【摘要】：一、急性原發(fā)性閉角型青光眼患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量變化 目的：觀察急性原發(fā)性閉角型青光眼(acute primary angle-closure glaucoma, APACG)患者外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells, EPCs)數(shù)量的變化規(guī)律,探討EPCs在APACG患者眼壓升高導(dǎo)致視神經(jīng)損傷中的作用。 方法：采用隊(duì)列研究設(shè)計(jì),試驗(yàn)為前瞻性研究。選取天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院眼科確診的APACG患者30例為APACG組,健康體檢者20例為正常對(duì)照組。所有入選者取外周靜脈血2ml,經(jīng)反復(fù)離心過(guò)濾后,通過(guò)流式細(xì)胞儀鑒定EPCs,觀察APACG患者外周血EPCs數(shù)量的變化,并對(duì)其相關(guān)影響因素(視神經(jīng)損害程度、經(jīng)藥物治療后眼壓、空腹血糖、血脂、青光眼病程及有無(wú)心血管疾病)進(jìn)行分析。 結(jié)果：兩組患者間性別、年齡、血管危險(xiǎn)因素、血液生化指標(biāo)的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),APACG組患者眼壓明顯高于正常對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。外周血EPCs為CD34、CD133雙陽(yáng)性反應(yīng),APACG組及正常對(duì)照組外周血EPCs數(shù)量分別為(48±22)個(gè)/ml和(65±20)個(gè)/ml,兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004)。l期與3期視神經(jīng)損害者外周血EPCs數(shù)量分別為(60±19)個(gè)/ml和(34±7)個(gè)/ml,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=-3.015,P=0.002)。APACG組患者外周血EPCs數(shù)量與藥物治療后的平均眼壓在一定范圍內(nèi)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.835,P0.05),與空腹血糖水平、血脂水平、青光眼病程間均無(wú)明顯相關(guān)性(r=0.343,P=0.227：r=-0.203,P=0.419；r=0.198,P=0.610)。APACG組有心血管疾病與無(wú)心血管疾病患者間外周血EPCs計(jì)數(shù)分別為(56±22)個(gè)/ml和(35±15)個(gè)／ml,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.005)。 結(jié)論：APACG患者外周血EPCs數(shù)量較正常人明顯減少,提示青光眼發(fā)生發(fā)展的病理因素對(duì)外周血EPCs數(shù)量有一定影響。 二、大鼠高眼壓模型視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡及外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量的變化 目的：觀察大鼠高眼壓模型外周血EPCs數(shù)量及視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(Retinal ganglion cells, RGCs)凋亡的變化,探索EPCs在高眼壓視神經(jīng)損傷修復(fù)中的作用。 方法：采用多波長(zhǎng)激光532nm綠光光凝角鞏膜緣靜脈和上鞏膜靜脈的方法建立大鼠高眼壓模型,單眼造模。將100只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組20只、激光對(duì)照組(眼壓正常)30只和高眼壓模型組50只。對(duì)正常對(duì)照組20只、激光對(duì)照組制備成功后3天、7天、3周時(shí)(每組10只大鼠)及高眼壓模型組大鼠在造模其與EPCs數(shù)量變化的關(guān)系,探討HIF-lα、VEGF-A、SDF-1對(duì)EPCs動(dòng)員、招募的影響以及EPCs對(duì)血管內(nèi)皮功能的影響。 方法：將190只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組20只、激光對(duì)照組(眼壓正常)20只和高眼壓模型組150只。正常對(duì)照組10只、激光對(duì)照組10只及高眼壓模型組在造模成功后3天、7天、3周、2月、3月時(shí)(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)20只大鼠),行股動(dòng)脈放血10ml,離心后取血清,ELISA技術(shù)檢測(cè)外周血VEGF-A、SDF-1、NO及ET-1水平。