體可以抑制腫瘤的生長和新生血管的形成。Yan曾報道CD146在人眼中表達,且參與了視網(wǎng)膜的形成過程,但尚未有研究表明CD146是否參與了CNV的形成過程�；诋斍暗难芯勘尘�,本課題將從以下三個方面展開研究:(1)濕性年齡相關(guān)性黃斑變性患者血清中的可溶性CD146(Soluble CD146,sCD146)與VEGFR2的表達水平如何?(2)通過對視網(wǎng)膜下注射聚乙二醇誘導(dǎo)的CNV模型的相關(guān)研究,探討CD146是否參與了CNV的形成?(3)CD146與VEGFR2在CNV形成過程中可能的相互作用關(guān)系?目的:探索sCD146和VEGFR2在濕性AMD患者血清中的表達及其意義,探討CD146與VEGFR2在CNV形成過程中可能的相互作用關(guān)系。方法:本研究納入于我科就診,臨床診斷為濕性AMD的住院患者88例為實驗組,并同時納入45例健康志愿者作為對照組。收集并記錄所有相關(guān)病史資料。采集靜脈血,并于采血后4小時處理并收集上清液,通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血清中sCD146和VEGFR2的表達水平。選取60只8周齡雄性C57BL/6J小鼠采用隨機數(shù)字表法,按照造模后取材時間的不同隨機分為5d組、10d組和15d組,各20只。左眼為正常對照,右眼采用視網(wǎng)膜下注射聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)誘導(dǎo)產(chǎn)生小鼠CNV模型并通過視網(wǎng)膜組織切片及HE染色,鑒定CNV模型。real-time PCR分別檢測小鼠實驗組和對照組5天、10天、15天CD146、VEGF、VEGFR2的mRNA的表達變化。通過免疫組化染色法檢測小鼠眼內(nèi)CD146、VEGF、VEGFR2的表達。結(jié)果:濕性AMD患者與正常人相比,血清中sCD146與VEGFR2的表達量明顯升高,結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異。在視網(wǎng)膜下注射PEG誘導(dǎo)的小鼠CNV模型中,在視網(wǎng)膜下注射后第5d,神經(jīng)視網(wǎng)膜VEGF的mRNA相對表達量較正常對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),在RPE/脈絡(luò)膜復(fù)合體中CD146、VEGF、VEGFR2的表達,較正常組顯著升高差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);在視網(wǎng)膜下注射后第10d和15d,神經(jīng)視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜中CD146、VEGF、VEGFR2的mRNA表達水平與正常組相比明顯升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Person相關(guān)性分析提示在視網(wǎng)膜下注射PEG后,視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜復(fù)合體中CD146與VEGF的表達呈正相關(guān),脈絡(luò)膜復(fù)合體中CD146的表達與VEGFR2呈正相關(guān)。免疫組化染色的結(jié)果顯示,在造模10d后,造模組與正常對照組相比較CD146、VEGF、VEGFR2在神經(jīng)節(jié)細胞層、內(nèi)核層、外從狀層、外核層的陽性表達均有不同程度增強。結(jié)論:濕性AMD患者血清中sCD146的表達水平明顯上升且與VEGFR2呈正相關(guān),提示CD146可能與濕性AMD患者眼底新生血管的形成與疾病的進展過程密切相關(guān),視網(wǎng)膜下注射PEG誘導(dǎo)的小鼠CNV模型中CD146、VEGF、VEGFR2的一致性高表達,提示在CNV形成過程中CD146與VEGF、VEGFR2之間可能存在著協(xié)同作用。雖然目前具體的機制尚不明確,但這一發(fā)現(xiàn)可以幫助我們從新的角度認識且探究濕性AMD的發(fā)病機制,為濕性AMD的治療尋找更安全有效的治療措施和更特異的治療靶點提供新的理論依據(jù)。
【圖文】：

圖 1 人血清中 sCD146 和 VEGFR2 的表達水平Figure 1 The expressions of sCD146 and VEGFR2 in human serum .表 1 濕性 AMD 患者血清中 sCD146 表達水平分布Table 2 Distribution of sCD146 levels in the exudative AMD and control groupsGroup nsCD146 level (ng/mL) Test for normal distributionMean ± SD Minimum Maximum Z-value P-valueControl 45 125.52 ± 60.99 54.10 363.40 0.882 0.418Exudative AMDTotal 88 171.88 ± 65.67 19.18 286.40 1.049 0.221Unilateral CNV 44 165.69 ± 68.43 67.74 333.20 0.967 0.307Bilateral CNV 44 178.06 ± 62.96 54.10 363.40 0.633 0.818Occult CNV 22 103.09 ± 27.53 54.10 161.66 0.559 0.914

15 (33.33) 18 (20.45)8 (17.78) 25 (28.41)5 (11.11) 29 (32.96)n 45 88清 sCD146 水平作為濕性 AMD 生物標志物的可行性分析為反映敏感性和特異性連續(xù)變量的綜合指標，受試者工作特征（ng characteristic curve, ROC）曲線分析可用于判斷實驗因子對疾病識特異性，綜合評價其對該疾病的診斷價值，ROC 曲線下面積越大或 1，，表明該因子的診斷價值越大。分析結(jié)果顯示：sCD146 檢測結(jié)果（area under the curve, AUC）為 0.696（95%置信區(qū)間 0.601 0.791）臨界值為 157.16ng/ml，敏感性和特異性分別為 55.7%和 88.2%。sC確性較高，有望成為濕性 AMD 的新的檢測靶點。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R774.5

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 戚艷;戴旭鋒;張華;何穎;龐繼景;;小鼠經(jīng)角膜視網(wǎng)膜下腔注射的方法學(xué)研究[J];中華實驗眼科雜志;2015年07期

2 陳偉;張森林;;CD146的結(jié)構(gòu)和生理功能及其與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2010年11期

本文編號：2590019