【摘要】：目的：視神經(jīng)損傷的再生和功能恢復(fù)是眼科學(xué)臨床和科研仍亟待解決的難題。近年來的大量研究多集中在藥物研究方面,但因療效局限,或由于明顯的副作用而限制了藥物應(yīng)用,使得視神經(jīng)保護(hù)的研究進(jìn)展緩慢。最近更多的注意力轉(zhuǎn)向研發(fā)一種能夠通過多種途徑發(fā)揮促進(jìn)神經(jīng)存活和功能恢復(fù)的藥物。黃體酮是一種重要的性腺類固醇激素,其作用已不僅僅局限在生殖系統(tǒng)的范疇,它可在神經(jīng)系統(tǒng)合成和分泌,且具有活性作用,可通過多種途徑發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)作用,例如能夠減輕腦損傷中的炎癥反應(yīng)、抑制細(xì)胞凋亡、促神經(jīng)營養(yǎng)因子分泌等等。在腦損傷的治療中,黃體酮已充分顯示了它的神經(jīng)保護(hù)作用,但黃體酮對視神經(jīng)損傷再生的作用尚不清楚。 本實驗通過制作大鼠視神經(jīng)不完全損傷模型,腹腔注射黃體酮,通過大鼠視網(wǎng)膜HE染色觀察形態(tài)學(xué)改變,免疫組織化學(xué)染色半定量檢測及陽性細(xì)胞計數(shù)觀察谷氨酸轉(zhuǎn)運體-1(GLT-1)和活化p38-絲裂原活化蛋白激酶(p38-MAPK)的表達(dá)變化,旨在對黃體酮對視神經(jīng)損傷再生的作用及機制進(jìn)行探討,以期為黃體酮治療視神經(jīng)損傷提供實驗依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 方法：清潔級雄性健康SD大鼠80只作為研究對象,體重200g±20g,行外眼及眼底檢查無病變者納入實驗,隨機分為四組：正常組20只(不做任何處理)；假損傷組20只(只暴露右眼視神經(jīng),不夾傷)；損傷1組20只(右眼行視神經(jīng)不完全損傷處理,傷后即刻給予腹腔注射生理鹽水)；損傷2組20只(右眼行視神經(jīng)不完全損傷處理,傷后即刻給予腹腔注射黃體酮注射液)。按損傷后1天、3天、7天、14天四個時間點隨機將各組5只大鼠右眼球摘除,取視網(wǎng)膜組織固定切片,以視盤上方2mm的視網(wǎng)膜組織作為觀察對象。HE染色光學(xué)顯微鏡觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化,免疫組織化學(xué)染色觀察視網(wǎng)膜組織中GLT-1及活化p38-MAPK(p-p38)的表達(dá)變化,計算機圖像分析進(jìn)行半定量檢測平均光密度值(The averageoptical density value, AOD),以免疫陽性染色的AOD來表示抗原表達(dá)量,AOD越高則陽性表達(dá)越強。高倍光學(xué)顯微鏡(×400)計數(shù)表達(dá)p-p38的細(xì)胞。實驗數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,實驗數(shù)據(jù)用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析,統(tǒng)計學(xué)處理采用多樣本均數(shù)的單因素方差分析或獨立樣本T檢驗,組間比較采用LSD-t檢驗。 結(jié)果： 1視網(wǎng)膜組織HE染色正常組和假損傷組大鼠視網(wǎng)膜視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)清晰,主要可見3層細(xì)胞核層：神經(jīng)節(jié)細(xì)胞核層、內(nèi)核層及外核層結(jié)構(gòu),胞核排列密集整齊；損傷1組隨著損傷時間延長大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層胞核明顯稀疏,排列紊亂,空泡樣改變,內(nèi)核層及外核層不同程度變薄；與損傷1組比較,損傷2組各個時間點大鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞核排列尚整齊,稀疏程度及空泡改變均較輕,未見明顯變薄。 2大鼠視網(wǎng)膜GLT-1免疫陽性表達(dá)呈深棕色,主要分布于內(nèi)叢狀層和內(nèi)核層,正常組和假損傷組AOD各時間點差別不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),說明兩組的GLT-1表達(dá)無差別。損傷1組1天時GLT-1的AOD為0.368+0.033,與正常組差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),較正常組AOD(0.201+0.013)升高,說明損傷1組的GLT-1表達(dá)較正常組增加；3天、7天和14天的AOD分別為0.151+0.027、0.106+0.031和0.076±0.020,均較正常組下降(P0.05)。損傷2組1天時GLT-1的AOD為0.461±0.011,與損傷1組的差別具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),即損傷2組GLT-1的AOD較損傷1組升高,說明損傷2組GLT-1表達(dá)較損傷1組增加；3天、7天及14天的AOD分別為0.231+0.021、0.132±0.022和0.103±0.013,均較損傷1組升高,但除3天時較正常組高,7天和14天較正常組下降,說明損傷2組的GLT-1表達(dá)多于損傷1組但仍會下降至正常水平以下。 3正常組和假損傷組各個時間點的大鼠視網(wǎng)膜各層均未見p-p38的表達(dá)；損傷1組在1天、3天、7天在視網(wǎng)膜視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層可見p-p38表達(dá),AOD分別為0.459±0.029、0.324±0.023和0.201±0.024,陽性表達(dá)細(xì)胞計數(shù)為14.2±1.5、8.0±1.6和4.2±0.8(單位：個),均呈逐漸下降趨勢,14天均表達(dá)陰性。損傷2組1天、3天、7天時可見p-p38的表達(dá),AOD分別為0.339±0.019、0.245±0.014和0.154+0.032,表達(dá)p-p38的細(xì)胞計數(shù)為8.2±1.3、6.4±1.1和3.4±1.2,各時間點AOD和細(xì)胞計數(shù)與損傷1組的差別均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),說明損傷2組p-p38的陽性表達(dá)少于損傷1組；14天表達(dá)陰性。 結(jié)論： 1外傷性視神經(jīng)損傷后神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)量減少,細(xì)胞排列紊亂,應(yīng)用黃體酮后細(xì)胞紊亂及數(shù)量減少的程度均較注射生理鹽水組輕,說明黃體酮對外傷性視神經(jīng)損傷后的視網(wǎng)膜具有保護(hù)作用。 2應(yīng)用黃體酮后視網(wǎng)膜組織中GLT-1的表達(dá)均較應(yīng)用鹽水組增強,證明黃體酮能夠增加外傷性視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜中GLT-1的表達(dá)。 3應(yīng)用黃體酮后視網(wǎng)膜組織中活化p38-MAPK的表達(dá)均較應(yīng)用生理鹽水組弱,證明黃體酮能夠降低外傷性視神經(jīng)損傷后視網(wǎng)膜中活化p38-MAPK的表達(dá)。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R774.6

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本文編號：2586980