【摘要】：阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征（Obstructive sleep apnea syndrome,OSAS）是睡眠呼吸疾病中最為常見的一種，以睡眠中上氣道阻塞、頻繁出現(xiàn)呼吸不暢和呼吸中斷為特征。其人群發(fā)病率為2%-4%，為臨床常見疾病，可造成全身各個(gè)系統(tǒng)的綜合性損傷。OSAS病人引起周期性的動(dòng)脈血氧飽和度波動(dòng)，造成周期性間歇性低氧（cyclic intermittent hypoxia,CIH）。有研究指出，每天將大鼠置于間歇性低氧環(huán)境中數(shù)小時(shí)，數(shù)周后可引起持續(xù)性肺動(dòng)脈高壓以及肺血管重塑。間歇性低氧誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓的發(fā)病機(jī)制還沒有完全明確，但相關(guān)研究證實(shí)在引起肺動(dòng)脈高壓過程中某些潛在因素起到重要作用，其中涉及到對(duì)內(nèi)皮素-1（endothelin-1, ET-1）敏感性增強(qiáng)、內(nèi)皮功能紊亂、血管活性物質(zhì)失衡等。 近年來的研究表明，肺動(dòng)脈血管內(nèi)皮是一個(gè)代謝極為活躍的組織，合成和釋放多種血管活性物質(zhì)(ET-1、一氧化氮等)，共同調(diào)節(jié)血管壁的舒縮功能和平滑肌的增殖、遷移等。有研究認(rèn)為，間歇性低氧可能會(huì)增加血漿ET-1水平、使內(nèi)皮功能異常、血管緊張度增加，從而誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓。本研究旨在利用CIH大鼠模型，通過觀察肺動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能以及對(duì)ET-1敏感性的改變，探討CIH對(duì)肺動(dòng)脈內(nèi)皮功能的損傷。 目的：利用CIH大鼠模型，通過觀察肺動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能以及對(duì)ET-1敏感性的改變，探討CIH對(duì)肺動(dòng)脈內(nèi)皮功能的損傷。 方法：清潔級(jí)雄性SD大鼠，體重180～190ｇ，購自河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心，在室溫20°C~22°C，空氣濕度45%~55%的條件下飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分成2組：正常氧組和CIH組。CIH組大鼠置于程序低氧艙內(nèi)，予以每天8h共21天的間歇低氧，程序設(shè)計(jì)每一低氧復(fù)氧循環(huán)時(shí)間為2min，前一分鐘充N2使氧濃度降至9%，后一分鐘充O2使氧濃度恢復(fù)到21%；對(duì)照組置于同樣的艙內(nèi)予以空氣供氣。21天后分別取各組大鼠肺動(dòng)脈進(jìn)行檢測(cè)。（1）正常氧大鼠肺動(dòng)脈環(huán)隨機(jī)分為內(nèi)皮完整組和去內(nèi)皮組，采用離體血管灌流技術(shù)，觀察CIH對(duì)ACh對(duì)PE誘導(dǎo)收縮的舒張作用的影響；觀察ET-1對(duì)各組肺動(dòng)脈環(huán)的收縮作用，以及ET受體阻斷劑對(duì)ET-1收縮作用的影響；觀察eNOS抑制劑L-NAME對(duì)ET-1誘導(dǎo)的各組肺動(dòng)脈環(huán)收縮的影響。（2）組織學(xué)檢測(cè)：包括HE染色觀察肺動(dòng)脈的組織病理學(xué)變化和透射電鏡觀察肺動(dòng)脈超微結(jié)構(gòu)的病理學(xué)變化。（3）RT-PCR測(cè)定ET-1，ETA受體以及ETB受體mRNA的表達(dá)。（4）免疫組織化學(xué)法觀察ET-1、ETA受體和ETB受體的表達(dá)分布。（5）Western Blotting測(cè)定eNOS蛋白的表達(dá)。（6）酶轉(zhuǎn)化法測(cè)定肺動(dòng)脈組織中NO的含量。 結(jié)果： 1CIH對(duì)肺動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能的影響 CIH肺動(dòng)脈環(huán)ACh對(duì)PE預(yù)收縮產(chǎn)生的舒張效應(yīng)（53.3±4.31%, n=6）明顯低于正常氧內(nèi)皮完整組（93.3±4.30%， n=6，P 0.01），明顯高于正常氧去內(nèi)皮組（3.03±2.52%，n=6，P 0.01）。 