【摘要】：目的探討人源性臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)能否取代鼠源性3T3成纖維細(xì)胞,用于體外擴(kuò)增角膜緣干細(xì)胞(limbal stem cells,LSCs)并維持其干細(xì)胞特性。方法體外培養(yǎng)HUCMSCs,并行成脂誘導(dǎo)、成骨誘導(dǎo),流式細(xì)胞術(shù)檢測HUCMSCs相關(guān)標(biāo)志物CD31、CD45、CD90的表達(dá)情況;0ug/ml、1ug/ml、2ug/ml、4ug/ml、6ug/ml、8ug/ml濃度的絲裂霉素C預(yù)處理臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,MTT法選擇能維持HUCMSCs活性穩(wěn)定的最低藥物濃度;原代培養(yǎng)兔LSCs,并與經(jīng)過絲裂霉素C作用過的HUCMSCs、NIH-3T3細(xì)胞共培養(yǎng),待形成LSCs克隆團(tuán)后,拍攝并觀察各組間LSCs克隆團(tuán)的形態(tài),計數(shù)各培養(yǎng)皿克隆團(tuán)數(shù)目并比較其克隆形成率(CFE);免疫熒光染色法檢測并比較各組間LSCs克隆團(tuán)的ABCB5、IPO13和CK3/12表達(dá)情況,從而從維持干細(xì)胞特性和增殖力兩個方面,研究HUCMSCs能否成為取代鼠源性3T3成纖維細(xì)胞的理想滋養(yǎng)層。結(jié)果體外培養(yǎng)的HUCMSCs均質(zhì)性良好,經(jīng)過成脂和成骨誘導(dǎo)后,該細(xì)胞具備分化成脂肪、骨細(xì)胞的潛能;HUCMSCs可高表達(dá)CD90細(xì)胞黏附分子,陽性率為88.2%,不表達(dá)造血細(xì)胞CD45標(biāo)志物,陽性率為0.2%,亦不表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物CD31,陽性率為0.4%,以上結(jié)果均可說明培養(yǎng)的HUCMSCs具備良好的間充質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)特性;MTT法檢測經(jīng)過不同濃度絲裂霉素C預(yù)處理HUCMSCs后的細(xì)胞活性,能維持臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞活性穩(wěn)定的最低絲裂霉素C濃度為4ug/ml;與兔角膜緣干細(xì)胞共培養(yǎng)8天后,顯微鏡下可觀察到兩種飼養(yǎng)細(xì)胞均可培養(yǎng)出較大的角膜緣干細(xì)胞克隆團(tuán),其中3T3飼養(yǎng)組的角膜緣干細(xì)胞排列更加致密、緊促,HUMSCs、NIH-3T3飼養(yǎng)組以及無飼養(yǎng)層組LSCs的CFE為(4.10±0.56)%、(4.67±0.76)%、(0.83±0.35)%,各個實驗組間存在明顯差異(F=37.898,P0.01);臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞飼養(yǎng)組與NIH-3T3飼養(yǎng)組CFE差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.19,P0.05);臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、NIH-3T3飼養(yǎng)組與無飼養(yǎng)細(xì)胞組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(t=6.87、8.06,均為P0.01)。免疫熒光化學(xué)檢測兩種飼養(yǎng)層LSCs克隆團(tuán)標(biāo)志物,ABCB5、IPO13均呈高表達(dá),CK3/12呈低表達(dá),其中3T3飼養(yǎng)組中表達(dá)CK3/12的細(xì)胞量明顯多于臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞組,其余干細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)情況在兩飼養(yǎng)組中無顯著差異。結(jié)論臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞能擴(kuò)增兔角膜緣干細(xì)胞并維持其干細(xì)胞特性,在角膜緣干細(xì)胞克隆形成率的形成上及對角膜緣干細(xì)胞未分化狀態(tài)的維持上與3T3飼養(yǎng)組均無差異。相較于3T3飼養(yǎng)層,其促進(jìn)角膜緣干細(xì)胞增殖的能力稍弱,而維持角膜緣干細(xì)胞特性的能力則稍強(qiáng)。因此臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞可以作為替代鼠源性3T3成纖維細(xì)胞的理想飼養(yǎng)層體外培養(yǎng)角膜緣干細(xì)胞。
【圖文】：

圖 1 HUCMSCs 細(xì)胞形態(tài) A：第 2 代 HUCMSCs（×100）B：第 4 代 HUCMSCs (×50)AAB圖 2 HUCMSCs 成骨、成脂誘導(dǎo)鑒定 A: HUCMSCs 成骨誘導(dǎo)第 20 天（×200） B：HUCMSCs 成脂誘導(dǎo)第 10 天（×400）

臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對角膜緣干細(xì)胞干性維持和增殖力影響的研究附圖Photos圖 1 HUCMSCs 細(xì)胞形態(tài) A：第 2 代 HUCMSCs（×100）B：第 4 代 HUCMSCs (×50)A BA
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R77

【參考文獻(xiàn)】

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5 劉玉芬;史晶;崔琴;謝瑞花;吳春艷;嚴(yán)向芳;;球后注射臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的護(hù)理[J];護(hù)理學(xué)雜志;2013年14期

6 管英華;謝揚(yáng)虎;魏曉巍;李玉云;;臍帶源性和臍血源性間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)方法的比較[J];中華全科醫(yī)學(xué);2011年09期

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8 肖莉;蘇敏;石清明;;兔角膜緣干細(xì)胞體外培養(yǎng)方法的研究[J];西南國防醫(yī)藥;2010年03期

9 李強(qiáng);馬蕾;;增齡對兔角膜緣干細(xì)胞標(biāo)志物ABCG2表達(dá)的影響[J];山西醫(yī)藥雜志;2009年07期

10 杜振宗;任華;張超紀(jì);宋劍非;鄭民;李牧;;成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、鑒定和生物學(xué)特性[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年43期

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2 沈培清;以兔淺層角膜基質(zhì)為載體體外培養(yǎng)角膜緣上皮細(xì)胞深低溫保存后生物學(xué)活性研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

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本文編號：2573210