【摘要】：下咽癌是頭頸腫瘤中較少見的惡性腫瘤之一。臨床癥狀主要表現(xiàn)為咽部不適、吞咽困難、吞咽疼痛、頸部腫塊和聲音嘶啞等。下咽癌約占頭頸腫瘤3-5%,約占全身腫瘤的0.5%。對于世界不同的地區(qū)、不同的年齡、不同的性別之間,下咽癌的發(fā)病率均有一定程度的差異。已有的資料顯示歐洲發(fā)病率呈上升的趨勢,在中國下咽癌的發(fā)病率近年來卻趨于平緩。同其他惡性腫瘤一樣,下咽癌的病因復(fù)雜,但具體病因尚不明確,下咽癌可能與煙酒有密切的關(guān)系。臨床資料表明,大多數(shù)病人有吸煙飲酒史而且日用量很大,有的持續(xù)時間相當長。其他因素如營養(yǎng)缺乏、環(huán)境污染及病毒感染可能參與其發(fā)病過程。 下咽癌治療的目標當前是徹底根除腫瘤,最大限度地減少并發(fā)癥,優(yōu)化生活質(zhì)量,延長生命。手術(shù)加放化療的綜合治療是公認的主要治療手段。雖然放化療手術(shù)及其他治療手段有長足的發(fā)展,但由于下咽癌臨床診斷多處于晚期階段,而且由于解剖的的特點,復(fù)合病變多見。作為頭頸腫瘤中惡性程度很高的腫瘤之一,下咽癌復(fù)發(fā)率高,國外報道5年的生存率只有30%。因此早期診斷,加強術(shù)后的復(fù)發(fā)的監(jiān)控,有著十分重要的臨床意義。雖然下咽癌的發(fā)病機制至今仍不明確,科學(xué)工作者及臨床腫瘤學(xué)家越來越關(guān)注腫瘤的基因及生長因子在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程的作用,由此可以探查腫瘤發(fā)生的原因,提高腫瘤的早期診斷率,提高生活質(zhì)量,并改善預(yù)后。綜上,我們對下咽癌術(shù)后病人復(fù)發(fā)相關(guān)指標進行研究,以期為臨床的治療提供一些啟迪。 有絲分裂的動力是在動粒蛋白和微管之間產(chǎn)生,有絲分裂監(jiān)測點的信號通路就在動粒蛋白上進行。動力蛋白既是有絲分裂基本活動所必需,又能使染色體的分裂時產(chǎn)生的差錯得以糾正。細胞分裂,姊妹染色體分離,子細胞必須得到數(shù)目準確和結(jié)構(gòu)功能完整的染色體。染色體的不等分會導(dǎo)致非整倍體的產(chǎn)生,其后果可能是致命性,也可引起先天發(fā)育不良,甚至可導(dǎo)致惡性腫瘤的產(chǎn)生。 動力蛋白分為功能性的和結(jié)構(gòu)性的蛋白。作為功能性的蛋白-CENP-H是動力蛋白復(fù)合體的重要組成部分,1991年在鼠中首先發(fā)現(xiàn),分子量為33kDa,擁有環(huán)-環(huán)樣的結(jié)構(gòu),除心臟,腦組織,腎上腺以外的組織中均有表達,而且增殖旺盛的器官表達相對增強。CENP-H具有重要的生理功能,研究表明CENP-H與CENP-A和CENP-C形成動力蛋白復(fù)合體,在有絲分裂中CENP-H是蛋白復(fù)合體不可缺少的一部分。在Hela細胞中CENP-H被沉默以后可導(dǎo)致CENP-C的減少,預(yù)示著CENP-H在復(fù)合體中的確是發(fā)揮著重要的作用。進一步研究表明CENP-H與腫瘤發(fā)生有一定關(guān)系。CENP-H在口腔癌、直腸癌中高表達,促進惡性腫瘤的形成。有趣的是CENP-H的高表達在直腸癌中可誘導(dǎo)多倍體的產(chǎn)生。提示CENP-H在直腸癌形成發(fā)展演進中扮演著重要角色。近來研究還表明CENP-H高表達是食道癌、非小細胞肺癌、鼻咽癌預(yù)后的指標。 Ki67是核增殖抗原,是研究細胞增殖的重要指標,其主要的特點是除G0以外細胞的各個期均有表達,Ki67表達增強預(yù)示細胞增殖活躍。在臨床及研究領(lǐng)域內(nèi)己廣泛的應(yīng)用,尤其是乳腺癌及前列腺癌。研究表明,Ki67在口腔癌中過度表達并可能成為其預(yù)后的指標。 綜合上述,雖然CENP-H及Ki67在一些癌中作為預(yù)后的指標,然而CENP-H及Ki67蛋白在下咽癌中與其預(yù)后的相關(guān)性至今尚無研究。我們要對兩因子在下咽癌中的表達及臨床的關(guān)系進行探討。特別是二者的表達在下咽癌術(shù)后病人復(fù)發(fā)的關(guān)系進行深入的研究。另在體外沉默CENP-H以后,檢測細胞的增殖、凋亡及侵襲功能,探討CENP-H對下咽癌的影響。 第一部分CENP-H及Ki67蛋白在下咽癌中的表達 目的： 1.通過免疫組化在下咽癌術(shù)后病人的癌組織及癌旁正常黏膜組織行CENP-H的蛋白水平表達檢測,對癌組織行Ki67檢測。