【摘要】：目的 研究硫酸軟骨素（CS）在甘油冷凍保存角膜中對(duì)角膜內(nèi)皮細(xì)胞（CECs）的保護(hù)作用，并與透明質(zhì)酸鈉（SH）比較，探索不同條件下保存的角膜行穿透性角膜移植術(shù)后的效果，為臨床角膜保存和角膜移植的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法 獲取40只Wistar雌性大鼠80只角膜片采用隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為4組：正常對(duì)照組、硫酸軟骨素組(Ⅰ組)、透明質(zhì)酸鈉組(Ⅱ組）、單純甘油組(Ⅲ組），對(duì)照組為新鮮角膜，不保存直接行下一步實(shí)驗(yàn)，Ⅰ組和Ⅱ組分別在內(nèi)皮面黏附1%CS和1%SH后放入甘油中冷凍保存，Ⅲ組角膜直接裝入甘油中冷凍保存。2個(gè)月后，對(duì)所有保存的角膜片行CECs臺(tái)盼蘭-茜素紅染色檢測(cè)活性率，電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)，并行同種異體穿透性角膜移植術(shù)（PKP），裂隙燈顯微鏡記錄各組大鼠角膜排斥反應(yīng)指數(shù)（RI）和植片存活時(shí)間（MST）、蘇木精-伊紅染色觀察移植術(shù)后植片新生血管和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)程度，免疫組化法檢測(cè)術(shù)后第14d植片中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGF-β1）和細(xì)胞間黏附因子-1（ICAM-1）的表達(dá)水平，以進(jìn)一步檢驗(yàn)各組移植術(shù)后的效果。 結(jié)果 正常對(duì)照組大鼠角膜片CECs結(jié)構(gòu)正常，未見到藍(lán)染細(xì)胞，CS處理組偶見細(xì)胞藍(lán)染，SH處理組和單純甘油組藍(lán)染CECs數(shù)增加。與CS處理組比較，SH處理組和單純甘油組的細(xì)胞密度和活性率均明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。CECs超微結(jié)構(gòu)觀察顯示，CS處理組僅表現(xiàn)為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的輕度腫脹，而SH處理組和單純甘油組細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹程度較重。CS處理組術(shù)后14d時(shí)植片淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)及新生血管明顯少于SH處理組和單純甘油組。臨床評(píng)分表明，與SH處理組和單純甘油組比較，CS處理組的RI明顯降低而MST明顯延長(zhǎng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。免疫組織化學(xué)顯示，CS處理組植片中TGF-β1的表達(dá)量明顯高于SH處理組和單純甘油組（P＜0.05），而ICAM-1的表達(dá)量低于SH處理組和單純甘油組（P＜0.05），CS處理組植片中TGF-β1和ICAM-1的表達(dá)量接近于對(duì)照組表達(dá)水平。 結(jié)論 CS對(duì)甘油冷凍保存的CECs具有保護(hù)和穩(wěn)定作用，能顯著增強(qiáng)甘油冷凍保存的效果，應(yīng)用在動(dòng)物穿透性角膜移植手術(shù)中可獲得良好的術(shù)后效果并優(yōu)于SH；CS應(yīng)用于角膜長(zhǎng)期保存，將為臨床角膜移植手術(shù)提供更為優(yōu)質(zhì)的供體材料。
【圖文】：

圖 1 對(duì)照組保存后 CECs 染色 圖 2 CS 組保存后 CECs 染色（×200） （×200）正常對(duì)照組染色后可見細(xì)胞呈規(guī)則 CS 組細(xì)胞形態(tài)正常，，多呈規(guī)則六邊六邊形，邊界清晰，細(xì)胞連接緊密， 形，邊界清晰，細(xì)胞連接緊密，個(gè)未見細(xì)胞核藍(lán)染。 別細(xì)胞質(zhì)膜破裂及核藍(lán)染。

CS組保存后CECs染色（×200）（×200）
【學(xué)位授予單位】：遼寧醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R779.65

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2528524