【摘要】：目的 觀察尾靜脈注射和玻璃體腔移植人臍帶間充質(zhì)干細胞(human umbilical mesenchymal stem cells, hUCMSCs)后糖尿病(diabetes mellitus, DM)大鼠血糖水平及視網(wǎng)膜功能變化、視網(wǎng)膜腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)的表達情況,研究hUCMSCs在糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy, DR)治療中的可能機制,為進一步明確hUCMSCs對DR的治療作用奠定基礎(chǔ)。 方法 尾靜脈注射鏈脲佐菌素(streptozocin, STZ)誘導(dǎo)SD大鼠DR模型。將45只大鼠隨機分為DR組(B組)、尾靜脈注射1*10(?)6-7hUCMSCs組0.5ml(C組)、尾靜脈注射安慰劑組0.5ml(D組)、玻璃體腔注射1*10(?)6-7hUCMSCs組2μl(E組)、玻璃體腔注射安慰劑組2μl(F組)。正常對照組(A組,8只)和B組無處理。成模后每2-4w進行血糖監(jiān)測。采用FITC-dextran熒光造影視網(wǎng)膜鋪片和蘇木精-伊紅(HE)染色觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化；使用閃光視網(wǎng)膜電圖(Flash electroretinogram, F-ERG)評估視網(wǎng)膜功能；采用免疫組織化學(xué)法觀察視網(wǎng)膜BDNF陽性染色的情況,Image-Pro Plus6.0圖像處理分析軟件分析各組視網(wǎng)膜切片染色區(qū)的平均累積光密度(integrated optic density, IOD);實時熒光定量PCR(RT-PCR)檢測視網(wǎng)膜中BDNF mRNA的相對表達量。采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件,組間數(shù)據(jù)比較采用獨立樣本t檢驗、單因素方差分析、Kruskal-Wallis檢驗和LSD-t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析,P0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 1.血糖水平監(jiān)測：干預(yù)前,DM大鼠血糖較高,與同期正常組大鼠相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。干預(yù)后,各組血糖相比均具有顯著性差異(P=0.000)。C組血糖在各時間點與其余組之間均具有顯著性差異(P0.01),該組2w與4w相比差異具有顯著性(P=0.012)。 2. FITC-dextran熒光造影視網(wǎng)膜鋪片：A組正常大鼠視網(wǎng)膜血管走形良好,血管管壁平滑,未見視網(wǎng)膜微血管瘤和視網(wǎng)膜新生血管形成。DM大鼠視網(wǎng)膜血管走形迂曲、擴張,可見微動脈瘤,血管呈串珠樣改變,血管周圍可見高熒光滲漏及周邊大片無灌注區(qū)。 3.F-ERG:各組暗適應(yīng)a、b波峰潛時、暗適應(yīng)b波振幅及振蕩電位(oscillatory potentials, OPs)總振幅比較,差異均有顯著性(P0.05);各組暗適應(yīng)a波振幅比較,差異均無顯著性(P0.05)。 4.HE染色：A組正常大鼠視網(wǎng)膜各層細胞排列整齊,細胞形態(tài)基本正常。B、D、F組大鼠視網(wǎng)膜各層細胞結(jié)構(gòu)排列紊亂,各層細胞數(shù)減少,內(nèi)界膜不完整,部分出現(xiàn)局部增厚；視網(wǎng)膜內(nèi)血管擴張,血管內(nèi)皮細胞增殖。C、E組各層結(jié)構(gòu)排列較紊亂,RGCs、周細胞等各層細胞數(shù)較少,未見明顯擴張血管,C組偶見內(nèi)界膜缺失區(qū)域。 5.免疫組織化學(xué)染色：A組BDNF表達呈陽性,陽性細胞邊界清晰,主要位于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞層,其他視網(wǎng)膜層內(nèi)均有表達。B、D、F組BDNF弱陽性表達,各層表達量明顯減少,陽性著色較淺。C、E組BDNF表達增多,E組更為明顯。各時間點各組間視網(wǎng)膜BDNF蛋白表達差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.000)。 B、D、F組BDNF蛋白的表達量隨時間逐漸減少,三者在各時間點相比差異均無顯著性(P0.05)。C、E組BDNF蛋白的表達量隨時間逐漸增加,6w、8w時分別與其他5組相比差異均具有顯著性(P0.01)。5個DR組BDNF蛋白的表達量隨時間變化差異均有顯著性(P0.01)。 6. RT-PCR檢測視網(wǎng)膜BDNF mRNA的相對表達量：2w時5個DR組間視網(wǎng)膜BDNF mRNA相對表達量差異無顯著性(P=0.301)。4w、6w、8w相比差異均具有顯著性(P=0.000),C、E組與B、D、F組相比,差異均具有顯著性(P0.01)。C組與E組相比,僅8w時差異具有顯著性(P=0.009)。5組組內(nèi)BDNF mRNA的相對表達量均有顯著性差異(P0.01)。 結(jié)論 1.尾靜脈注射hUCMSCs能夠顯著降低血糖水平； 2.尾靜脈或玻璃體腔注射hUCMSCs均可改善DR視網(wǎng)膜功能,增加BDNF的表達,其中玻璃體腔注射效果更佳； 3.DR早期即會對RGCs、周細胞等各層細胞造成損傷； 4.DR早期即引起B(yǎng)DNF的表達降低,視網(wǎng)膜神經(jīng)功能減退。
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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R774.1

【參考文獻】

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本文編號：2421254