進一步探討兩個因子表達與臨床相關(guān)指標如年齡、性別、組織的分化程度、臨床階段、飲酒與非飲酒之間關(guān)系。 2.在下咽癌組織及對應(yīng)的癌旁正常黏膜中,通過RT-PCR檢測CENP-H在下咽癌中的mRNA水平的表達。 材料及方法： 1.從2003年3月至2005年3月在齊魯醫(yī)院耳鼻喉科住院的首次接受下咽癌手術(shù)治療的病人標本中選出112例符合標準者為研究對象,與每一位病人簽知情同意書；免疫組化法檢測CENP-H及Ki67二因子在下咽癌中的蛋白水平表達,對CENP-H設(shè)癌旁正常黏膜對照。CENP-H及Ki67二因子在下咽癌中的表達評判標準：0(無表達)；1+(淺染色或細胞著色數(shù)目小于20%)；2+(中等染色或細胞著色數(shù)目20%-50%)；3+(深染色或細胞著色數(shù)目大于50%)。0,+是低表達,2+、3+是高表達。 2.8位下咽癌病人術(shù)后的癌組織及癌旁正常黏膜,Trizol方法制備提取總RNA, CENP-H上游引物是5'-TGCAAGAAAAGCAAATCGAA-3',下游引物是5'-ATCCC-AAGATTCCTGCTGTG-3;內(nèi)參GAPDH上游引物是5'-ACC AC AGTCC ATGCC ATC-AC-3',下游引物是5'-TCCACCACCCTGTGGCTGTA-3'.利用RT-PCR方法檢測CENP-H的mRNA水平的表達并定量分析。 結(jié)果： 1.在112下咽癌中CENP-H高表達者50例(44.6%),低表達者62例(55.4%)；在黏膜中的高表達11例(9%)。兩者的陽性表達率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05).在112下咽癌中Ki67高表達者69例(61.6%),低表達者43例(38.4%)。 2. CENP-H高表達與病變的晚期階段、飲酒呈密切相關(guān)(P=0.012及P=0.048)。Ki67高表達與晚期階段密切相關(guān)。Ki67與晚期階段具有相關(guān)性(P=0.021) 3.復(fù)合Ki67及CENP-H在下咽癌中表達四種的表現(xiàn)：Ki67高表達/CENP-H高表達(n=38),Ki67高表達/CENP-H D低表達(n=31)ki67低表達/CENP-H高表達(n=12)Ki67低表達/CENP-H低表達(n=31)。CENP-H與Ki67表達在下咽癌中具有正相關(guān)(P=0.005Pearson[卡方檢驗]；P=0.006[Fisher's檢驗])。 4.8例下咽癌病人中顯示CENP-H mRNA水平在下咽癌中高表達,但在癌旁正常粘膜組織中低表達。 結(jié)論： 1. CENP-H與Ki67在下咽癌中高表達與臨床階段關(guān)系密切。 2.在下咽癌中CENP-H與Ki67表達具有正相關(guān)。 第二部分CENP-H與Ki67在下咽癌中的表達與下咽癌術(shù)后復(fù)發(fā)的系 目的：前期研究表明CENP-H或Ki67在下咽癌中的高表達與臨床晚期階段密切相關(guān),我們進一步研究二者是否作為復(fù)發(fā)的指標。 方法： 對112例下咽癌的病人及病人家屬進行面對面的術(shù)后隨訪。在隨訪中,對病人進行電子喉鏡及CT檢查,并且與病人及／或家屬談話超過15分鐘,記錄病人術(shù)后的情況。平均隨訪時間48.5個月(2-74月)。然后用Kaplan-Meier制作出生存曲線并分析其術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系。Cox分析二者的表達是否為下咽癌術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素。 結(jié)果： 1. CENP-H與Ki67的表達與下咽癌術(shù)后復(fù)發(fā)差異有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義(分別為P0.001和P=0.009) 2. CENP-H與Ki67的高表達成為下咽癌術(shù)后復(fù)發(fā)的危險因素(分別為P=0.001和p=0.018)。 結(jié)論： 1.我們的研究結(jié)果顯示,CENP-H與Ki67的表達增強是下咽癌術(shù)后復(fù)發(fā)一個標志。 2. CENP-H與Ki67可能是下咽癌術(shù)后復(fù)發(fā)獨立的危險因素。 第三部分在FaDu細胞系中沉默CENP-H對細胞增殖、凋亡及侵襲的影響 目的：在FaDu細胞系中,探討沉默CENP-H中對細胞增殖、凋亡及侵襲的影響。