【摘要】：目的：喉癌是來源于喉黏膜上皮組織的惡性腫瘤，最常見的為喉鱗狀細胞癌，約占全身惡性腫瘤的5.7%-7.6%，近年來其發(fā)病率逐漸增多。目前喉癌的治療方式仍以手術為主，輔以放、化療，雖然近年來原有的治療方法不斷改善，但是喉癌的治療效果仍不理想，其5年生存率并未明顯提高。隨著各種生物學技術的發(fā)展，人們正積極尋找新的治療方式和新的藥物來治療喉癌。近年來許多學者發(fā)現(xiàn)一些上皮來源的惡性腫瘤中存在免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）的表達，這一現(xiàn)象已成為腫瘤免疫研究的一個熱點，并且可能為腫瘤的治療提供一個新的方向。腫瘤血管生成與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關，而促血管生成因子的表達則是腫瘤血管生成的重要因素。本實驗通過研究抗人IgM抗體對喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤微血管密度（microvesseldensity,MVD）以及血管內皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)、腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor，TNF)受體超家族成員CD40蛋白表達的影響，以探討抗人IgM抗體抗腫瘤血管生成的作用和可能的機制，從而為抗人IgM抗體應用于喉鱗癌的治療提供理論和實驗依據。方法：在本實驗小組的前期研究[1]中我們已經成功建立了喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤模型，將15只裸鼠隨機分為實驗組、IgG對照組和PBS對照組。實驗組移植瘤內注射抗人IgM抗體，，1.5mg/只，分五次注射，每3天一次；IgG組移植瘤內注射羊IgG，注射量與注射方法與實驗組相同；PBS組移植瘤內注射PBS液，注射量與注射方法與實驗組相同。觀察裸鼠的生長情況，最后一次用藥后3天，處死裸鼠，取出移植瘤體，應用免疫組織化學技術檢測各組腫瘤組織中CD31標記的微血管密度（MVD）及VEGF、CD40蛋白表達，并采用圖像分析系統(tǒng)檢測VEGF及CD40的平均光密度。結果：（1）3組裸鼠移植瘤組織切片經病理檢查證實為喉鱗癌，并且在實驗期內15只裸鼠全部存活，無一死亡。（2）免疫組織化學SAP法檢測裸鼠移植瘤MVD，實驗組MVD為（11.33±1.86），IgG對照組為（15.92±2.17），PBS對照組為（16.50±2.35），實驗組與兩個對照組比較MVD顯著下降，經統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（3）用免疫組織化學SABC法檢測裸鼠移植瘤組織中VEGF、CD40蛋白的表達，實驗組VEGF蛋白表達的平均光密度值為（0.216±0.013），IgG對照組為（0.362±0.015），PBS對照組為（0.377±0.018），實驗組與兩個對照組相比VEGF蛋白表達明顯下降，經統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（4）實驗組CD40蛋白表達的平均光密度值為（0.171±0.013），IgG對照組為（0.233±0.013），PBS對照組為（0.237±0.014），實驗組較兩個對照組CD40蛋白表達明顯下降，經統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。（5）實驗組MVD與VEGF蛋白的表達呈正相關（r=0.713,P=0.009），且MVD與CD40蛋白表達也呈正相關（r=0.791，P=0.006）。IgG組MVD與VEGF蛋白的表達呈正相關（r=0.637,P=0.031），MVD與CD40蛋白表達也呈正相關（r=0.718，P=0.027）。PBS組MVD與VEGF蛋白的表達呈正相關（r=0.729,P=0.035），MVD與CD40蛋白表達也呈正相關（r=0.531，P=0.042）。結論：（1）抗人IgM抗體可以有效抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤的MVD，即對移植瘤的血管生成有明顯的抑制作用。（2）抗人IgM抗體可以抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤VEGF蛋白表達。（3）抗人IgM抗體可以抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤CD40蛋白表達。（4）抗人IgM抗體抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤血管生成的機制可能與抑制VEGF和CD40蛋白表達有關。（5）抗人IgM抗體抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠成瘤的機制可能與其抑制裸鼠移植瘤血管生成有關。（6）抗人IgM抗體有可能成為喉癌治療中一個新的藥物靶點，對IgM異位表達進行深入研究可以為喉鱗癌預防和治療提供新的思路和方向。
【圖文】：

圖 1 實驗 組 M VD （ SP × 4 00 ） 圖 2 I gG 對 照組 M VD （S P × 4 00 ） Fi g1 Th e e xp r e s s io n of mi c r ov e s se l s i n Fi g2 Th e e xp r e s s io n of mi c r ov e s se l s i ne xp e r im e n t a l gr ou p ( SP × 4 00 ) c on t ro l gr ou p of I g G ( SP × 4 00 ) 圖 3 PB S 對照 組 M VD （S P × 4 00 ） 圖 4 實驗 組 VE G F 表達 （ S P × 4 00 ） Fi g3 Th e e xp r e s s io n of mi c r o ve s se l s i n Fi g4 Th e e xp r e s s io n of VE G F p r ot ei n i nc on t ro l gr ou p of PB S ( SP × 4 00 ) e xp e r im e n t a l gr ou p (S P ×4 00 )

圖 1 實驗 組 M VD （ SP × 4 00 ） 圖 2 I gG 對 照組 M VD （S P × 4 00 ） Fi g1 Th e e xp r e s s io n of mi c r ov e s se l s i n Fi g2 Th e e xp r e s s io n of mi c r ov e s se l s i ne xp e r im e n t a l gr ou p ( SP × 4 00 ) c on t ro l gr ou p of I g G ( SP × 4 00 ) 圖 3 PB S 對照 組 M VD （S P × 4 00 ） 圖 4 實驗 組 VE G F 表達 （ S P × 4 00 ） Fi g3 Th e e xp r e s s io n of mi c r o ve s se l s i n Fi g4 Th e e xp r e s s io n of VE G F p r ot ei n i nc on t ro l gr ou p of PB S ( SP × 4 00 ) e xp e r im e n t a l gr ou p (S P ×4 00 )
【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R739.65

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本文編號：2579221