【摘要】：【目的】探討雷公藤內(nèi)酯醇(triptolide，T10)對(duì)缺氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生血管形成中的作用。 【方法】1、建立人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的缺氧培養(yǎng)模型，在上清液中加入T10，用MTT檢測(cè)的方法，確定最佳T10抑制濃度。正常組細(xì)胞置于5%的二氧化碳恒溫環(huán)境中，用RT-PCR和Western blot檢測(cè)正常組、缺氧組及T10治療組細(xì)胞內(nèi)VEGF、ANXA2和t-PA的基因及蛋白表達(dá)水平。2、新生C57BL/6J小鼠96只隨機(jī)分為正常組、缺氧組與T10治療組，每組32只（64眼）。缺氧組與治療組于生后5天（P5）置于75%氧濃度環(huán)境中，P12返回正�？諝猸h(huán)境中，治療組小鼠給予腹腔注射T10，正常組始終置于正�？諝猸h(huán)境中。P17對(duì)正常組、缺氧組和治療組行異硫氰酸熒光素灌注造影、視網(wǎng)膜鋪片及病理切片，觀察視網(wǎng)膜新生血管生成情況；病理切片每只眼選取5張切片，雙盲法統(tǒng)計(jì)突破內(nèi)界膜細(xì)胞核數(shù)；應(yīng)用Real Time PCR分別檢測(cè)三組VEGFmRNA、ANXA2mRNA和t-PAmRNA表達(dá)水平。 【結(jié)果】1、T10的最佳抑制濃度為100nmol/L；治療組與缺氧組相比，降低了人臍靜脈細(xì)胞中VEGF、t-PA、PAI-1和ANXA2的基因和蛋白表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；治療組與正常組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、異硫氰酸熒光素灌注視網(wǎng)膜鋪片造影正常組小鼠在P17視網(wǎng)膜血管分布均勻，無(wú)異常改變。缺氧組小鼠在P17可見(jiàn)視網(wǎng)膜血管明顯迂曲、擴(kuò)張，灌注區(qū)與無(wú)灌注區(qū)交界處發(fā)現(xiàn)大量的新生血管叢、微血管瘤及滲出。治療組小鼠在P17未見(jiàn)視網(wǎng)膜大面積的無(wú)灌注區(qū)，滲漏及微動(dòng)脈瘤。視網(wǎng)膜病理切片：對(duì)P17小鼠突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核進(jìn)行計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)，正常組見(jiàn)到很少突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的細(xì)胞核數(shù)為1.05±0.28/片/眼；缺氧組小鼠中可見(jiàn)大量突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管，細(xì)胞核數(shù)為81.95±1.93/片/眼，治療組可見(jiàn)到少量突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的新生血管，細(xì)胞核數(shù)為42.25±1.16/片/眼，缺氧組和治療組差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，，治療組和正常組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、對(duì)正常組、缺氧組和治療組VEGFmRNA、ANXA2mRNA和t-PAmRNA相對(duì)表達(dá)水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，治療組與缺氧組表達(dá)水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，治療組與正常組的表達(dá)水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 【結(jié)論】1、T10對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖有抑制作用，可以降低臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中VEGF、ANXA2和t-PA的表達(dá)。2、缺氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜新生血管小鼠模型穩(wěn)定、可靠、重復(fù)性高，可做為研究視網(wǎng)膜新生血管疾病發(fā)病機(jī)制和防治方法的動(dòng)物模型。3、T10在視網(wǎng)膜新生血管形成中可以抑制VEGF、ANXA2和t-PA的表達(dá)。
【圖文】：

雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)缺氧誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜新生分析之后進(jìn)行 Bonferroni 檢驗(yàn)，不滿足方差行兩兩比較；結(jié)果用 x s表示，檢驗(yàn)水準(zhǔn) a建立與觀察O2 孵箱 37℃恒溫濕潤(rùn)條件下培養(yǎng) 48h，可見(jiàn)于缺氧培養(yǎng)箱（2%O2,5%CO2,93%N2,37℃）亡細(xì)胞；治療組為加入 100nmol/LT10 在缺氧底，可見(jiàn)漂浮的凋亡細(xì)胞。

第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文（二）缺氧狀態(tài)下的 HUVEC 細(xì)胞 VEGFmRNA 表達(dá)的變化曲線各組隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，HUVEC 細(xì)胞中 VEGFmRNA 表達(dá)水平逐漸增高，培養(yǎng) 24h-48h 之間，HUVEC 細(xì)胞中 VEGF 表達(dá)上升較快，而超過(guò) 48h 后 VEGF 表達(dá)上升逐步減緩，選取 48h 時(shí)間點(diǎn)進(jìn)一步行 RT-PCR 及 Western blot 檢測(cè)等后續(xù)操作（如圖 1 示）
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R774.1

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本文編號(hào)：2523591