細胞增殖是通過CCK8實驗加以檢測,流式細胞儀檢測細胞凋亡,侵襲實驗檢測細胞的侵襲能力。 方法： 1. FaDu細胞系(ATCC)于RPMI1640培養(yǎng)基加上10%胎牛血清(FBS)在37℃5%CO2增濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng),每3天進行傳代。當細胞愈合率達40-70%進行轉(zhuǎn)染。 2.在FaDu細胞系中沉默CENP-H48小時后Western Blot檢測沉默的效率。流式細胞儀檢測CENP-H沉默后FaDu細胞系的凋亡。 3.CCK8檢測CENP-H沉默后的FaDu細胞系的增殖情況。 4.侵襲實驗檢測沉默CENP-H對FaDu細胞的侵襲能力的影響。 結(jié)果： 1.瞬時轉(zhuǎn)染的效率約60-80%,Western Blot檢測沉默的效果,CENP-H沉默組與PBS組及陰性對照組比較,瞬時轉(zhuǎn)染沉默的效果好。 2.沉默CENP-H之后,PBS組、陰性對照組及沉默組細胞凋亡數(shù)分別為12.18%±2.12%,14.38%±3.12%49.17%±7.78%,它們之間的差異具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。 3.沉默組、陰性對照組以及未處理組的吸光值在48小時,72小時分別是0.312±0.031、0.528±0.025、0.531±0.029和0.512±0.041、0.822±0.064、0.823±0.053。沉默CENP-H后,沉默組、陰性對照組以及未處理組48,72小時后細胞的增殖明顯受影響,三組比較具有顯著的統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。 4.細胞進入小室的細胞數(shù)沉默組與對照組分別是每個高倍視野45±6.45和50±8.73。沉默CENP-H后,對細胞的侵襲能力影響無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： 1. CENP-H在體外對細胞增殖有促進作用并誘導(dǎo)細胞凋亡。 2. CENP-H在體外實驗中證實不能增加下咽癌的侵襲能力。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R739.63
【共引文獻】
相關(guān)期刊論文 前10條
1 鄧雪英;蘇勇;鄭列;謝傳淼;尹韶涵;;65例喉咽癌局部侵犯的CT掃描結(jié)果分析及其對治療的指導(dǎo)意義[J];癌癥;2009年06期
2 鄧雪英;蘇勇;鄭列;謝傳淼;古模發(fā);曾睿芳;尹韶晗;;下咽癌頸部及咽后淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的CT/MRI分析[J];癌癥;2010年02期
3 熊金輝;下咽癌術(shù)后放射治療的護理[J];當代護士(學(xué)術(shù)版);2005年09期
4 趙堅強;;下咽癌的手術(shù)治療回顧與展望[J];臨床醫(yī)學(xué);2006年07期
5 何發(fā)堯,王躍建;喉癌肉瘤1例報告并文獻復(fù)習(xí)[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2004年05期
6 高太虎,米玉錄,馬培如,王旭紅,康秀水;喉聲門上水平部分切除術(shù)的術(shù)式改良[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2004年06期
7 孫彥,陳志俊,孫文海,蔣光峰,孫煒;會厭和胸骨舌骨肌在T3級聲門癌喉功能保全手術(shù)中的應(yīng)用[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2005年09期
8 李永強;張文山;;頸部舌形皮瓣在喉全切除術(shù)氣管造瘺中的應(yīng)用[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2009年04期
9 楊洪;陳乾美;;擴大環(huán)狀軟骨上喉次全切除及氣管-環(huán)狀軟骨-舌骨-會厭固定喉功能重建術(shù)[J];貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2007年04期
10 張彩;;健康教育臨床路徑在喉癌手術(shù)患者中的應(yīng)用[J];當代護士(下旬刊);2012年11期
相關(guān)會議論文 前3條