正常對(duì)照組10只、激光對(duì)照組10只及高眼壓模型組在造模成功后3天、7天、3周、2月、3月時(shí)(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)10只大鼠),脫頸處死大鼠,摘除眼球取視網(wǎng)膜組織,Western blot技術(shù)檢測(cè)視網(wǎng)膜HIF-lα的蛋白水平。 結(jié)果： (1)HIF-1α蛋白在正常視網(wǎng)膜中呈低濃度表達(dá),眼壓升高3天表達(dá)明顯上升,7天時(shí)達(dá)到高峰,隨后有所下降,但仍高于正常對(duì)照組。 (2)正常對(duì)照組、大鼠高眼壓模型3天、7天、3周、2月、3月組外周血VEGF-A為84.89±4.89ng/L,59.24+6.37ng/L,58.36±5.68ng/L,54.98±5.91ng/L,59.99±5.12ng/L,64.78±5.94ng/L。與正常對(duì)照組相比，，眼壓升高外周血VEGF-A均明顯降低(P0.001)。 (3)正常對(duì)照組、大鼠高眼壓模型3天、7天、3周、2月、3月組外周血SDF-1為229.43±11.61pg/ml,218.34±11.33pg/ml,298.51±32.02pg/ml,294.16±11.90pg/ml,301.10±14.61pg/ml,307.49±20.46pg/ml。與正常對(duì)照組及眼壓升高3天相比,眼壓升高7天、3周、2月、3月外周血SDF-1均明顯升高(P0.001)。 (4)正常對(duì)照組、大鼠高眼壓模型3天、7天、3周、2月、3月組外周血NO為36.74±5.19μmol/L,32.87±4.30μmol/L,45.67±4.48μmo1/L,41.29±5.00μmol/L,41.04±5.15μmo1/L,41.45±4.82μmol/L。與正常對(duì)照組相比,眼壓升高3天外周血NO顯著降低(P=0.038),眼壓升高7天、3周、2月、3月外周血NO明顯升高(P0.05)。 (5)正常對(duì)照組、大鼠高眼壓模型3天、7天、3周、2月、3月組外周血ET-1為72.73±6.41ng/L,57.96±4.42n/L,70.86±12.14n/L,77.37±9.95n/L,76.57±5.85n/L,77.41±7.43n/L。與正常對(duì)照組相比,眼壓升高3天外周血ET-1顯著降低(P0.001)。 結(jié)論：眼壓升高使視網(wǎng)膜組織缺血、缺氧,HIF-lα表達(dá)升高,促進(jìn)骨髓EPCs的動(dòng)員,外周血VEGF-A水平降低,SDF-1水平升高,進(jìn)而促進(jìn)EPCs向缺血、缺氧的視網(wǎng)膜組織轉(zhuǎn)移,外周血EPCs、NO及ET-1呈時(shí)間依賴性變化。提示HIF-1α、VEGF-A、SDF-1可能通過(guò)參與EPCs的動(dòng)員和遷移,在高眼壓視神經(jīng)損傷修復(fù)過(guò)程中發(fā)揮作用,并對(duì)血管內(nèi)皮功能產(chǎn)生影響。 四、辛伐他汀對(duì)大鼠高眼壓模型RGCs凋亡、外周血EPCs數(shù)量及視網(wǎng)膜HIF-lα外周血及視網(wǎng)膜VEGF-A、SDF-1、NO、ET-1的影響 目的：觀察辛伐他汀對(duì)大鼠高眼壓模型眼壓、RGCs凋亡、外周血EPCs數(shù)量及視網(wǎng)膜HIF-lα、外周血及視網(wǎng)膜VEGF-A、SDF-1、NO、ET-1的影響,探索辛伐他汀促進(jìn)EPCs的動(dòng)員在青光眼視神經(jīng)損傷修復(fù)過(guò)程中的作用。 方法：將100只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(CON,10只)、高眼壓模型組(OH,30只)、高眼壓辛伐他汀干預(yù)組(SV,30只)和高眼壓生理鹽水組(NS,30只)。高眼壓辛伐他汀干預(yù)組為高眼壓造模成功后,隨機(jī)選取大鼠30只,以20mg/kg辛伐他汀溶于1ml生理鹽水進(jìn)行灌胃。高眼壓生理鹽水組為高眼壓造模成功后,隨機(jī)選取大30只,以1ml/只／天進(jìn)行灌胃。SV組于開(kāi)始藥物干預(yù)后3天、7天、3周檢測(cè)眼壓1次,行內(nèi)眥靜脈取血1.5ml采用流式細(xì)胞儀測(cè)定外周血EPCs數(shù)量,3周時(shí)脫頸處死后取右眼(6眼)進(jìn)行視網(wǎng)膜HE染色、凋亡細(xì)胞檢測(cè)以及免疫組織化學(xué)法Bal-2、Bax檢測(cè)。NS組于3天、7天、3周檢測(cè)眼壓1次,行內(nèi)眥靜脈取血1.5m1測(cè)定外周血EPCs數(shù)量。 將160只大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(CON,30只)、高眼壓模型組(OH,50只)、高眼壓辛伐他汀干預(yù)組(SV,50只)和高眼壓生理鹽水組(NS,30只)。CON組10只、OH組20只、SV組20只和NS組10只(共60只)于開(kāi)始藥物干預(yù)后3周行股動(dòng)脈放血10ml,離心后取血清,采用ELISA技術(shù)檢測(cè)外周血VEGF-A、SDF-1、NO及ET-1的水平。CON組10只、OH組10只、SV組10只和NS組10只(共40只)于開(kāi)始藥物干預(yù)后3周脫頸處死動(dòng)物,摘除眼球,采用western blot技術(shù)檢測(cè)視網(wǎng)膜HIF-1α蛋白水平。CON組10只、OH組20只、SV組20只和NS組10只(共60只)于開(kāi)始藥物干預(yù)后3周脫頸處死動(dòng)物,摘除眼球,采用ELISA技術(shù)檢測(cè)視網(wǎng)膜VEGF-A、SDF-1、NO及ET-1的水平。 