【摘要】：目的確定國人常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性(autosomal recessive retinitis pigmentosa, ARRP)及散發(fā)型視網(wǎng)膜色素變性(sporadic retinitis pigmentosa, SRP)的致病基因及突變形式；分析ARRP/SRP患者的臨床特征；探索基因型與臨床表型的關(guān)系。 方法收集2009-2012年在北京協(xié)和醫(yī)院眼科就診并確診為ARRP/SRP的患者。1.臨床研究：記錄病史及家族史,行眼科一般檢查(視力、屈光度、眼前節(jié)及散瞳眼底檢查)及特殊檢查(眼底照相、視野、視網(wǎng)膜電圖(electroretinogram, ERG)及相干光斷層掃描(optical coherence tomography,OCT))檢查。2.遺傳學(xué)研究：采取患者靜脈血5-8ml,同時收集同期正常人作為對照,提取外周血DNA。將部分患者的DNA送交華大基因研究中心,對致病基因行外顯子捕獲,隨后應(yīng)用Hiseq2000第二代高通量測序平臺測序,得到可疑突變,應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction, PCR)擴增并直接測序加以驗證。以上述結(jié)果為指導(dǎo),在收集的ARRP/SRP患者中,對RHO、MERTK、 PDE6B、CERKL、RP1、USH2A、 EYS基因的相應(yīng)外顯子及外顯子-內(nèi)含子接頭處進行PCR擴增,直接測序確定致病突變。發(fā)現(xiàn)DNA序列改變后,查詢文獻(xiàn)及遺傳學(xué)數(shù)據(jù)庫,排除其為已知正常多態(tài)位點的可能,并明確是否為已報道突變。若為新發(fā)突變,對至少100個(200條染色體)無血緣關(guān)系的正常人進行該位點的擴增、測序,以排除未知群體多態(tài)性的可能。 結(jié)果1.共收集110例ARRP/SRP患者,ARRP21例,SRP89例；108例為雙眼發(fā)病,2例單眼發(fā)病。72.5%的患者在20歲前出現(xiàn)夜盲,就診時視力介于無光感-1.5,平均約0.2。36.8%的患眼合并后囊下白內(nèi)障。眼底表現(xiàn)：視乳頭蠟黃,視網(wǎng)膜血管變細(xì),視網(wǎng)膜不同程度萎縮；黃斑形態(tài)可大致正常、可萎縮；視網(wǎng)膜可見不規(guī)則色素團塊/骨細(xì)胞樣/椒鹽樣/灰白小顆粒的色素沉著,主要分布于中周部及周圍視網(wǎng)膜。OCT：中心凹神經(jīng)上皮薄變,IS/OS層信號缺失是最主要的病變特征,中心凹神經(jīng)上皮平均厚度為125.15±39.68μm,明顯低于正常人群(P0.05)；27.2%的患眼伴發(fā)視網(wǎng)膜/黃斑前膜；部分患者合并神經(jīng)上皮水腫及黃斑囊腔樣改變。ERG：98.5%的患眼表現(xiàn)為視桿反應(yīng)熄滅型,34.1%為視錐反應(yīng)熄滅型。2.共明確了18例患者的致病基因：MERTK基因11例、PDE6B基因3例、USH2A基因、CERKL基因、RP1基因、EYS基因各1例。17例患者存在單一雜合突變(MERTK基因8例,PDE6B基因1例,USH2A基因2例,EYS基因3例,RHO基因3例)。①MERTK基因：突變率6.9%。共發(fā)現(xiàn)18種致病突變,1種錯義突變,1種無義突變,6種移碼突變,3種已報道,其中225delA, Gly76Glu, fsX3這一移碼突變在4例患者6個DNA單倍體中出現(xiàn),突變率較高。2例單眼發(fā)病的RP患者均存在MERTK基因突變。②PDE6B基因：發(fā)現(xiàn)5種突變,3種錯義突變,2種移碼突變,均為未報突變。③USH2A基因：共發(fā)現(xiàn)4種突變,2種錯義突變,移碼突變、剪切突變各一種,3種為未報突變。④EYS基因：共發(fā)現(xiàn)5種突變,2種錯義突變,無義突變、移碼突變各一種,均未報道。⑤RP1基因：共發(fā)現(xiàn)2種移碼突變,未報道。⑥CERKL基因：一種移碼突變,未報道。⑦RHO基因：一種錯義突變,未報道。 結(jié)論1.臨床特征：ARRP/SRP多于少年起病。白內(nèi)障是常見的眼前節(jié)異常；視網(wǎng)膜色素上皮遷移是RP的普遍體征；黃斑損害常見,以神經(jīng)上皮薄變?yōu)橹?視網(wǎng)膜前可見膠質(zhì)增生形成視網(wǎng)膜/黃斑前膜；ERG是重要的視功能檢查,視桿反應(yīng)呈熄滅型是其主要電生理特征。2.遺傳學(xué)：確定了18例患者的致病基因,發(fā)現(xiàn)了位于7個致病基因內(nèi)的36種突變。MERTK基因突變率較高(6.9%),與歐美人群存在較大差異,單眼發(fā)病的RP可能與MERTK基因突變相關(guān)。3.RP具有高度的臨床及遺傳異質(zhì)性,相同的臨床表型可由多種基因突變所致,同一種基因突變臨床表型可有差異。對基因型-表型關(guān)系的研究仍任重道遠(yuǎn)。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R774.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張馨方;盛迅倫;;視網(wǎng)膜色素變性的相關(guān)基因研究進展[J];國際眼科雜志;2006年03期

2 劉晶,肖林,王薇;常染色體隱性遺傳視網(wǎng)膜色素變性家系視紫紅質(zhì)基因突變的檢測分析[J];中華眼底病雜志;2004年03期

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本文編號：2556203