發(fā)布時間：2020-02-13 18:47

【摘要】：目的：喉癌是來源于喉黏膜上皮組織的惡性腫瘤，最常見的為喉鱗狀細胞癌，約占全身惡性腫瘤的5.7%-7.6%，近年來其發(fā)病率逐漸增多。目前喉癌的治療方式仍以手術(shù)為主，輔以放、化療，雖然近年來原有的治療方法不斷改善，但是喉癌的治療效果仍不理想，其5年生存率并未明顯提高。隨著各種生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，人們正積極尋找新的治療方式和新的藥物來治療喉癌。近年來許多學(xué)者發(fā)現(xiàn)一些上皮來源的惡性腫瘤中存在免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）的表達，這一現(xiàn)象已成為腫瘤免疫研究的一個熱點，并且可能為腫瘤的治療提供一個新的方向。腫瘤血管生成與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而促血管生成因子的表達則是腫瘤血管生成的重要因素。本實驗通過研究抗人IgM抗體對喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤微血管密度（microvesseldensity,MVD）以及血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)、腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor，TNF)受體超家族成員CD40蛋白表達的影響，以探討抗人IgM抗體抗腫瘤血管生成的作用和可能的機制，從而為抗人IgM抗體應(yīng)用于喉鱗癌的治療提供理論和實驗依據(jù)。方法：在本實驗小組的前期研究[1]中我們已經(jīng)成功建立了喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤模型，將15只裸鼠隨機分為實驗組、IgG對照組和PBS對照組。實驗組移植瘤內(nèi)注射抗人IgM抗體，，1.5mg/只，分五次注射，每3天一次；IgG組移植瘤內(nèi)注射羊IgG，注射量與注射方法與實驗組相同；PBS組移植瘤內(nèi)注射PBS液，注射量與注射方法與實驗組相同。觀察裸鼠的生長情況，最后一次用藥后3天，處死裸鼠，取出移植瘤體，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測各組腫瘤組織中CD31標記的微血管密度（MVD）及VEGF、CD40蛋白表達，并采用圖像分析系統(tǒng)檢測VEGF及CD40的平均光密度。結(jié)果：（1）3組裸鼠移植瘤組織切片經(jīng)病理檢查證實為喉鱗癌，并且在實驗期內(nèi)15只裸鼠全部存活，無一死亡。（2）免疫組織化學(xué)SAP法檢測裸鼠移植瘤MVD，實驗組MVD為（11.33±1.86），IgG對照組為（15.92±2.17），PBS對照組為（16.50±2.35），實驗組與兩個對照組比較MVD顯著下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（3）用免疫組織化學(xué)SABC法檢測裸鼠移植瘤組織中VEGF、CD40蛋白的表達，實驗組VEGF蛋白表達的平均光密度值為（0.216±0.013），IgG對照組為（0.362±0.015），PBS對照組為（0.377±0.018），實驗組與兩個對照組相比VEGF蛋白表達明顯下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（4）實驗組CD40蛋白表達的平均光密度值為（0.171±0.013），IgG對照組為（0.233±0.013），PBS對照組為（0.237±0.014），實驗組較兩個對照組CD40蛋白表達明顯下降，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。（5）實驗組MVD與VEGF蛋白的表達呈正相關(guān)（r=0.713,P=0.009），且MVD與CD40蛋白表達也呈正相關(guān)（r=0.791，P=0.006）。IgG組MVD與VEGF蛋白的表達呈正相關(guān)（r=0.637,P=0.031），MVD與CD40蛋白表達也呈正相關(guān)（r=0.718，P=0.027）。PBS組MVD與VEGF蛋白的表達呈正相關(guān)（r=0.729,P=0.035），MVD與CD40蛋白表達也呈正相關(guān)（r=0.531，P=0.042）。結(jié)論：（1）抗人IgM抗體可以有效抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤的MVD，即對移植瘤的血管生成有明顯的抑制作用。（2）抗人IgM抗體可以抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤VEGF蛋白表達。（3）抗人IgM抗體可以抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤CD40蛋白表達。（4）抗人IgM抗體抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤血管生成的機制可能與抑制VEGF和CD40蛋白表達有關(guān)。（5）抗人IgM抗體抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠成瘤的機制可能與其抑制裸鼠移植瘤血管生成有關(guān)。（6）抗人IgM抗體有可能成為喉癌治療中一個新的藥物靶點，對IgM異位表達進行深入研究可以為喉鱗癌預(yù)防和治療提供新的思路和方向。
【圖文】：

圖 1 實驗 組 M VD （ SP × 4 00 ） 圖 2 I gG 對 照組 M VD （S P × 4 00 ） Fi g1 Th e e xp r e s s io n of mi c r ov e s se l s i n Fi g2 Th e e xp r e s s io n of mi c r ov e s se l s i ne xp e r im e n t a l gr ou p ( SP × 4 00 ) c on t ro l gr ou p of I g G ( SP × 4 00 ) 圖 3 PB S 對照 組 M VD （S P × 4 00 ） 圖 4 實驗 組 VE G F 表達 （ S P × 4 00 ） Fi g3 Th e e xp r e s s io n of mi c r o ve s se l s i n Fi g4 Th e e xp r e s s io n of VE G F p r ot ei n i nc on t ro l gr ou p of PB S ( SP × 4 00 ) e xp e r im e n t a l gr ou p (S P ×4 00 )

圖 1 實驗 組 M VD （ SP × 4 00 ） 圖 2 I gG 對 照組 M VD （S P × 4 00 ） Fi g1 Th e e xp r e s s io n of mi c r ov e s se l s i n Fi g2 Th e e xp r e s s io n of mi c r ov e s se l s i ne xp e r im e n t a l gr ou p ( SP × 4 00 ) c on t ro l gr ou p of I g G ( SP × 4 00 ) 圖 3 PB S 對照 組 M VD （S P × 4 00 ） 圖 4 實驗 組 VE G F 表達 （ S P × 4 00 ） Fi g3 Th e e xp r e s s io n of mi c r o ve s se l s i n Fi g4 Th e e xp r e s s io n of VE G F p r ot ei n i nc on t ro l gr ou p of PB S ( SP × 4 00 ) e xp e r im e n t a l gr ou p (S P ×4 00 )
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R739.65

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本文編號：2579221