【摘要】：第一部分D-半乳糖誘導(dǎo)的SD大鼠擬老化模型的建立目的：建立D-半乳糖誘導(dǎo)的擬老化SD大鼠模型。方法：90只4周齡的SD大鼠,隨機(jī)分為兩組,D-半乳糖組(擬老化組)：于頸背部皮下,注射500mg/kg/dD-半乳糖,連續(xù)8周；對(duì)照組：等體積0.9%的生理鹽水,頸背部皮下注射,連續(xù)8周。造模結(jié)束后,D-半乳糖組和對(duì)照組按時(shí)間點(diǎn)各分為三個(gè)亞組：3月齡組(給藥結(jié)束后0個(gè)月),9月齡組(給藥結(jié)束后6個(gè)月)和15月齡組(給藥結(jié)束后12個(gè)月)。給藥結(jié)束后,檢測(cè)大鼠聽性腦干反應(yīng)(Auditory Brainstem Response, ABR);酶標(biāo)儀檢測(cè)總超氧化歧化酶(Total Superoxide Dismutase, T-SOD)和丙二醛(Malondialdehyde termimal, MDA)的水平；實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)聽皮層線粒體DNA (Mitochondrial DNA, mtDN A)常見缺失突變(Common Deletion, CD)的水平；甲苯胺藍(lán)染色法觀察聽皮層神經(jīng)元細(xì)胞密度的變化；透射電鏡觀察聽皮層神經(jīng)元細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化;結(jié)果：ABR聽力檢測(cè)顯示：在相同頻率(4KHz、8kHz、16kHz、24kHz、32kHz),同齡D-半乳糖組和對(duì)照組相比,聽力閾值未見顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。對(duì)照組中,在8kHz、16kHz、24kHz、32kHz頻率,15月齡較9月齡,3月齡大鼠聽力閾值增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。D-半乳糖組中,在4KHz、8kHz、16kHz、 24kHz、32kHz頻率,15月齡較9月齡、3月齡大鼠聽力閾值增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與同齡對(duì)照組相比,9月齡、15月齡D-半乳糖組大鼠T-SOD水平降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與同齡對(duì)照組相比,3月齡,9月齡,15月齡D-半乳糖組大鼠MDA水平增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。D-半乳糖組mt DNA CD與同齡對(duì)照組相比升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在對(duì)照組中,15月齡大鼠聽皮層mtDNA CD比3月齡以及9月齡大鼠聽皮層mt DNA CD缺失率升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。甲苯胺藍(lán)染色法顯示,15月齡D-半乳糖組較其他各年齡組神經(jīng)元密度下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P0.05)。透射電鏡觀察到D-半乳糖組大鼠比對(duì)照組大鼠出現(xiàn)衰老樣超微結(jié)構(gòu)病理變化如細(xì)胞核變形、染色質(zhì)異常分布、線粒體腫脹、脂褐素聚集、神經(jīng)纖維脫髓鞘樣變等的時(shí)間更早,而且這些變化更顯著。結(jié)論：隨年齡增長,聽皮層抗氧化酶的活性下降,mtDNA CD蓄積增加,神經(jīng)元密度降低,神經(jīng)元細(xì)胞結(jié)構(gòu)逐漸出現(xiàn)退行性變,而且D-半乳糖組較對(duì)照組這些變化出現(xiàn)的更早,更明顯。長時(shí)程、高劑量的D-半乳糖會(huì)加速昕皮層細(xì)胞的衰老。第二部分Sestrin2蛋白以及自噬在D-半乳糖誘導(dǎo)的擬老化大鼠聽皮層中的作用及作用機(jī)制目的：老年性聾是老年人最常見的感覺障礙疾病,它會(huì)導(dǎo)致老年人身體、認(rèn)知、情緒、行為等一系列的功能障礙。目前老年性聾的發(fā)病機(jī)制還不清楚。本研究目的是探討自噬,以及自噬相關(guān)調(diào)控通路蛋白Sestrin2, AMPK以及p70S6K蛋白在D-半乳糖擬老化大鼠聽皮層中的作用。方法：將120只4周齡的SD大鼠,隨機(jī)分為兩組給藥：D-半乳糖組(擬老化組)：D-半乳糖500mg/kg/d,頸背部皮下注射,連續(xù)8周；對(duì)照組：等體積0.9%生理鹽水,頸背部皮下注射,連續(xù)8周。