2CIH對(duì)ET-1誘導(dǎo)肺動(dòng)脈收縮的影響 大鼠肺動(dòng)脈對(duì)ET-1誘導(dǎo)的收縮呈劑量依賴性增強(qiáng)，與正常氧內(nèi)皮完整肺動(dòng)脈環(huán)（EC50=0.718±0.008nM，n=4）相比，去除內(nèi)皮（EC50=0.493±0.004nM，n=4，P 0.01）和CIH（EC50=0.575±0.003nM，n=4，P0.01）均能使肺動(dòng)脈對(duì)ET-1的敏感性增強(qiáng)，但與CIH大鼠相比，去內(nèi)皮組肺動(dòng)脈環(huán)對(duì)ET-1誘導(dǎo)的收縮反應(yīng)更敏感（P 0.01）。 3ET受體阻斷劑對(duì)ET-1誘導(dǎo)各組肺動(dòng)脈環(huán)收縮作用的影響 對(duì)于不同組的大鼠肺動(dòng)脈環(huán)，BQ123（ETA受體阻斷劑）幾乎均能完全阻斷ET-1誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈收縮。 正常氧內(nèi)皮完整的大鼠肺動(dòng)脈，BQ788（ETB受體阻斷劑）部分抑制ET-1誘導(dǎo)的收縮（44.13±7.04%，n=6），去除內(nèi)皮后，收縮率明顯加強(qiáng)（72.59±5.17%，n=6，P 0.01），對(duì)于CIH大鼠的肺動(dòng)脈環(huán)（52.79±1.95%，n=6），BQ788對(duì)ET-1誘導(dǎo)的收縮抑制作用明顯低于正常氧內(nèi)皮完整組（P 0.01），明顯高于去內(nèi)皮組（P 0.01）。 4eNOS抑制劑L-NAME對(duì)ET-1誘導(dǎo)血管收縮的影響 在正常氧內(nèi)皮完整的情況下, L-NAME可顯著加強(qiáng)ET-1誘導(dǎo)的收縮（115.68±7.13%，n=6），去除內(nèi)皮后，L-NAME對(duì)ET-1誘導(dǎo)的收縮基本無影響（100.83±6.61%，n=6），明顯低于內(nèi)皮完整組（P 0.01）；間歇性低氧后，L-NAME對(duì)ET-1誘導(dǎo)的收縮產(chǎn)生抑制作用（79.72±8.33%，n=6）。 5CIH對(duì)肺動(dòng)脈結(jié)構(gòu)的影響 HE染色觀察正常氧大鼠肺動(dòng)脈，內(nèi)皮層完整，內(nèi)皮細(xì)胞排列規(guī)則，電鏡下看到正常的線粒體；經(jīng)過CIH處理后的大鼠肺動(dòng)脈，內(nèi)皮層觀察到病理學(xué)變化，血管內(nèi)皮細(xì)胞核水腫，局部?jī)?nèi)皮細(xì)胞脫落，，電鏡下內(nèi)皮細(xì)胞部分線粒體嵴破壞。 6CIH對(duì)大鼠肺動(dòng)脈ET-1、ET_A受體和ET_B受體mRNA表達(dá)及蛋白表達(dá)的影響 與正常氧大鼠相比，CIH大鼠肺動(dòng)脈ET-1和ET_A受體mRNA表達(dá)顯著升高（P 0.01），ET_B受體mRNA表達(dá)卻明顯降低（P 0.01）。免疫組織化學(xué)分析其蛋白定位發(fā)現(xiàn)，CIH處理后，大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮層和平滑肌層均有ET-1表達(dá)的增多，ET_A受體主要集中在平滑肌層表達(dá)，并且CIH使血管平滑肌層ET_A受體表達(dá)增多，ET_B受體在平滑肌層和內(nèi)皮層均有分布，并且CIH后，ET_B受體在平滑肌和內(nèi)皮層的表達(dá)均有減少。 7CIH對(duì)大鼠肺動(dòng)脈組織NO含量及eNOS表達(dá)的影響 與正常氧大鼠相比，CIH大鼠肺動(dòng)脈組織NO的含量明顯降低（P 0.01），并且eNOS蛋白表達(dá)也顯著降低（P 0.01）。 結(jié)論：CIH能引起大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)皮功能損傷，并且對(duì)ET-1敏感性增強(qiáng)，一方面可能由于ET_A受體表達(dá)上調(diào)，另一方面可能與內(nèi)皮型ET_B受體表達(dá)減少相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R766

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本文編號(hào)：2427141