結(jié)果： (1)高眼壓模型組于眼壓升高3天、7天、3周的平均眼壓分別為37.4±1.5mmHg,31.8±4.1mmHg,25.9±2.2mmHg;高眼壓辛伐他汀干預(yù)組3天、7天、3周的平均眼壓分別為38.0±3.7mmHg,33.9±2.9mmHg,24.9±3.2mmHg.辛伐他汀對(duì)大鼠眼壓未表現(xiàn)出顯著影響(P0.05)。 (2)高眼壓模型組于眼壓升高后3天、7天、3周外周血EPCs數(shù)量分別為(121.3±22.4)、(81.3±23.7)、(46.1±15.8)個(gè)/ml；高眼壓辛伐他汀干預(yù)組3天、7天、3周外周血EPCs數(shù)量分別為(138.5±41.4)、(77.9±22.0)、(65.0±13.6)個(gè)/m1。服用辛伐他汀3天和3周外周血EPCs均較高眼壓模型組顯著升高(P0.05)。 (3)辛伐他汀干預(yù)組大鼠與高眼壓模型組相比,HE染色視網(wǎng)膜各層形態(tài)稍整齊；Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)未見(jiàn)明顯差異,Bax陽(yáng)性細(xì)胞比例降低,TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞比例明顯降低。 (4)正常對(duì)照組、大鼠高眼壓模型組、高眼壓辛伐他汀干預(yù)組、高眼壓生理鹽水組外周血VEGF-A分別為83.75±4.76ng/L、53.47±5.36ng/L、80.35±8.62ng/L、54.29±5.28ng/L。與高眼壓模型組相比,辛伐他汀干預(yù)組外周血VEGF-A明顯升高(P0.001)。 正常對(duì)照組、大鼠高眼壓模型組、高眼壓辛伐他汀干預(yù)組、高眼壓生理鹽水組視網(wǎng)膜VEGF-A分別為43.43±5.33ng/L、23.54±5.38n/L、32.83±5.64ng/L、22.60±5.98ng/L。與高眼壓模型組相比,辛伐他汀干預(yù)組視網(wǎng)膜VEGF-A明顯升高(P0.001)。 (5)正常對(duì)照組、大鼠高眼壓模型組、高眼壓辛伐他汀干預(yù)組、高眼壓生理鹽水組外周血SDF-1分別為230.62±11.27pg/ml、296.28±12.14pg/ml、265.74±39.71pg/ml、291.72±12.21pg/ml。與高眼壓模型組相比,辛伐他汀干預(yù)組外周血SDF-1明顯降低(P=0.001)。 正常對(duì)照組、大鼠高眼壓模型組、高眼壓辛伐他汀干預(yù)組、高眼壓生理鹽水組SDF-1分別為227.41±18.38pg/ml、187.72±19.19pg/ml212.14±23.71pg/ml、185.63±19.26pg/ml。與高眼壓模型組相比,辛伐他汀干預(yù)組視網(wǎng)膜SDF-1明顯升高（P0.001)。 (6)正常對(duì)照組、大鼠高眼壓模型組、高眼壓辛伐他汀干預(yù)組、高眼壓生理鹽水組外周血NO分別為36.26±4.95μmo1/L、41.16±4.97μmol/L、44.31±4.14μmol/L、40.94±4.31μmol/L。與高眼壓模型組相比,辛伐他汀干預(yù)組外周血NO明顯升高(P=0.044)。 正常對(duì)照組、大鼠高眼壓模型組、高眼壓辛伐他汀干預(yù)組、高眼壓生理鹽水組視網(wǎng)膜NO分別為38.54±3.53μmol/L、32.20±3.74μmo1/L、30.52±3.94μmol/L、31.16±3.36μmo1/L。與高眼壓模型組相比,辛伐他汀干預(yù)組視網(wǎng)膜NO無(wú)顯著變化(P=0.159)。 (7)正常對(duì)照組、大鼠高眼壓模型組、高眼壓辛伐他汀干預(yù)組、高眼壓生理鹽水組外周血ET-1分別為72.68±6.35n/L、77.84±7.98n/L、87.62±5.49n/L、78.13±7.66ng/L。與高眼壓模型組相比,辛伐他汀干預(yù)組外周血ET-1明顯升高(P0.001)。 正常對(duì)照組、大鼠高眼壓模型組、高眼壓辛伐他汀干預(yù)組、高眼壓生理鹽水組視網(wǎng)膜ET-1分別為53.13±2.07ng/L、28.39±3.33ng/L、39.09±4.81n/L、28.20±2.65ng/L。與高眼壓模型組相比,辛伐他汀干預(yù)組視網(wǎng)膜ET-1明顯升高(P0.001)。 結(jié)論：辛伐他汀通過(guò)促進(jìn)視網(wǎng)膜HIF-lα表達(dá),提高外周血及視網(wǎng)膜VEGF-A水平,促進(jìn)骨髓中EPCs動(dòng)員入血,增加外周血EPCs數(shù)量；同時(shí)升高視網(wǎng)膜SDF-1水平,促進(jìn)EPCs向缺血、缺氧的視網(wǎng)膜組織轉(zhuǎn)移,促進(jìn)血管內(nèi)皮修復(fù),減輕視網(wǎng)膜損害,減少視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡。提示辛伐他汀通過(guò)促進(jìn)EPCs的動(dòng)員對(duì)高眼壓視神經(jīng)損傷修復(fù)具有有益作用,并可能成為青光眼治療新的途徑。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R779.6

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