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小鼠視網(wǎng)膜片層化及神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分化的研究

發(fā)布時(shí)間:2019-02-17 17:31
【摘要】:外界信息大多是由視覺(jué)系統(tǒng)接收、處理和感知的。而視覺(jué)信息先在視網(wǎng)膜中進(jìn)行初步處理再傳導(dǎo)給大腦。視覺(jué)信息傳遞的通路是通過(guò)視網(wǎng)膜中各種神經(jīng)元之間的突觸進(jìn)行傳遞的。視網(wǎng)膜神經(jīng)元的軸突匯聚成視神經(jīng),它們以動(dòng)作電位的方式將視覺(jué)信息傳送至數(shù)個(gè)履行各種功能的大腦結(jié)構(gòu)區(qū)域。視覺(jué)信息最為直接的通路是由光感受器通過(guò)雙極細(xì)胞至神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的傳遞。水平細(xì)胞接收來(lái)自光感受器的輸入,并通過(guò)側(cè)向軸索影響周?chē)碾p極細(xì)胞和光感受器。無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞接受雙極細(xì)胞的輸入,并通過(guò)側(cè)向投射影響周?chē)纳窠?jīng)節(jié)細(xì)胞、雙極細(xì)胞和其他的無(wú)長(zhǎng)突細(xì)胞。眼的發(fā)生是一個(gè)多因素參與的復(fù)雜的過(guò)程,發(fā)育過(guò)程中各細(xì)胞是嚴(yán)格按照特定的時(shí)空模式表達(dá)和相互作用的。先由視杯發(fā)育為胚眼,再逐漸發(fā)育出視網(wǎng)膜各層細(xì)胞。所有類(lèi)型的細(xì)胞都是由神經(jīng)干細(xì)胞分化而來(lái)的,神經(jīng)干細(xì)胞在不同發(fā)育時(shí)期具有不同的增殖特點(diǎn)和功能特性,這也是形成片層化結(jié)構(gòu)的重要因素之一。由于視網(wǎng)膜的上述特殊功能,對(duì)視網(wǎng)膜的研究一直是神經(jīng)生物學(xué)中的熱點(diǎn)。 目的:通過(guò)觀察小鼠視網(wǎng)膜的形態(tài)結(jié)構(gòu)來(lái)探索視網(wǎng)膜的發(fā)生及片層化過(guò)程;研究小鼠視網(wǎng)膜中雙極細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程及其與視網(wǎng)膜片層化過(guò)程的關(guān)系;觀察小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)干細(xì)胞的增殖與分化過(guò)程。 方法:本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫熒光、BrdU檢測(cè)技術(shù)和蘇木精-伊紅染色法染色法對(duì)胚胎期及出生后小鼠視網(wǎng)膜形態(tài)結(jié)構(gòu)及神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、分化進(jìn)行觀察,并對(duì)視網(wǎng)膜BrdU和PKC-α陽(yáng)性細(xì)胞密度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。 結(jié)果:①小鼠在胚胎E10時(shí)出現(xiàn)視杯,視網(wǎng)膜片層化是從E13時(shí)開(kāi)始,先分化出色素上皮層和神經(jīng)母細(xì)胞層,胚胎時(shí)期從神經(jīng)母細(xì)胞層中分化出神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層。視網(wǎng)膜的片層化主要在出生后形成,出生后神經(jīng)母細(xì)胞層逐漸分化出感光細(xì)胞層、外核層、外網(wǎng)層和內(nèi)核層,至小鼠睜眼時(shí)基本分化完全,形成視網(wǎng)膜十層結(jié)構(gòu)。②BrdU可以特異性標(biāo)記處到增殖狀態(tài)的神經(jīng)干細(xì)胞,BrdU陽(yáng)性細(xì)胞在胚胎期視網(wǎng)膜中密度最高隨后逐漸減少,經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn),視網(wǎng)膜干細(xì)胞在胚胎時(shí)期數(shù)量逐漸增多,到出生當(dāng)天數(shù)量達(dá)到最大值,出生后,神經(jīng)干細(xì)胞開(kāi)始分化,數(shù)量逐漸減少。所以,小鼠視網(wǎng)膜干細(xì)胞在胚胎期大量增殖,而出生后神經(jīng)干細(xì)胞增殖速度放慢并逐漸分化為各類(lèi)細(xì)胞。③PKC-α是小鼠視網(wǎng)膜中雙極細(xì)胞的特異性標(biāo)記物,本實(shí)驗(yàn)觀察到PKC-α的陽(yáng)性細(xì)胞從P5時(shí)開(kāi)始出現(xiàn),到P7時(shí)能標(biāo)記到完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu),至P20時(shí)PKC-α的陽(yáng)性細(xì)胞密度和細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)趨向穩(wěn)定,雙極細(xì)胞發(fā)育完全。隨著年齡的增長(zhǎng),到P70以后,PKC-α陽(yáng)性細(xì)胞密度降低,雙極細(xì)胞逐漸退化。 結(jié)論:①小鼠視網(wǎng)膜的片層化是以神經(jīng)母細(xì)胞層為基礎(chǔ)逐漸發(fā)育形成的,在出生前僅發(fā)育出色素上皮層、神經(jīng)母細(xì)胞層和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層,小鼠在出生時(shí)視網(wǎng)膜尚未發(fā)育完全,出生后是視網(wǎng)膜細(xì)胞分化的高峰期,P0到P14期間視網(wǎng)膜形成片層化結(jié)構(gòu),發(fā)育完全。在視網(wǎng)膜發(fā)育成熟之前,小鼠尚未睜開(kāi)眼睛,視網(wǎng)膜的片層化過(guò)程與其功能的成熟相一致。②視網(wǎng)膜片層化的過(guò)程也是細(xì)胞增殖、分化的過(guò)程。分化出的細(xì)胞要遷移至成熟位置,也就形成了視網(wǎng)膜的片層化結(jié)構(gòu)。小鼠視網(wǎng)膜的神經(jīng)干細(xì)胞在胚胎時(shí)期大量增殖,為出生的細(xì)胞分化做準(zhǔn)備。在出生后前期是分化的高峰期,逐漸分化為不同類(lèi)型的細(xì)胞。而P10以后僅在睫狀體處存在神經(jīng)干細(xì)胞,這可能與成年以后的視網(wǎng)膜自我修復(fù)功能相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】:河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2012
【分類(lèi)號(hào)】:R774.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào):2425415

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