【摘要】：聽力損失是世界范圍內(nèi)最常見的導(dǎo)致言語交流障礙的疾病,據(jù)統(tǒng)計(jì),在新生兒中聽力損失的發(fā)病率約為1‰,5歲時(shí)升為3.5‰,青少年時(shí)期則增加到5‰。聽力損失的原因復(fù)雜,其中遺傳因素約占60%以上。遺傳性耳聾是聽力損失的常見類型,是典型的遵循孟德爾遺傳規(guī)律的單基因疾病,可分為綜合征型遺傳性耳聾(約占30%)和非綜合征型遺傳性耳聾(約占70%)。對(duì)耳聾基因的探索是研究遺傳性耳聾的關(guān)鍵所在,目前已發(fā)現(xiàn)43個(gè)綜合征型耳聾基因和99個(gè)非綜合征型耳聾基因(http://hereditaryhearingloss.org/2017-3-17)。其中有多個(gè)基因可同時(shí)引起常染色體顯性遺傳性非綜合征型耳聾和常染色體隱性遺傳性非綜合征型耳聾,TMC1即其中之一。TMC1于2002年首次被報(bào)道其多個(gè)突變可導(dǎo)致顯性遺傳性聾(DFNA36)和隱性遺傳性聾(DFNB7/11),由此開啟了對(duì)TMC1突變致聾的全面研究。迄今為止,世界范圍內(nèi)約發(fā)現(xiàn)上百個(gè)以TMC1為致病基因的耳聾家系,其中含49種DFNB7/11型突變和4種DFNA36型突變。TMC1是繼GJB2,SLC26A4,MYO15A,TOF和CDH23后第6大常見的耳聾基因,在巴基斯坦、伊朗、北美、歐洲的耳聾家系病例中占3%～8%不等。在中國目前僅報(bào)道過9個(gè)與TMC1突變相關(guān)的耳聾家系,對(duì)于TMC1在中國耳聾人群中的研究提供的數(shù)據(jù)有限。本研究立足于國家基因庫聾病分庫豐富的遺傳性耳聾資源,采用新一代測(cè)序技術(shù)及Sanger測(cè)序技術(shù),對(duì)4個(gè)耳聾家系進(jìn)行耳聾基因的鑒定,取得了一定的成果。目的:旨在應(yīng)用新一代測(cè)序技術(shù),在4個(gè)中國遺傳性耳聾家系中,鑒定TMC1的致病突變,并進(jìn)行基因型-表型關(guān)聯(lián)分析。方法:以我院就診的4個(gè)中國耳聾家系為研究對(duì)象,收集臨床資料(病史、癥狀體征、全身及�？企w格檢查、聽力學(xué)檢測(cè)、前庭功能及影像學(xué)檢查),進(jìn)行表型分析。選取患者與健康人的血液,提取DNA,進(jìn)行目標(biāo)區(qū)域捕獲及新一代測(cè)序,確定候選基因突變。用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、Sanger測(cè)序在家系內(nèi)成員及正常人群進(jìn)行驗(yàn)證,分析突變的致病性,確定致病突變。結(jié)果:1,本研究在4個(gè)家系中鑒定了 4種TMC1的不同突變,a), c.797TC(p.1266T)為純合的隱性突變,患者表現(xiàn)為先天性重度感音神經(jīng)性聾,父母表型正常。b), c.1714GA(p.D572N)是已知的顯性突變,是已知致病突變?cè)趪鴥?nèi)耳聾人群的再現(xiàn)。主要表現(xiàn)為高頻首先受累漸進(jìn)累及全頻的遲發(fā)型聽力損失。c),c.2276GA(p.R759H )為非致病突變,是新發(fā)現(xiàn)的 SNP。d),c.1253TA(p.M418K)是與貝多芬小鼠同源的致病突變,其聽力學(xué)表現(xiàn)與2014年報(bào)道的中國1304號(hào)耳聾家系相仿。2, TMC1突變所致的耳聾患者均無前庭功能異常,影像學(xué)未見明顯異常改變。3,三種致病突變?cè)谇嘶蚪M數(shù)據(jù)庫中出現(xiàn)頻率為0,用Mutationtaster,SIFT和Polyphen2預(yù)測(cè)蛋白功能均為致病,三個(gè)突變位點(diǎn)在各個(gè)物種中較保守。結(jié)論:1,TMC1突變可導(dǎo)致先天性或語前的重度、極重度的常染色體隱性遺傳性聾(DFNB7/11),也可導(dǎo)致遲發(fā)性的漸進(jìn)性的高頻首先受損、逐漸累及全頻的常染色體顯性遺傳性聾(DFNA36),本研究中三個(gè)家系的臨床表型符合TMC1相關(guān)耳聾的特點(diǎn)。2,三個(gè)家系為TMC1不同突變而致病的,其中c.797TC為本研究新發(fā)現(xiàn)的DFNB7/11耳聾突變位點(diǎn);c. 1714GA是DFNA3 6耳聾最常見的突變位點(diǎn);c.1253TA與貝多芬(Beethoven)小鼠的突變是同源突變,這使得貝多芬小鼠成為研究該突變的理想工具。3, TMC1在國外報(bào)道較多,是第6位常見的致聾基因,但在中國人群中報(bào)道較少。本研究一方面確定了三個(gè)耳聾家系致聾基因及突變,另一方面也為中國人群的耳聾基因突變圖譜提供了參考依據(jù)。
【圖文】：

邐解放軍醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文邐逡逑材料和方法逡逑一、總體設(shè)計(jì)方案逡逑本研究擬采用新一代測(cè)序技術(shù)、生物信息分析、臨床表型－基因型分析及候選逡逑基因驗(yàn)證相結(jié)合的策略進(jìn)行遺傳性耳聾家系致病基因的鑒定，具體技術(shù)路線如下逡逑圖１－１：逡逑邐邋耳聾家系逡逑￣

四、耳聾基因捕獲測(cè)序及生物信息分析逡逑１．測(cè)序流程：包括樣品檢測(cè)、文庫構(gòu)建、基因芯片捕獲、上機(jī)高通量測(cè)序、逡逑生物信息分析和候選基因篩查（圖４－１）。生物信息分析分為兩部分：１）邋ＳＮＰ的逡逑判讀、分析；２）小片段的插入和缺失（ｉｎｓｅｒｔ邋ａｎｄ邋ｄｅｌｅｔｉｏｎ，，邋ＩｎＤｅｌ）的判讀、分析。逡逑對(duì)ＳＮＰ、ＩｎＤｅｌ，經(jīng)過頻率篩選、數(shù)據(jù)庫和文獻(xiàn)檢索、功能預(yù)測(cè)等步驟對(duì)變異進(jìn)行逡逑１５逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R764.43

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本文編號(hào)：2538169