給藥結(jié)束后,D-半乳糖組和對(duì)照組按時(shí)間點(diǎn)各分為三個(gè)亞組：3月齡組(給藥結(jié)束后0個(gè)月),9月齡組(給藥結(jié)束后6個(gè)月)和15月齡組(給藥結(jié)束后12個(gè)月)。酶標(biāo)儀檢測(cè)總超氧化歧化酶(Total Superoxide Dismutase, T-SOD)和丙二醛(Malondialdehyde termimal, MDA)的水平；實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)聽皮層線粒體DNA (Mitochondrial DNA, mtDNA)常見缺失突變(Common Deletion,CD)的水平。實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)beclin 1/Atg6, LC3B/Atg8, Sestrin2 mRNA的表達(dá)水平。Westrrn blotting法檢測(cè)LC3B, Beclinl, Sestrin2, p-P70S6K, P70S6K, p-AMPK, AMPK的蛋白水平。免疫熒光檢測(cè)LC3B在聽皮層的定位表達(dá)。結(jié)果：9月齡以及15月齡D-半乳糖組大鼠T-SOD水平較同齡對(duì)照組降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3月齡,9月齡以及15月齡D-半乳糖組大鼠MDA水平比同齡對(duì)照組增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。D-半乳糖大鼠聽皮層mt DNA CD與同齡對(duì)照組相比升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。對(duì)照組組內(nèi)比較,15月齡大鼠聽皮層mtDNA CD比3月齡以及9月齡大鼠聽皮層mt DNA CD升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示,與同齡對(duì)照組相比,9月齡D-半乳糖組大鼠聽皮層Atg6mRNA表達(dá)水平上升1.09倍,P0.05；Atg8mRNA表達(dá)水平分別上升0.2和0.27倍,P0.05；Sestrin2 mRNA表達(dá)水平分別上升0.33和0.52倍,P0.05。15月齡時(shí),與對(duì)照組相比,D-半乳糖組Atg6mRNA、Atg8mRNA、Sestrin2 mRNA表達(dá)水平分別下降0.76倍,0.33倍和0.83倍,P0.05。對(duì)照組組內(nèi)比較時(shí),9月齡以及15月齡大鼠較3月齡大鼠聽皮層Atg8mRNA表達(dá)水平分別上升0.29和0.21倍,P0.05；Sestrin2 mRNA表達(dá)水平分別上升0.62和0.83倍,P0.05。Western blotting結(jié)果顯示：與同齡對(duì)照組相比,3月齡以及9月齡D-半乳糖組聽皮層Beclin1蛋白水平分別升高0.34,0.52倍,P0.05；LC3 Ⅱ/β-actin比率分別升高0.71和1.21倍,P0.05；Sestrin2蛋白水平分別升高1.03和0.27倍,P0.05；p-AMPK/AMPK比率升高1.57和0.67倍,P0.05, p-p70S6K/p70S6K比率下降1.86和1.21倍,P0.05。15月齡時(shí),與對(duì)照組相比,D-半乳糖組大鼠Beclin1蛋白水平下降0.31倍,LC3Ⅱ/β-actin下降0.80倍,Sestrin2蛋白水平下降0.37倍,p-AMPK/AMPK比率下降1.11倍,p-p70S6K/p70S6K比率升高1.89倍,P0.05。在對(duì)照組中,9月齡、15月齡較3月齡大鼠LC3Ⅱ/β-actin比率升高0.61和0.37倍,P0.05；Sestrin2蛋白水平升高0.58和0.58倍,P0.05；p-AMPK/AMPK比率升高0.71和1.04倍,P0.05；p-p70S6K/p70S6K比率下降1.63和1.62倍,P0.05。結(jié)論：在D-半乳糖誘導(dǎo)的擬老化SD大鼠年齡增長的過程中,自噬水平也在改變,Setrin2-AMPK-p70S6K可能參與年齡相關(guān)的自噬活動(dòng)的調(diào)節(jié)。大鼠年輕時(shí),即3月齡以及9月齡時(shí),為了防止氧化應(yīng)激水平增高以及mtDNA突變?cè)龆鄬?duì)細(xì)胞的損傷作用,自噬水平升高以維持細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)。而D-半乳糖大鼠更年長一些,即15月齡時(shí)出現(xiàn)與自然衰老機(jī)體相似的自噬活動(dòng)表現(xiàn),自噬水平明顯下降。而同齡的對(duì)照組大鼠,自噬活性未見明顯下降。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R764

