【摘要】：目的 1、觀察糖基化終末產(chǎn)物對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞骨架重構(gòu)、遷移能力的影響 2、觀察膜聯(lián)蛋白A2對(duì)糖基化終末產(chǎn)物培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞骨架重構(gòu)、遷移能力變化的影響 3、觀察糖基化終末產(chǎn)物對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞膜聯(lián)蛋白A2表達(dá)的影響 方法 第一部分： 建立人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)模型，應(yīng)用siRNA技術(shù)干擾膜聯(lián)蛋白A2的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)分正常組（葡萄糖濃度為25mmol L~(-1)的高糖型DMEM）、陰性干擾組（controlsiRNA預(yù)干擾HUVEC，繼用高糖型DMEM）及陽(yáng)性干擾組（ANXA2siRNA預(yù)干擾HUVEC，繼用高糖型DMEM），應(yīng)用Western Blot驗(yàn)證干擾效果。 第二部分： 實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步分正常組（葡萄糖濃度為25mmol L~(-1)的高糖型DMEM）、BSA組（高糖型DMEM，另含0.2g L~(-1)BSA）、AGE-BSA組（高糖型DMEM，另含0.2g L~(-1)AGE-BSA）、陰性干擾組（control siRNA預(yù)干擾HUVEC，繼用高糖型DMEM，另含0.2g L~(-1)AGE-BSA）及陽(yáng)性干擾組（ANXA2siRNA預(yù)干擾HUVEC，繼用高糖型DMEM，另含0.2g L~(-1)AGE-BSA）。應(yīng)用FITC-鬼筆環(huán)肽染色結(jié)合熒光顯微鏡觀察各組中細(xì)胞骨架排布的變化，劃痕法觀察各組中細(xì)胞遷移能力的變化。 第三部分： 應(yīng)用免疫沉淀及Western Blot觀察正常組（葡萄糖濃度為25mmol L~(-1)的高糖型DMEM）、BSA組（高糖型DMEM，另含0.2g L~(-1)BSA）及AGE-BSA組（高糖型DMEM，另含0.2g L~(-1)AGE-BSA）中ANXA2及磷酸化ANXA2的表達(dá)。應(yīng)用單因素方差分析LSD法分析上述數(shù)據(jù)。 結(jié)果 第一部分： Western Blot結(jié)果表明轉(zhuǎn)染完成后正常組、陰性干擾組及陽(yáng)性干擾組ANXA2蛋白的表達(dá)量分別為（1.170±0.027）、（1.182±0.037）及（0.676±0.053），前兩者之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（LSD_(正常,陰性)=-0.013，，P_(正常,陰性)=0.7130.05），陽(yáng)性干擾組同前兩者相比，ANXA2表達(dá)量減少有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（LSD_(正常,陽(yáng)性)=0.494，P_(正常,陽(yáng)性)=0.0000.05；LSD_(陰性,陽(yáng)性)=0.506，P_(陰性,陽(yáng)性)=0.0000.05）。 第二部分： 分組處理24h后FITC-鬼筆環(huán)肽染色觀察正常組、BSA組、AGE-BSA組、陰性干擾組及陽(yáng)性干擾組細(xì)胞骨架，前兩者骨架排布無(wú)明顯差異，應(yīng)力纖維均勻且稀疏；AGE-BSA組同前兩者相比，應(yīng)力纖維聚集且致密；陰性干擾組同AGE-BSA組相比，骨架排布無(wú)明顯差異，而陽(yáng)性干擾組的骨架則回至稀疏均勻排布。 分組處理后24h，正常組、BSA組、AGE-BSA組、陰性干擾組及陽(yáng)性干擾組遷移入劃痕內(nèi)的細(xì)胞數(shù)分別為（153±12）、（143±16）、（192±8）、（176±6）及（142±14），AGE-BSA組、陰性干擾組同正常組、BSA組及陽(yáng)性干擾兩兩相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義增多，余分組間比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（LSD_(正常, BSA)=10.000，P_(正常, BSA)=0.3310.05；LSD_(正常, AGE-BSA)=-39.000，P_(正常, AGE-BSA)=0.0030.05；LSD_(正常,陰性)=-23.000，P_(正常,陰性)=0.0410.05；LSD_(正常,陽(yáng)性)=11.667，P_(正常,陽(yáng)性)=0.2610.05；LSD_(BSA, AGE-BSA)=-49.000，P_(BSA, AGE-BSA)=0.0010.05；LSD_(BSA,陰性)=-33.000，P_(BSA,陰性)=0.0070.05；LSD_(BSA,陽(yáng)性)=1.667，P_(BSA,陽(yáng)性)=0.8680.05；LSD_(AGE-BSA,陰性)=16.000，P_(AGE-BSA,陰性)=0.1330.05；LSD_(AGE-BSA,陽(yáng)性)=50.667，P_(AGE-BSA,陽(yáng)性)=0.0000.05；LSD_(陽(yáng)性,陰性)=34.667，P_(陽(yáng)性,陰性)=0.0050.05)。 第三部分： 免疫沉淀及Western Blot結(jié)果表明，分組處理后，正常組、BSA組及AGE-BSA組總ANXA2蛋白的表達(dá)量分別為（1.011±0.014）、（0.939±0.089）及（1.064±0.119），三者之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F_(ANXA2)=1.596，P=0.2780.05）。而磷酸化ANXA2蛋白的表達(dá)量分別為（0.942±0.057）、（0.945±0.032）及（1.118±0.095），前兩者比較亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而AGE-BSA組同前兩者比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義增多（LSD_(正常,BSA)=-0.002，P_(正常,BSA)=0.9670.05；LSD_(正常,AGE-BSA)=-0.176，P_(正常,AGE-BSA)=0.0180.05；LSD_(BSA,AGE-BSA)=-0.173，P_(BSA,AGE-BSA)=0.0190.05）。 結(jié)論 1、糖基化終末產(chǎn)物可促使人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞骨架重構(gòu)，細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)。 2、膜聯(lián)蛋白A2在糖基化終末產(chǎn)物重構(gòu)細(xì)胞骨架，促使細(xì)胞遷移過(guò)程中發(fā)揮作用。 3、膜聯(lián)蛋白A2可能通過(guò)酪氨酸磷酸化發(fā)揮上述作用。
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R774.1

【參考文獻(xiàn)】

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1 林淑玲;陳祥彪;;2型糖尿病患者視網(wǎng)膜病變長(zhǎng)期隨訪觀察[J];中華眼底病雜志;2006年01期

本文編號(hào)：2570040