【摘要】：目的：本實驗旨在研究血紅素加氧酶-1(HO-1)在過氧化氫(H202)介導(dǎo)的人晶狀體上皮細(xì)胞(hLEC; SRA01/04細(xì)胞系)氧化應(yīng)激損傷及細(xì)胞凋亡中的保護性作用。方法：hLEC分別在H202濃度梯度、HO-1誘導(dǎo)劑：鈷原卟啉(CoPP)、鋅原卟啉(ZnPP)濃度梯度的培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。同時,基因沉默技術(shù)成功降低HO-1在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)并用于本實驗。細(xì)胞存活率使用CCK-8法進(jìn)行觀察。細(xì)胞內(nèi)HO-1的表達(dá)水平利用蛋白質(zhì)印跡(Western blot)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)進(jìn)行檢測。本實驗中,人晶狀體上皮細(xì)胞在400μM H2O2中預(yù)培養(yǎng)24h建立了氧化應(yīng)激損傷模型，10μM CoPP和10μM ZnPP良好地誘導(dǎo)了HO-1并避免了嚴(yán)重的細(xì)胞毒性。免疫熒光雙標(biāo)法用于細(xì)胞鑒定及HO-1胞內(nèi)表達(dá)的測定。DCFH-DA熒光探針用于檢測細(xì)胞內(nèi)的活性氧(ROS)水平。谷胱甘肽(GSH)和超氧化物岐化酶(SOD)水平檢測使用微孔法商業(yè)檢測試劑盒進(jìn)行。Annexin V-FITC/PI染色用于量化不同處理組人晶狀體上皮細(xì)胞細(xì)胞凋亡率,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶家族-3、-8(Caspase-3、-8)使用蛋白質(zhì)印跡進(jìn)行檢測。結(jié)果：1、HO-1顯著地降低ROS水平和增加GSH及SOD活性,從而明顯地減輕了H202介導(dǎo)的hLEC氧化應(yīng)激損傷。2、HO-1抑制H202介導(dǎo)的促進(jìn)凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-8,因此顯著地降低了hLEC的凋亡率。3、RNA干擾驗證了HO-1增強hLEC抵抗氧化應(yīng)激損傷的作用。結(jié)論：本實驗揭示了HO-1通過上調(diào)抗氧化酶(GSH、SOD)活性、降低活性氧(ROS)生成和抑制Caspase家族依賴的細(xì)胞凋亡從而保護hLEC免于氧化應(yīng)激損傷及細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:Aim: to investigate the protective effect of heme oxygenase-1 (HO-1) on oxidative stress and apoptosis of human lens epithelial cells (hLEC; SRA01/04) mediated by hydrogen peroxide (H202). Methods: hLEC was cultured in H202 concentration gradient and HO-1 inducer: cobalt protoporphyrin (CoPP), zinc protoporphyrin (ZnPP). At the same time, gene silencing technique successfully reduced the expression of HO-1 in cells and was used in this experiment. Cell survival rate was observed by CCK-8 method. The expression of HO-1 was detected by Western blot (Western blot) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In this experiment, human lens epithelial cells were precultured in 400 渭 M H2O2 for 24 hours to establish oxidative stress injury model. 10 渭 M CoPP and 10 渭 M ZnPP induced HO-1 well and avoided serious cytotoxicity. Immunofluorescence double labeling method was used to identify cells and determine the intracellular expression of HO-1. DCFH-DA fluorescence probe was used to detect the level of reactive oxygen species (ROS) in cells. The levels of glutathione (GSH) and superoxide dismutase (SOD) were detected by micropore commercial assay kit. Annexin V-FITC/PI staining was used to quantify the apoptosis rate of human lens epithelial cells in different treatment groups. The aspartic protein hydrolase family-3-1-8 (Caspase-3,-8) containing cysteine was detected by Western blotting. Results: (1) HO-1 significantly decreased the level of ROS and increased the activities of GSH and SOD, which significantly alleviated the oxidative stress injury of hLEC mediated by H202. 2HHO-1 inhibited the apoptosis promoting proteins Caspase-3 and Caspase-8, mediated by H202. Therefore, the apoptosis rate of hLEC was significantly decreased, and the effect of HO-1 on the resistance of hLEC to oxidative stress injury was verified by HO-1 interference. Conclusion: this study revealed that HO-1 can protect hLEC from oxidative stress and apoptosis by up-regulating the activity of antioxidant enzymes (GSH,SOD), reducing the production of Ros and inhibiting the apoptosis of Caspase family dependent cells.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R776.1

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9 ;美開發(fā)調(diào)控細(xì)胞凋亡藥物[J];中國腫瘤;1999年07期

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3 劉二龍;袁慧;;鋅與細(xì)胞凋亡[A];2003全國家畜內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文專輯[C];2003年

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7 陶春祥;細(xì)胞凋亡對心臟疾病的影響[N];中國醫(yī)藥報;2003年

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5 張曉倩;高糖誘導(dǎo)Bim蛋白高表達(dá)而促腎近曲小管上皮細(xì)胞凋亡的機制探討[D];山東大學(xué);2015年

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