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王洪田,姜泗長,楊偉炎,韓東一,田嘉禾,尹大一,姚樹林,邵明哲;耳鳴患者左側(cè)聽皮層局部葡萄糖代謝增加:正電子發(fā)射斷層成像的初步研究(英文)[J];Chinese Medical Journal;2001年08期

2 華清泉;王勤瑛;吳展元;肖伯奎;廖華;;單側(cè)耳蝸損毀后聽皮層中抑制性神經(jīng)遞質(zhì)含量變化的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國眼耳鼻喉科雜志;2004年06期

3 鄧意紅;陳賢明;;聽皮層半球優(yōu)勢(shì)的功能磁共振研究[J];中華耳科學(xué)雜志;2012年04期

4 張永海;熊鷹;;聽皮層可塑性的研究進(jìn)展[J];解剖科學(xué)進(jìn)展;2008年04期

5 蘇文玲;趙德安;高興強(qiáng);劉慶華;魏婷婷;趙巖;;耳鳴模型大鼠聽皮層生長相關(guān)蛋白-43和細(xì)胞骨架活性調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)[J];聽力學(xué)及言語疾病雜志;2010年04期

6 婁昕;吳冰;吳新淮;縱亮;黃點(diǎn)點(diǎn);王秋菊;馬林;;正常成人聽皮層磁共振動(dòng)脈自旋標(biāo)記灌注成像的可重復(fù)性研究[J];中華耳科學(xué)雜志;2013年01期

7 何欣,韓彤學(xué),姜興杰,張學(xué)利,趙岫峰;七——十月人胎聽皮層發(fā)育的研究[J];吉林醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);1995年02期

8 任紅苗;王宜南;陳繼川;吳曉平;張波;劉媛;張世昌;;胚胎小鼠聽皮層區(qū)域神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定[J];中華耳科學(xué)雜志;2011年04期

9 馮嘉真,吳樹慧;貓?jiān)l(fā)聽皮層對(duì)簡(jiǎn)單聲和調(diào)頻聲的單位反應(yīng)[J];生理學(xué)報(bào);1981年02期

10 陳賢明;梁永輝;陳自謙;倪萍;;突發(fā)性聾患者急性期聽皮層代謝~1H-MRS研究[J];聽力學(xué)及言語疾病雜志;2011年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前7條

1 王小勤;;聽覺大腦皮層神經(jīng)生理學(xué)研究的進(jìn)展和發(fā)展方向[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)會(huì)成立十周年慶祝大會(huì)論文摘要匯編[C];2005年

2 馮艷梅;殷善開;何景春;;高頻聽力損失對(duì)豚鼠下丘和聽皮層間隔檢測(cè)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（下）[C];2007年

3 王勤瑛;汪審清;林山;;大鼠聽皮層中GABA能神經(jīng)元分布的實(shí)驗(yàn)研究[A];2007浙江省耳鼻咽喉—頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2007年

4 楊文偉;孫心德;楊勇;徐瑩;李軼;;Behaving狀態(tài)下大鼠聽皮層群體神經(jīng)元信號(hào)的采集方法[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)第十屆全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2013年