1 周雪華;吳正虎;;Pearson喉近全切除發(fā)音管重建的改進[A];浙江省抗癌協(xié)會頭頸腫瘤外科專業(yè)委員會成立大會暨第一屆學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年
2 周雪華;吳正虎;何可明;;注水法用于判斷喉及下咽癌手術(shù)切緣的價值[A];浙江省抗癌協(xié)會頭頸腫瘤外科專業(yè)委員會成立大會暨第一屆學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年
3 季慧;黃志純;孫寶賓;馮旭;張鳳兵;顧建興;;氣管側(cè)切擴大造瘺預(yù)防喉全切除術(shù)后造瘺口狹窄(附24例報告)[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會議論文匯編（上）[C];2007年
相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條
1 張再興;喉鱗癌相關(guān)蛋白質(zhì)組學(xué)研究及腫瘤標志物的鑒定[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年
2 吳昊;FHIT基因與下咽癌的相關(guān)性研究及胸大肌肌皮瓣在耳鼻咽喉-頭頸腫瘤外科缺損修復(fù)中的應(yīng)用[D];山東大學(xué);2005年
3 張宗敏;轉(zhuǎn)錄組異常改變與喉鱗癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年
4 劉明波;Stefin A和cathepsin B基因在喉鱗狀細胞癌中的表達差異分析以及同臨床預(yù)后的關(guān)系[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年
5 劉業(yè)海;EMP_1和MMP_s基因在喉鱗狀細胞癌中的表達差異分析及臨床應(yīng)用探討[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年
6 高麗霞;原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床與免疫機制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年
7 曾泉;頭頸鱗癌中HLA-I類抗原加工遞呈分子異常表達及其臨床意義[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年
相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條
1 曲丹菊;早期聲門癌治療方法的meta分析[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年
2 趙巖;p73基因mRNA及蛋白在喉癌中的表達[D];河北醫(yī)科大學(xué);2002年
3 溫曉霞;喉癌大體分型的病理特點與臨床意義[D];中國醫(yī)科大學(xué);2004年
4 何龍;喉鱗癌和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中PTEN、Survivin表達的臨床意義[D];暨南大學(xué);2005年
5 李連賀;DcR3和Caspase-8在喉癌組織中的表達及其與細胞凋亡的相關(guān)性[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年
6 吳干勛;β-連環(huán)蛋白、上皮鈣粘蛋白及Wnt-1在下咽癌中的表達及意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2006年
7 郭燕;喉癌復(fù)發(fā)相關(guān)因素與治療臨床分析[D];大連醫(yī)科大學(xué);2006年
8 何平;喉全切除術(shù)后造瘺口復(fù)發(fā)癌復(fù)發(fā)因素的臨床分析[D];山東大學(xué);2007年
9 呂操;VEGF、MVD在喉癌、喉咽癌中的表達及相關(guān)性研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2008年
10 朱海燕;EphA2和EphrinA1、EphrinB1在喉癌組織中的表達及其意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年
，
本文編號：
2422983
