【摘要】：目的：研究14-3-36基因在鼻咽癌細(xì)胞株HNE1和耐順鉑的鼻咽癌細(xì)胞株HNE1-DDP中的表達(dá)及其啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化情況,初步探討14-3-3σ基因與耐藥的關(guān)系。 方法：首先采用蛋白印跡法(Western Blotting)檢測(cè)H(?)NE1-DDP細(xì)胞與HNE1細(xì)胞14-3-36的表達(dá),并采用熒光定量PCR(Quantitative PCR,qPCR)檢測(cè)14-3-36基因的mRNA表達(dá)水平。然后利用甲基化抑制劑5-雜氮-2’-脫氧胞苷處理HNE1-DDP細(xì)胞,觀察不同濃度對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)及細(xì)胞周期的影響,并采用Western Blotting及qPCR分別檢測(cè)藥物干預(yù)前后14-3-36基因表達(dá)的改變。用Western Blotting檢測(cè)p53蛋白在HNE1及HNE1-DDP中的表達(dá),并采用亞硫酸氫鈉處理后測(cè)序法(Bisulfite genomic sequencing PCR)檢測(cè)14-3-36啟動(dòng)子區(qū)域CpG位點(diǎn)的甲基化情況。采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。 結(jié)果：較HNE1細(xì)胞,14-3-3σ蛋白及其mRNA、p53蛋白在HNE1-DDP細(xì)胞株中表達(dá)均明顯下降。經(jīng)過(guò)不同濃度的5-aza-2'-dC(0,1,5,10μmol/L)處理HNE1-DDP細(xì)胞后,細(xì)胞生長(zhǎng)曲線出現(xiàn)明顯差異,細(xì)胞活性抑制,細(xì)胞阻滯在S期和G2-M期。同時(shí),隨著藥物的處理,HNE1-DDP細(xì)胞的14-3-36蛋白和mRNA重新表達(dá)并逐漸上升。此外,親本細(xì)胞株HNE1、耐藥細(xì)胞株HNE1-DDP及處理后的細(xì)胞株中,14-3-3σ啟動(dòng)子區(qū)域的CpG位點(diǎn)幾乎均為非甲基化狀態(tài)。 結(jié)論：14-3-36下調(diào)與鼻咽癌耐藥相關(guān),提示14-3-36可能是鼻咽癌耐藥相關(guān)的蛋白。5-aza-2′-dC具有抑制鼻咽癌耐藥細(xì)胞株生長(zhǎng)、阻滯耐藥細(xì)胞株周期和上調(diào)14-3-36的作用,且14-3-36可能也參與了藥物的抑制作用。但在鼻咽癌耐藥細(xì)胞株HNE1-DDP中14-3-36表達(dá)下調(diào)可能不是由于其甲基化所致,而和抑瘤蛋白p53的表達(dá)下降有關(guān),但具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
[Abstract]:Objective: To study the expression of 14-3-36 gene in HNE1-DDP and its promoter region in nasopharyngeal carcinoma cell line HNE1 and cisplatin, and to investigate the relationship between 14-3-3 gene and drug resistance. Methods: The expression of H (?) NE1-DDP cells and HNE1 cells 14-3-36 was detected by Western Blotting, and the mRNA expression of 14-3-36 gene was detected by fluorescence quantitative PCR (qPCR). And then the HNE1-DDP cells were treated with a methylation inhibitor 5-hybrid nitrogen-2 '-donor cell to observe the effects of different concentrations on cell growth and cell cycle. The expression of 14-3-36 gene was detected by Western Blotting and qPCR, and the expression of p53 protein in HNE1 and HNE1-DDP was detected by Western Blotting. The methylation of the CpG sites in the promoter region of the 14-3-36 promoter was detected by the method of sodium bisulfite treatment. Analysis. Results: The higher HNE1 cells,14-3-3 mitogen and m After treatment of HNE1-DDP cells with different concentrations of 5-aza-2 '-dC (0,1,5,10. mu.mol/ L), the growth curves of the cells were significantly different, the cell activity was inhibited, and the cells were blocked in the S phase and the G2-M phase. The 14-3-36 protein and the mRNA of the HNE1-DDP cell were reexpressed and gradually increased. In addition, the CpG sites of the 14-3-3 gene promoter region of the parent cell strain HNE1, the resistant cell strain HNE1-DDP and the treated cell line were almost non-methyl. Conclusion:14-3-36 down-regulation and nasopharynx The expression of 5-aza-2-dC has the potential to inhibit the growth of the drug-resistant cell line of the nasopharyngeal carcinoma, block the cycle of the drug-resistant cell strain and the up-regulation of 14-3- The expression of 14-3-36 in the HNE1-DDP resistant cell line HNE1-DDP may not be due to its methylation, but the expression of the tumor-inhibiting protein p53 is decreased, but the specific mechanism is to be determined.
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R739.63

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本文編號(hào)：2509034