5 楊琨;吳莎;曹永茂;華清泉;;慢性注射水楊酸鈉對(duì)大鼠聽皮層TrkB及c-fos表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十三次全國耳鼻咽喉——頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

6 亢曉冬;孫霞;吳培林;梁國慶;;耳毒性保護(hù)作用中低劑量慶大霉素對(duì)聽皮層中樞影響的研究[A];浙江省生理科學(xué)會(huì)2008年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

7 謝鼎華;周媛;;年齡相關(guān)性聽力減退大鼠聽皮層、蝸核、耳蝸中SOD、MDA的變化及神經(jīng)細(xì)胞凋亡初步觀察[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 冀旭穎;丘腦皮層環(huán)路以及聽皮層內(nèi)部環(huán)路的層特征和細(xì)胞選擇性[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

2 孫海英;線粒體抗氧化酶Trx2在D-半乳糖誘導(dǎo)的聽皮層早衰中的作用及其機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2015年

3 郭飛;聽覺訓(xùn)練誘導(dǎo)聽皮層可塑性的相關(guān)通路及分子機(jī)制[D];華東師范大學(xué);2012年

4 張季平;聽皮層和中腦下丘對(duì)聽覺信息頻率和空間編碼的研究[D];華東師范大學(xué);2001年

5 曾玲玲;線粒體脫乙酰化酶Sirt3在D-半乳糖誘導(dǎo)的聽皮層早衰中的作用及其機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2014年

6 朱小青;環(huán)境誘導(dǎo)腦聽覺功能可塑性的細(xì)胞分子機(jī)制[D];華東師范大學(xué);2014年

7 楊文偉;中樞神經(jīng)元聽覺信息處理的調(diào)制[D];華東師范大學(xué);2007年

8 楊弘彥;NMDA受體2B亞單位在C57BI/6小鼠生后腦聽覺功能發(fā)育中的作用[D];華東師范大學(xué);2002年

9 張永海;聽覺下行投射對(duì)耳蝸核背側(cè)核神經(jīng)元調(diào)控作用的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

10 蔡睿;早期豐富環(huán)境誘導(dǎo)中樞聽覺功能可塑性的細(xì)胞分子機(jī)制[D];華東師范大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳茜;電針耳穴對(duì)硫酸卡那霉素慢性致聾豚鼠聽皮層能量代謝可塑性影響的初步研究[D];四川醫(yī)科大學(xué);2015年

2 陳靈均;銀杏達(dá)莫對(duì)硫酸卡那霉素慢性致聾豚鼠聽皮層可塑性的影響及機(jī)制[D];西南醫(yī)科大學(xué);2016年

3 單珊;實(shí)驗(yàn)性聽覺剝奪對(duì)大鼠聽力的影響及生長相關(guān)蛋白-43在大鼠聽皮層中的表達(dá)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2009年

4 張萬明;微電流刺激豚鼠聽皮層后區(qū)對(duì)聽皮層前區(qū)神經(jīng)元聲反應(yīng)特性的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2012年

5 陳潔;關(guān)鍵期后窄頻噪音誘導(dǎo)聽皮層可塑性的細(xì)胞分子機(jī)制[D];華東師范大學(xué);2015年

6 胡婧楠;軸突生長抑制蛋白在聽覺剝奪大鼠聽皮層中的表達(dá)及其對(duì)聽皮層可塑性調(diào)控作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

7 涂厚義;電針耳穴對(duì)豚鼠聽皮層糖代謝及IGF-1表達(dá)的影響[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2014年

8 劉芳利;噪聲暴露后大鼠聽閾及聽皮層中谷氨酸脫羧酶67水平的變化[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

9 王玉杏;聽覺剝奪動(dòng)物模型的建立及BDNF/TrkB與聽皮層可塑性的關(guān)系[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

10 吳秀梅;生后早期經(jīng)驗(yàn)、活動(dòng)改變大鼠聽皮層NMDA受體NR2B亞單位蛋白表達(dá)[D];華東師范大學(xué);2006年

，

本文編號(hào)：2403414